siRNA沉默细胞外信号调节激酶1/2基因协同甲亢宁胶囊对大鼠甲状腺细胞-5细胞增殖的影响

目的通过甲亢宁胶囊(以下简称"甲亢宁")协同si RNA干扰大鼠甲状腺细胞-5(fisher rat thyroid cell line-5,FRTL-5)中细胞外信号调节激酶(ERK)1/2基因,观察并探讨甲亢宁对FRTL-5细胞RNA干扰ERK1/2基因表达及对FRTL-5细胞增殖的影响。方法将生长状态良好的FRTL-5细胞分为空白组、阴性对照组、甲亢宁组、si RNA组、甲亢宁协同组。利用si RNA沉默及甲亢宁协同干扰FRTL-5细胞的ERK1/2基因,RT-PCR检测ERK1/2 m RNA表达,Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖。结果 RT-PCR检测结果显示,空白组和阴性对照组ERK1/2的m RNA表达无明显差异(P>0.05);与空白组比较,si RNA组和甲亢宁组FRTL-5细胞ERK1/2 m RNA表达明显下降(P<0.01);与空白组、阴性对照组比较,甲亢宁协同组ERK1/2 m RNA表达明显下降(P<0.01);Western blott检测结果显示,与空白组、阴性对照组比较,甲亢宁组、si RNA组、甲亢宁协同组p-ERK1/2、ERK1/2蛋白表达相对量明显下降(P<0.01)。转染24、48 h后,CCK8法检测结果显示,甲亢宁组、si RNA组、甲亢宁协同组细胞增殖受抑制,与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论甲亢宁对ERK1/2磷酸化起阻断作用,ERK1/2基因被沉默后,对甲状腺细胞增殖有抑制作用,甲亢宁可协同ERK1/2-si RNA抑制FRTL-5细胞增殖。

甲亢宁胶囊对FRTL-5细胞周期的影响

目的观察甲亢宁胶囊(以下简称甲亢宁)对FRTL-5细胞周期的影响,探讨甲亢宁治疗Graves病的作用机制。方法将FRTL-5细胞分为基线组、模型组、甲亢宁组、甲巯咪唑组,采用MTT法检测甲亢宁不同浓度及作用时间对FRTL-5细胞的影响,分析甲亢宁的量效和时效关系,确定甲亢宁的浓度及作用时间;采用流式细胞技术检测甲亢宁对FRTL-5细胞周期的影响;采用Western Blot检测甲亢宁干预后FRTL-5细胞cyclin D1蛋白的表达水平。结果甲亢宁组处于G0G1期的FRTL-5细胞多于模型组(P <0. 01),处于S期的FRTL-5细胞少于模型组(P <0. 05),甲巯咪唑组处于各细胞周期的FRTL-5细胞与模型组间差异无统计学意义(P> 0. 05)。甲亢宁组FRTL-5细胞的cyclin D1蛋白表达水平低于模型组(P <0. 05),甲巯咪唑组与模型组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论甲亢宁能下调FRTL-5细胞cyclin D1的蛋白表达,阻滞FRTL-5细胞从Gl期进入S期,从而抑制细胞增殖。

甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用

目的探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体(TSAb)单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5)增殖作用和自噬的影响。方法体外培养FRTL-5细胞,采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系,并确定作用最佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清。将FRTL-5细胞分为模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清),中药低、中、高剂量组(M22刺激24 h后5%、10%、15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),正常组(15%空白大鼠血清)。采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中c AMP水平。确定高剂量(15%)甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用最强后再将FRTL-5细胞分为正常组(15%空白大鼠血清)、模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清)和中药组(M22刺激24 h后15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化,Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平。结果 M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系,确定1μg/m L M22于24 h增殖作用最佳。与正常组比较,模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强(P <0. 01),细胞上清液中c AMP释放量增加(P <0. 01),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少(P<0. 01);与模型组比较,中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制(P <0. 01),上清液中c AMP释放量减少(P <0. 05,P <0. 01),中药低剂量组作用差异无统计学意义(P>0. 05),中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高(P <0. 01)。透射电镜提示,模型组较正常组自噬小体的数量减少,而中药组较模型组增多。结论 M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常,而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常,进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用。

甲亢宁胶囊对Graves病小鼠甲状腺功能及Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察甲亢宁胶囊干预下Graves病小鼠甲状腺功能的改善情况及Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达变化,探讨甲亢宁胶囊治疗Graves病可能的分子机制。方法用表达促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor)A亚单位的重组腺病毒(Ad-TSHRα-289)免疫BALB/c雌鼠建立Graves病动物模型。将70只造模成功小鼠按随机数字表法分为模型组(20只)、甲亢宁胶囊干预组(中药组,25只)、甲巯咪唑片干预组(西药组,25只),另设正常对照组(正常组,15只)和空载病毒对照组(空载组,20只,注射Ad-null)。中药组予1.5 g/(kg·d)甲亢宁胶囊混悬液灌胃,西药组予2.5 mg/(kg·d)甲巯咪唑混悬液灌胃,其余各组每日予同体积生理盐水灌胃,药物干预5周。各组最终选取6个样本,观察小鼠甲状腺组织的病理变化;放射免疫法测定小鼠血清甲状腺素(thyroxine,T4),三碘甲状腺素原氨酸(triiodothyronine,T3),促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)及促甲状腺激素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)水平;Western blot法测定小鼠甲状腺组织Akt、p-Akt、mTOR及p-mTOR的表达量。结果(1)模型组甲状腺呈增生性改变,滤泡增大,大小不一,间质血管浸润。中药和西药组甲状腺组织结构明显恢复,滤泡增生有所缓解。(2)与正常组、空载组比较,模型组TRAb、T4及T3水平升高(P<0.01),p-Akt/β-actin、p-Akt/Akt、p-mTOR/β-actin及p-mTOR/mTOR比值均升高(P<O.01);与模型组比较,中药和西药组TRAb、T4及T3水平均降低(P<0.01),中药组p-mTOR/β-actin、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.01),西药组p-Akt/β-actin、p-Akt/Akt、p-mTOR/β-actin及p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05,P<0.01)。结论甲亢宁胶囊能降低Graves病小鼠甲状腺激素水平,降低mTOR的表达,其改善Graves病小鼠甲状腺功能的机制可能与这一影响有关。

甲亢宁对甲亢大鼠甲状腺激素及心钠素的影响

目的 :观察中药甲亢宁胶囊对甲亢大鼠模型的治疗作用。方法 :用甲状腺素片饲服的方法制作大鼠甲亢模型 ,将大鼠随机分成 7组 :正常对照组、空白对照组、甲亢宁 3.0g kg组、甲亢宁1.5g kg组、甲亢宁 0 .75g kg组、甲亢宁加他巴唑 1.2 5mg kg组和他巴唑组 ,14d后测定血清三碘甲腺原氨酸 (T3 )、甲状腺素 (T4)、促甲状腺激素 (TSH)含量及血浆心钠素 (ANP)水平。结果 :甲亢宁能降低甲亢大鼠血清T3 、T4含量及血浆ANP水平 ,提高血清TSH水平 ,对其体重降低有一定抑制作用。结论 :甲亢宁胶囊能有效降低实验性甲亢大鼠的甲状腺激素和心钠素水平。