寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎的作用

目的探讨寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染小鼠肺炎的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg/kg)、连花清瘟颗粒组(3.3 g/kg)和寒喘祖帕低、中、高剂量组(0.38、0.76、1.52 g/kg)。除正常组外,其余组小鼠均采用甲型流感病毒H1N1/PR8株病毒液经滴鼻感染建立肺炎模型。各组连续给予相应药物4 d,取样。测定小鼠体质量、肺指数及抑制率、流感病毒载量、14 d内小鼠死亡率、生存时间;ELISA法检测肺组织中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理改变并评分。结果寒喘祖帕颗粒中、高剂量组可降低感染后小鼠肺指数,其肺指数抑制率分别为24.01%、32.63%;可降低死亡率,其死亡保护率分别为44.44%、50%。寒喘祖帕低、中、高剂量组均可降低小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平,改善小鼠肺部病变,延长平均存活天数,生命延长率分别为17.84%、24.32%、19.46%。结论寒喘祖帕颗粒可改善流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎症状,可降低死亡率、延长平均存活天数。

黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用研究

目的:研究不同来源黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用。方法:制备流感病毒空斑模型,通过预防保护(病毒吸附前给药)和治疗(病毒吸附后给药)2种模式观察黄芩苷对流感病毒不同阶段的抑制作用并结合神经氨酸酶抑制试验寻找其可能的作用位点。结果:2种受试黄芩苷样品A和样品B对MDCK细胞毒性(半数有毒浓度,TC50)分别为0.099 mg/mL和0.8 mg/mL;黄芩苷A在预防保护和治疗模式中均未发现明显的病毒抑制作用(IC50>0.3mg/mL);黄芩苷B在预防保护和治疗模式中的半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.08和0.045mg/mL(选择指数SI为10和17.7),并对神经氨酸酶(NA)活性显示一定的抑制作用(IC50=51.7μg/mL)。结论:市售商品化黄芩苷B有确定的体外抑制流感病毒PR8株的作用。

热毒宁吸入溶液对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染所致小鼠病毒性肺炎的药理作用研究

目的探讨热毒宁吸入溶液对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠致肺炎模型的药理作用,为临床应用提供基础。方法实验动物按体质量随机分为8组,分别为正常对照组、模型对照组、利巴韦林对照组、热毒宁注射给药对照组,热毒宁雾化吸入给药高剂量组0.23 g生药/kg(20 min)、中剂量组0.12 g生药/kg(10 min)、低剂量组0.06 g生药/kg(5 min)和极低剂量组0.03 g生药/kg(2.5 min)。采用甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠致肺炎模型,通过检测肺指数、肺部病理变化及肺组织中病毒载量、炎症因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量等指标评价热毒宁吸入溶液治疗流感病毒性肺炎的药理作用。结果热毒宁吸入溶液4个剂量组均可不同程度上降低小鼠肺指数、减轻肺组织病理损伤、降低病毒载量及减少IL-6、TNF-α的含量。结论热毒宁吸入溶液雾化吸入给药对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染所致小鼠病毒性肺炎具有显著治疗作用。

甲型流感病毒H1N1 pdm09与PR8感染C57BL/6小鼠诱生特异性CD8^+T细胞免疫应答的比较研究

目的比较甲型流感病毒H1N1两亚型毒株A/Shanghai/37T/2009(H1N1)(pdm09)临床分离株和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)标准株感染C57BL/6小鼠后,其病理状态的改变及诱生特异性CD8+T细胞的免疫反应。方法①用9.85×10 6半数组织细胞感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID 50 )的PR8和pdm09病毒分别滴鼻感染野生型C57BL/6小鼠,每日(连续14 d)观察其状态并记录死亡情况。于感染后第1、3天处死小鼠,取其肺称重计算肺指数;左叶肺经4%多聚甲醛固定后进行H&E(hematoxylin-eosin staining)染色,观察感染后肺的病理变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺病毒载量。②用0.25倍半数致死量(lethal dose 50%,LD50)的PR8和pdm09分别滴鼻感染小鼠,每日称重连续观察。于感染后第8天解剖取肺和脾,通过H&E染色比较肺部病理改变;通过流式细胞术(FACS)检测脾病毒特异性CD8+T细胞数量比例,以及IFN-γ、TNF-α、IL-2、granzyme B等细胞因子和免疫抑制检查点分子PD-1、LAG-3、Tim-3、CTLA-4的表达情况。结果①以相同TCID 50 流感病毒感染后,两组小鼠均出现疾病状态。PR8组小鼠感染第5天全部死亡,死亡率显著高于pdm09组( P<0.01);第1、3天肺指数和病毒载量的结果PR8组均显著高于pdm09组;H&E染色结果显示PR8组病理损伤严重,肺泡壁增厚,出现肺实质化,血细胞渗出增多,而pdm09组小鼠肺组织病理损伤较轻,炎症浸润少;②以相同LD50流感病毒感染后,PR8组小鼠的体重损失和肺组织病理损伤均比pdm09组严重;流式结果显示PR8组诱生的病毒特异性CD8+T细胞比例高于pdm09组,但是PR8组中活化的CD8+T细胞(CD8+CD44 High )表达的IFN-γ、IL-2和TNF-α显著低于pdm09组;检测该群细胞免疫功能耗竭分子,发现其表达了更多的免疫抑制分子PD-1和LAG-3。结论 PR8相对于pdm09能够对小鼠造成更严重的损伤,可能是因为其活化的特异性的CD8+T细胞出现功能耗竭导致特异的免疫保护力受损,抵抗和清除病毒的能力下降,故而造成更严重的病理损伤。

葛根汤颗粒对甲型流感病毒感染小鼠TNFR1/NF-κB/JNK等炎症和免疫指标的影响

目的基于PR8感染所致病毒性肺炎小鼠模型,探寻葛根汤颗粒抗流感病毒性肺炎损伤的作用机制。方法32只雌性SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、奥司他韦组、葛根汤颗粒组,每组8只。滴鼻法建立PR8毒株感染所致病毒性肺炎小鼠模型,计算肺指数和肺指数抑制率,应用光镜观察各组肺组织病理变化,运用ELISA和Western blotting法检测各组肺组织炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM1)和炎性免疫蛋白人肿瘤坏死因子受体-1(TNFR1)、核转录因子-κB(NF-κB)、Jun氨基末端激酶(JNK1)表达情况。结果与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低小鼠肺指数(P<0.001),葛根汤颗粒组对肺指数抑制效果优于奥司他韦组。病理提示,与模型组比较,葛根汤颗粒组可显著减轻支气管炎症反应渗出,减轻肺泡、肺间质和红细胞渗出。ELISA结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可显著降低IL-6、ICAM1、VCAM1的表达(P<0.001);与奥司他韦组相比,葛根汤颗粒组IL-6含量降低(P<0.01)。Western blotting结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低TNFR1、JNK1蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),葛根汤颗粒可降低NF-κB蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根汤颗粒可以降低甲型流感病毒感染小鼠肺组织中IL-6、ICAM1、VCAM1、TNFR1、NF-κB、JNK等炎性因子和炎性免疫蛋白的表达,调节炎症和免疫紊乱,为仲景经典处方临床应用提供基础理论依据。

Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒感染者特异性CD8+T细胞的调控作用

目的检测Notch受体和配体在甲型H1N1流感患者中的表达,观察Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒特异性CD8+T细胞的调控作用。方法本研究入组轻症甲型H1N1流感患者27例、重症甲型H1N1流感患者11例和健康对照者18例。实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中Notch受体和配体mRNA的相对表达量。PBMC与Notch信号通路抑制剂DAPT刺激培养24 h后,流式细胞术检测病毒特异性CD8+T细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的变化,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测病毒特异性CD8+T细胞分泌穿孔素和颗粒酶B的变化。纯化HLA-A2限制性患者CD8+T细胞,DAPT刺激培养24 h后建立与甲型H1N1病毒株感染的NCI-H345细胞的直接接触和间接接触培养系统,通过检测乳酸脱氢酶的释放计算CD8+T细胞诱导靶细胞死亡比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清TNF-α和IFN-γ水平,评估CD8+T细胞非细胞杀伤功能。结果轻症和重症甲型H1N1流感患者PBMC中Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)和Notch配体(DLL1、DLL4、Jagged1、Jagged2)mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05)。重症甲型H1N1流感患者病毒特异性CD8+T细胞分泌IFN-γ的细胞比例、分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量均高于轻症患者(P<0.05)。DPAT刺激抑制甲型H1N1流感患者病毒特异性CD8+T细胞分泌TNF-α和IFN-γ的细胞比例以及分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量(P<0.05)。直接培养系统中,DAPT刺激均可降低病毒特异性CD8+T细胞诱导的靶细胞死亡比例(P<0.05),培养上清中TNF-α和IFN-γ水平均亦降低(P<0.01)。间接接触培养系统中,虽然DAPT刺激后培养上清TNF-α和IFN-γ水平降低(P<0.01),但CD8+T细胞诱导的靶细胞死亡比例的差异在经DAPT刺激和无DAPT刺激之间的差异无统计学意义(P=0.149)。结论甲型H1N1流感患者中升高表达的Notch受体和配体可增强病毒特异性CD8+T细胞的直接细胞杀伤功能,促进疾病进展。

甲型H1N1流感病毒感染年轻和老年C57BL/6小鼠 诱导肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答的比较研究

目的比较甲型H1N1流感病毒PR8毒株感染老年和年轻C57BL/6小鼠诱导肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答的能力。方法使用490 PFU的PR8病毒分别滴鼻感染年轻(3月龄)和老年(24月龄)C57BL/6小鼠,连续14 d每日记录其体重变化及死亡情况。在感染后第8天分离小鼠肺组织细胞,使用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测病毒抗原特异性CD8^(+)T细胞数量及功能:MHC-I表位肽四聚体法(tetramer staining)染色流感特异性CD8^(+)T细胞,细胞内细胞因子染色法(intracellular cytokine staining,ICS)检测CD8^(+)T细胞经流感病毒特异性肽刺激后分泌细胞因子水平包括TNF-α、IFN-γ、IL-2以及与CD8^(+)T细胞杀伤功能有关的颗粒酶B(Granzyme B)的水平。结果相同量的PR8流感病毒感染小鼠后,老年小鼠体重下降更多,死亡率显著高于年轻小鼠(P<0.01)。另一方面,老年组小鼠诱生的病毒特异性CD8^(+)T细胞比例显著低于年轻组;同时,老年组CD8^(+)T细胞活化后分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的水平显著低于年轻组;此外,老年组CD8^(+)T细胞表达granzyme B的水平同样显著低于年轻组。结论PR8流感病毒感染老年和年轻C57BL/6小鼠后,老年小鼠肺组织诱导产生的特异性CD8^(+)T细胞的数量减少且功能降低。结果表明:与年轻小鼠相比,老年小鼠肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答功能受损。

受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型H1N1流感病毒感染小鼠记忆性CD8^+T细胞的应答

受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)是坏死复合体的关键成分之一,介导细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的发生。前期研究发现流感抗原特异性CD8^+T细胞的初次应答部分依赖于RIPK3分子,为探讨其在记忆性CD8^+T细胞应答中的作用,对初次感染后的C57BL/6小鼠在免疫记忆阶段进行了再次感染,并用流式细胞仪检测了流感病毒特异性的记忆性CD8^+T细胞的表型和功能。结果发现小鼠初次感染甲型H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34后37d,RIPK3敲除小鼠的CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力均显著低于野生型小鼠;在再次感染相同病毒时,RIPK3敲除小鼠流感病毒特异性CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子IFN-γ的能力依旧显著低于野生型小鼠;而CD8^+中枢型记忆性T细胞(TCM)比例显著高于野生型小鼠,效应型记忆性T细胞(TEM)或效应性T细胞(TEff)比例却显著低于野生型小鼠。提示RIPK3分子参与调节流感病毒特异的记忆性CD8^+T细胞诱生数量和分泌细胞因子功能,并影响其TCM与TEM/TEff的比例,为深入探索病毒特异的记忆性CD8^+T细胞应答的分子机制提供了新线索。

复方中药对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)感染小鼠淋巴细胞功能和细胞因子的影响

目的观察复方中药对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)感染小鼠淋巴细胞功能和细胞因子的影响。方法90只BALB/c小鼠随机分为6组,每组15只,分别为空白对照组、模型对照组、盐酸金刚烷胺对照组(100 mg/kg)、复方中药高剂量组(1.5 g/kg)、中剂量组(0.75 g/kg)与低剂量组(0.375 g/kg)组。中药组连续灌胃2 d后,空白对照组滴鼻生理盐水,其他5组小鼠滴鼻流感病毒感染建立流感病毒小鼠模型,模型建立4 h后空白对照组和模型对照组灌胃去离子水,药物组灌胃不同剂量药物,连续5 d。灌胃结束后无菌取血,小鼠安乐死,取胸腺和脾脏,计算胸腺指数和脾脏指数;采用MTT测定各组的T、B淋巴细胞转化率;ELISA检测肺组织中的细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平。结果与空白对照组相比,模型对照组胸腺指数和脾脏指数,T、B淋巴细胞A值,IL-10和IFN-γ显著下降,TNF-α和IL-6显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,复方中药中剂量组胸腺指数和脾脏指数,T、B淋巴细胞A值,IL-10和复方中药高剂量组IFN-γ显著增高,复方中药中剂量组IL-6显著下降(P<0.05),复方中药中、低剂量组TNF-α显著下降,IFN-γ显著升高(P<0.01)。结论复方中药通过调节机体淋巴细胞功能和细胞因子分泌水平,从而改善肺部炎症,是治疗病毒性流感的作用机制之一。

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞脱氧核糖核酸氧化损伤的研究

目的:通过检测DNA损伤标志物8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)在甲型H1N1型流感病毒感染MDCK细胞中的表达,初步探讨甲型H1N1型流感病毒诱导细胞凋亡的脱氧核糖核酸(DNA)损伤机制。方法:MDCK细胞培养后,甲型H1N1流感病毒感染继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h,细胞爬片免疫组织化学方法检测各时间点DNA损伤标志物8-oxo-dG的表达。结果:甲型H1N1流感病毒感染后各时间点实验组MDCK细胞8-oxo-dG的表达均显著高于相应的正常对照组(P<0.05),病毒感染各组间两两比较发现各组间差异显著。结论:甲型H1N1流感病毒感染能造成宿主细胞DNA氧化损伤。

流式细胞仪分析甲型流感病毒感染T淋巴细胞

一直以来人们认为流感病毒仅在局部增殖,一般不入血,其产生的毒素样物质入血,引起全身症状.目前,已有实验证实,甲型流感病毒不仅侵入呼吸道上皮细胞,也能感染末梢血免疫细胞[1].为进一步了解甲型流感病毒感染与末梢血淋巴细胞亚类的关系,我们采用流式细胞仪分析测定甲型流感病毒对CD+4细胞和CD+8细胞的感染率,以了解甲型流感病毒对机体免疫功能的影响.

滨蒿总黄酮体内外抗甲型流感病毒作用的研究

目的研究滨蒿总黄酮在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法将昆明小鼠随机分为7组,即滨蒿总黄酮0.10,0.20和0.40g·kg-1组、利巴韦林组、复方一枝蒿颗粒组、病毒对照组和对照组,采用甲型流感病毒PR/8/H1N1滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,连续灌胃给药7d。计算肺指数并测定肺匀浆中IL-6和IL-8的水平;体外Cytopathic effect(CPE)法观察滨蒿总黄酮抗甲型流感病毒A/京防/262/95(H1N1)的作用。结果滨蒿总黄酮0.10,0.20和0.40g·kg-1给药后能明显降低甲型流感病毒PR/8/H1N1感染小鼠的肺指数,明显降低肺匀浆中的IL-6水平(P<0.01);滨蒿总黄酮0.40g·kg-1剂量组可明显降低肺匀浆中IL-8的水平(P<0.05);滨蒿总黄酮在体外对A/京防/262/95(H1N1)的IC50值为6.9μg·mL-1,治疗指数(SI)为55.1。结论滨蒿总黄酮对甲型流感病毒感染小鼠有明显的治疗作用,对甲型流感病毒所致细胞病变有明显的抑制作用,表明其有良好的抗甲型流感病毒作用。

银芩抗感微丸对流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用

目的:研究银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用。方法:在滴鼻感染正常小鼠建立流感病毒肺感染模型的基础上,检测小鼠的肺指数与肺病毒载量。结果:银芩抗感微丸各剂量组均可明显降低甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的肺指数与肺病毒载量。结论:银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠具有一定的治疗和保护作用。

宣肺败毒颗粒增加T细胞数量减轻流感病毒肺炎的机制研究

[目的]确定宣肺败毒颗粒在低温高湿环境下,A/PR/8/34(H1N1)流感病毒肺炎小鼠模型的治疗效果及作用机制。[方法]将ICR小鼠置于具有低温高湿环境的人工气候箱中,滴鼻给予流感病毒(A/PR/8/34)建立流感病毒肺炎模型。造模后第5天对小鼠每日给予宣肺败毒颗粒灌胃5 d,观察记录小鼠的行为学评分、体质量、脏器指数、肺部病毒载量、肺部影像学及形态学变化,蛋白印迹法检测炎症关键蛋白NF-κB的表达变化,流式细胞术检测宣肺败毒颗粒对小鼠免疫应答的调节。[结果]与模型组相比,宣肺败毒颗粒给药后小鼠表现出活跃程度上升、大便性状正常、肺部病毒载量降低、小鼠肺部炎性渗出减少,p-NF-κB P65表达降低,CD4+和CD8+T细胞百分比增高。[结论]宣肺败毒颗粒增加T细胞数量,减轻流感病毒肺炎小鼠的炎症反应。

H1N1流感病毒树鼩模型生物学特性的研究

目的建立H1N1流感病毒感染树鼩模型,探讨流感病毒动力学变化和在呼吸系统组织中的分布特征。方法选择3~3.5周岁成年树鼩(Tupaia Belangeri Chinensis)24只,雌雄各半,随机分为空白组(B组)和模型组(M组)各12只,使用H1N1流感病毒每只600μL(1×10^(6.8)TCID50/0.1 mL)经鼻腔感染M组树鼩,在-3~10 d期间每天早晨测量肛温,同时采集咽拭子、鼻拭子和血液样本测定病毒载量。并测定2、4、7 d血液中抗流感的中和抗体。2、3、5、10 d随机处死3只树鼩,采集鼻甲、气管、咽部和肺组织进行病毒载量检测,取3、5、10 d组织进行病理学检测。结果M组的树鼩表现为被毛蓬乱、食欲不振、运动迟缓、体温升高和鼻咽分泌物增加等临床症状;感染后1 d开始可以在呼吸道中检测到病毒载量,3 d血液中出现病毒载量;病理结果显示鼻甲、咽、气管和肺组织中均有一定程度的病理改变。结论树鼩感染流感病毒后出现的临床症状与人类极为相似,所建立的流感树鼩模型对研究流感的发病机制与抗流感药物评价提供了有重要价值的工具。

全球首例甲型H10N8禽流感病毒感染导致重症肺炎死亡病例分析

目的报告全球首例人感染甲型H10N8禽流感病例的救治经过，对比其与人感染H7N9禽流感的病例特点，给临床诊疗提供依据。方法2013年11月30日江西省南昌市出现首例人感染甲型H10N8禽流感死亡病例，分析其临床病症及流行病学调查，并与以往人感染H7N9禽流感的临床病症进行比较分析。结果73岁女性患者，因咳嗽、咳痰、胸闷3d，发热1d，于2013年11月30日入住南昌大学第三附属医院呼吸科；12月2日因病情加重转入重症医学科重症监护病房（ICU）；12月5日病情进展出现器官功能衰竭（MOF）；12月6日08：30出现心脏停搏，抢救无效死亡。①流行病学调查：该患者为老年人，有多种慢性病（高血压、冠心病、重症肌无力等）、免疫功能受损（胸腺瘤切除术后）等易感因素；且在就诊前1周有活禽经营市场暴露史，发病前患者家中有感冒症状者；传播途径为经呼吸道传播，与人感染H7N9禽流感相似。②临床表现：该患者有流感样症状，如咳嗽、发热（39．1℃），但没有头痛、肌肉酸痛，2-3d出现重症肺炎并进行性加重，伴呼吸窘迫，从气管插管内吸出大量血水样痰（2000mL／24h），病情迅速进展，出现急性肾损伤、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、脓毒性休克及意识障碍等，与人感染H7N9禽流感相似。③辅助检查：该患者除淋巴细胞比例降低（0．070）、天冬氨酸转氨酶（AST）轻度升高（57u／LJ）、C-反应蛋白（CRP）升高（〉200mg／L）外，血小板、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸转氨酶、肌红蛋白均不升高，白细胞总数略升高（10．34x109／L），这与人感染H7N9禽流感病例特征不相符。肺部感染实变影进行性扩展；与H7N9禽流感一致。④诊疗：依据患者临床表现、肺部感染实变影进行性增大、有流行病学史，故考虑甲型禽流感可能。虽然在早期就给予治疗量的奥司他韦抗病毒，以及积极的呼吸、循环支持和抑制免疫反应等综合治疗，但患者最终因呼吸衰竭、休克而死亡。⑤经中国疾病预防控制中心（CDC）证实，该患者为甲型H10N8禽流感，与该患者密切接触者经南昌市及中国CDC多次筛查均未感染。结论人感染甲型H10N8禽流感与人感染H7N9禽流感并不完全雷同，很难从传统的实验室指标得到提示；临床病症及流行病学史是诊断的要件。参照人感染H7N9禽流感治疗方案给予神经氨酸酶抑制剂治疗H10N8禽流感患者并未逆转肺部的恶化进程。中国CDC检测发现甲型H10N8禽流感病毒导致人感染和传播的风险低。

小槐花提取物对甲型H1N1流感病毒感染的体外抑制作用

采用CCK8法测定小槐花提取物在MDCK细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration,MNTC);建立甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1,PR8)感染MDCK细胞模型,CCK8法检测其对病毒感染细胞病变的抑制作用;利用荧光定量PCR及免疫印迹方法,检测小槐花提取物对流感病毒基因、蛋白,以及宿主炎症相关转录因子和炎性细胞因子表达的影响。细胞毒性试验结果显示,小槐花提取物对MDCK细胞的MNTC为100 mg/L;qRT-PCR结果显示,小槐花提取物能显著抑制PR8流感病毒M与NP基因的mRNA表达(P<0.01),也可显著下调病毒感染细胞的转录因子NF-κB p65、STAT3及炎性细胞因子IL-1β、TNF-α基因的表达水平,且其抑制作用与药物浓度正相关;免疫印迹法检测显示,100 mg/L的小槐花提取物极显著抑制了流感病毒M1蛋白的表达(P<0.01)。小槐花提取物具有较显著的体外抗流感病毒效果,此研究结果为从小槐花中鉴定具有抗流感病毒的确切药效成分奠定基础。

黄金方防治甲型H_1N_1流感病毒感染小鼠肺炎的实验研究

目的:观察黄金方对甲型H1N1流感病毒FM1株和PR8株感染小鼠肺炎的防治作用。方法:采用滴鼻感染正常小鼠和免疫低下小鼠建立流感病毒感染肺炎模型,分别采用治疗和预防性给药,观察对小鼠肺指数、死亡率、生存时间的影响。结果:治疗给药试验中黄金方大剂量组(6 g.kg-1)、中剂量组(3g.kg-1)可明显降低正常小鼠感染流感病毒FM1株或PR8株后肺指数(与模型组比较,P<0.05),3个剂量组均可明显减少正常小鼠感染流感病毒FM1株或PR8株后死亡率并延长生存时间(与模型组比较,P<0.01);预防给药试验中黄金方大剂量组(6 g.kg-1)、中剂量组(3 g.kg-1)可明显降低免疫低下小鼠感染流感病毒FM1株或PR8株后肺指数(与模型组比较,P<0.05),3个剂量组均可减少正常小鼠感染流感病毒FM1株后死亡率并明显延长生存时间(与模型组比较,P<0.01)。结论:黄金方在体内对H1N1流感病毒感染有较好的治疗和预防作用。

葛根汤颗粒治疗上呼吸道感染所致小鼠病毒性肺炎及死亡保护作用

目的:研究葛根汤颗粒对甲型H_(1)N_(1)流感病毒PR8株感染致小鼠病毒性肺炎模型的治疗及死亡保护作用。方法:采用甲型H1N1流感病毒(PR8株)滴鼻感染小鼠造成病毒性肺炎模型,观察小鼠的肺指数和肺指数抑制率,肺内细支气管及肺组织苏木精-伊红(HE)染色病理切片镜下病变观察及等级评分;同时采用流感病毒PR8毒株滴鼻感染小鼠造成死亡保护模型,观察小鼠感染后2周内的死亡情况,计算小鼠的死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。结果:葛根汤颗粒高、中剂量组可显著降低模型组小鼠肺指数(P<0.01);葛根汤颗粒高、中剂量组与模型组比较可显著减轻支气管炎症反应渗出状况,红肿相对消退,并且缓解病毒感染所致肺泡、肺间质渗出炎症反应及红细胞渗出情况(P<0.01,P<0.05);模型组小鼠死亡率90%,平均存活天数9.95 d,葛根汤颗粒3个剂量组与模型组比较可显著降低小鼠死亡率,延长小鼠平均存活天数,提高生命延长率(P<0.01,P<0.05)。结论:本研究发现葛根汤颗粒可显著降低病毒性肺炎模型小鼠的肺指数,并显著减轻病毒感染所致的小鼠肺内细支气管及肺局部炎症反应损伤,对模型小鼠的肺部炎症反应有明显的治疗作用;同时可显著降低模型小鼠死亡率,延长平均存活天数,提高生命延长率,对感染小鼠有死亡保护作用。