破伤风类毒素对甲型副伤寒脱毒脂多糖的免疫增强作用

目的增强多糖抗原在婴幼儿中的免疫原性,提供有效的免疫保护。方法采用液体培养,收集菌体,脂多糖(LPS)提取,纯化脂多糖,活化脱毒多糖(O-SP)与破伤风类毒素(TT)共价结合。ELISA法检测O-SP及结合物的免疫效果。结果单纯甲型副伤寒脱毒脂多糖未能诱导小鼠产生抗体,而与TT结合后,具有良好的免疫原性,能产生体液免疫反应,诱导小鼠产生较高水平的抗脂多糖抗体和抗破伤风抗体。结论破伤风类毒类对甲型副伤寒脱毒脂多糖具有免疫增强作用。

胶乳凝集联合低滴度脂多糖-被动血凝试验对甲型副伤寒的诊断价值

目的 :寻求快速、简便、特异性强、敏感性高的甲型副伤寒血清学诊断方法 ;方法 :采用胶乳凝集试验 (LPS -Latex)及脂多糖 -被动血凝试验 (LPS -PHA)检测甲型副伤寒、伤寒患者血清 ,并同期检测非伤寒患者血清进行统计分析 ;结果 :单项低滴度脂多糖 -被动血凝试验及联合试验诊断甲型副伤寒符合率分别为 86.95%和 84.78% ,且分别与伤寒及非伤寒组比较有显著意义 (P <0 .0 5,P <0 .0 0 1 )。两项试验假阳性率分别为 1 2 .50 %及 0 (P <0 .0 0 1 ) ;结论 :胶乳凝集联合低滴度脂多糖 -被动血凝试验诊断甲型副伤寒简便、快速 ,有较高敏感性和特异性。

广西桂林市1999～2008年甲型副伤寒病后带菌队列研究

目的了解甲型副伤寒病后带菌情况及带菌状态与脂多糖(LPS)IgG抗体滴度的关系。方法采用历史性队列研究方法,随访桂林市1999～2008年发病的甲型副伤寒患者328例,采集其3次粪便标本培养甲型副伤寒菌,同时采集血样进行LPS IgG测定。结果 328例分布于9个县区43个乡镇(街道)。328例中处于恢复期病例20例,检出带菌6例,恢复期带菌率30.00%,95%CI(12%,54%);恢复期带菌者主要原因为发病时用药不规范。处于慢性期患者308例,检出慢性带菌1例,慢性带菌率为0.32%,95%CI(0.1%,5.6%);该慢性带菌者为伴胆囊结石和肾囊肿的中年肥胖女性,病后18个月仍携带甲型副伤寒菌。7例带菌者予氨苄青霉素加左氧氟沙星联合用药连续2周,消除带菌状态。带菌者血清LPS IgG平均滴度1∶97.14,高于无带菌状态的既往病例平均滴度1∶8.59(P<0.05)。结论防控甲型副伤寒中应做好病例管理,规范、合理、全程使用抗生素;在治疗甲型副伤寒病人时,应注意伴胆道疾患或慢性泌尿系统疾患者,如治疗不彻底易发展成慢性带菌。

甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

目的建立甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以甲型副伤寒沙门菌体脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为包被抗原,HRP标记的羊抗小鼠IgG作为二抗,TMB作为显色剂,建立检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法,优化间接ELISA法的试验条件,并进行验证。取2批甲型副伤寒结合物原液,分别经NIH小鼠大腿内侧皮下各免疫3次,间隔14 d,第2、3次免疫后7 d采血,按建立的间接ELISA法检测血清中甲型副伤寒沙门菌抗体水平,计算抗体阳转率。结果抗原的最适包被浓度为2μg/ml,血清最适稀释倍数为1∶80,酶标二抗的最适稀释比例为1∶6 000;包被抗原与血清的最适反应时间为2 h,血清与酶标二抗的最适反应时间为1 h,封闭液室温下最适封闭时间为2 h。用建立的方法检测20只小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清,血清稀释500倍阳性检出率仍不低于80%;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清的试验内和试验间变异系数分别为4.6%和7.5%,检测阴性血清样品的试验内和试验间变异系数分别为9.4%和13.9%,均低于15%;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清和甲型副伤寒结合物原液免疫阳性血清的结果为阳性,检测乙型副伤寒结合物小鼠免疫阳性血清、伤寒Vi多糖结合物小鼠免疫阳性血清及阴性血清的结果为阴性。两批甲型副伤寒结合物原液免疫小鼠在第2针免疫后7 d的血清阳转率均为10%,第3针免疫后7 d的血清阳转率均为100%。结论建立的检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法灵敏度较高,精密性良好,特异性较强,可用于评价甲型副伤寒结合疫苗的免疫原性。