甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1株)口服免疫小白鼠抗体反应

为研究甲型肝炎减毒活疫苗（L－A－1株）口服免疫的免疫原性，114只小白鼠1次口服免疫后1～8周内，每周收集肠洗液和血清样品，用ELISA方法检测特异抗体反应。111只小白鼠检测到阳性抗体反应，阳转率为93．37％。肠洗液S－IgA阳转率高峰在第1和第6周（65％和64％）。血清IgA于第一周未测到，其高峰在第6周（100％）。IgM于第1周即达高峰（88％），IgG于第3周达高峰（88％）。至第8周末，S－IgA维持在40％，IgA、IgM和IgG分别维持在90％，80％和80％。实验结果表明，该疫苗口服免疫后具有良好的免疫原性，可激活小白鼠的局部与全身免疫反应。

甲型肝炎减毒活疫苗(LA-1株)大规模免疫长期效果观察

目的:观察甲型肝炎减毒活疫苗(LA-1株)大规模接种的长期保护效果和不同免疫程序的免疫持久性。方法:212985例1.5-10岁儿童随机分成疫苗组和对照组。疫苗组每人接种1针甲肝疫苗,接种1mo后观察两组甲肝发病隋况。6-9岁的甲肝抗体(抗HAV)阴性儿童156例按年龄和性别均衡分为A、B、C组,A组接种1剂疫苗,B组按0、6 mo、C组按0、12 mo程序分别接种2剂疫苗,然后随访各组抗HAV变化。结果:甲型肝炎3a累积发病率在对照组为63.25/10万(71/112250),疫苗组为1.99/10万(2/100735),保护率96.85％(95％CI下限为92.44％)。A组免疫后6、12、24、36 mo抗HAV阳性率分别为91％、89％、89％、80％,抗体几何平均滴度(GMT)分别为106、105、106、99 mIU/ml;B组7、12、24、36 mo的阳性率分别为100％、98％、95％、98％,GMT分别为1204、773、489、459 mIU/ml,C组12、13、24、36 mo的阳性率分别为82％、100％、100％、97％,GMT分别为92、3463、596、506 mIU/ml。B、C组在第36个月的GMT分别是A组的4.6倍和5.1倍,阳性率高于同期A组(P=0.008)。结论:甲肝减毒活疫苗(LA-1株)1针免疫有高而持久的保护效果和免疫原性;2针免疫可显著提高其免疫持久性;0、6程序与0、12程序的长期免疫效果相同。

甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1)猴体安全性及免疫原性研究

[目的 ]研究甲型肝炎减毒活疫苗 (L A 1)猴体安全性及免疫原性。 [方法 ]对 10年来生产的甲型肝炎减毒活疫苗的猴体试验结果作回顾性分析 ,每年选取 1批制品 ,于当年接种 5只恒河猴 ,于 0、4、8周肝穿做肝组织病理检查及ALT检测 ,并于 0、2、4、8周采血测定 抗HAV阳转情况。 [结果 ]恒河猴接种甲肝疫苗后肝组织病理未见异常 ;8周时抗 HAV10 0 %阳转。 [结论

甲型肝炎减毒活疫苗(LA—1株)在1岁幼儿0、6个月免疫程序中的效果观察

为了了解1岁幼儿0、6个月免疫程序接种甲肝减毒活疫苗的免疫效果,我们观察了95例1岁健康儿童的免疫效果。本次研究采用ELISA免疫竞争抑制法检测1岁幼儿初免1针2个月后和按0、6个月程度免疫接种2针2个月后血清抗—HAV—IgG抗体。结果:两者抗体阳性率分别为:78.95%(75/95)和97.89%(93/95);GMT分别为1:5.76和1:12.48。经统计学处理,阳性率和GMT两者都存在非常显著性差异。按0、6个月免疫程序接种的血清免疫效果明显优于初免1针的效果。0、6个月免疫程度接种甲肝减毒活疫苗值得大力推广。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)人体免疫学效果观察

从４个观察点筛选出ＡＬＴ正常、抗ＨＡＶ阴性、无禁忌症的４～１８岁易感者５０８名，进行了５个不同批号的甲型肝炎减毒活疫苗（Ｈ２株）人体接种观察。接种疫苗后３天内每日观察接种反应，所有接种者无局部及全身反应。１个月随访期间未见与肝炎有关的副反应。免后８～１２周抗体阳转率为８８．７％～９１．５％，ＧＭＴ为２．７３～４．８８％。３～５周ＨＡＶＩｇＭ阳转率为３．６％～１８．１％。收集了３２名志愿者的大便２０５份，用ＫＭＢ１７细胞分离，阳性９８份，分离率４７．８％。３２人中有３０人排毒，排毒率９３．８％。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗的研制

［摘 要］目的 研制冻干甲肝减毒活疫苗，提高疫苗的稳定性，便于保存及运输，保证疫苗的接种效果。方法 采用CA－9冻干保护剂，制备冻干疫苗，疫苗液与保护剂之比为3．5∶1。结果 冻干甲肝减毒活疫苗具有与液体疫苗相同的安全性及免疫原性。在2～8℃保存的有效期较液体疫苗的3～5个月提高到18个月。在室温和37℃保存的稳定性也明显提高。结论 冻干甲肝疫苗的稳定性良好，无需低温保存、冷链运输，便于甲肝疫苗的大规模推广应用。

甲型肝炎减毒活疫苗的研究Ⅱ.实验性疫苗的研制

用H_2M_(20)K_5(32℃)甲型肝炎减毒株在KMB_(17)人胚肺二倍体细胞上制备一批实验性甲型肝炎减毒活疫苗。经暂定的生物制品检定项目检测,疫苗内不含外源因子,感染性滴度为10^(6.5)TCID_50/ml,疫苗病毒为HAV。12只猕猴体内试验表明,疫苗接种后不引起具临床重要意义的肝炎指征,但可使全部猕猴产生抗HAV抗体。本批疫苗的安全性和免疫原性在猕猴体内得到证实,有必要在少量人群中作进一步试用观察。

甲型肝炎减毒活疫苗免疫程序的探讨

５２名ＨＡＶ抗体阴性的儿童，按０、３个月免疫程序，经２针低剂量（５．５０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ）甲型肝炎减毒活疫苗免疫，于第２针接种后７天检测ＨＡＶ抗体阳转率为１００％，抗体效价ＧＭＴ值为１∶１４；全部接种儿童的ＡＬＴ均在正常范围内（２～２４μｌ）；免前ＨＡＶ抗体阳性的儿童，经２针免疫后。

甲型肝炎减毒活疫苗冻干保护剂的研究

目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂。方法 甲型肝炎病毒L-A-l株经2BX二倍体细胞培养,制备成甲型肝炎减毒活疫苗,再添加不同保护剂进行冷冻干燥。结果 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂,对甲型肝炎减毒活苗病毒显示了较好的保护性,疫苗冻干前后感染滴度下降在1.0Log CCID50/ml以内,符合《中国生物制品规程》要求。结论 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂是一种安全性较高、疫苗冻干效果较好,适合于疫苗规模化生产的保护剂。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)的免疫原性研究

本文对国产甲型肝炎减毒活疫苗（Ｈ２株）的免疫原性进行了研究。使用随机分组对照的方法，给１９５名儿童和青年易感者分别接种３种剂量甲型肝炎减毒活疫苗，近期免疫应答效果显著，阳转率分别为７９．５％、９０．４％、９７．５％；几何平均浓度分别为８１．２、１０１．５、２６６．３ｍＩｕ／ｍｌ；免疫应答呈明显的剂量－效应关系。在本研究使用的剂量条件下，年龄因素对抗体应答没有明显的影响。

动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的研究

探讨动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的可行性。参照《中国药典》2015年版通则1143细菌内毒素检测法中动态浊度法,对甲肝疫苗进行标准曲线可靠性试验、干扰初筛试验、干扰验证试验及内毒素含量的测定,同时与经凝胶法检定合格的同批疫苗进行比较。标准曲线可靠性试验结果符合规定。干扰初筛试验疫苗稀释160、320及640倍,回收率在50%~200%之间,均无干扰,符合要求。干扰验证试验结果进一步表明：疫苗稀释160倍对试验无干扰作用。采用动态浊度法检测的10批甲肝疫苗细菌内毒素含量均小于该疫苗的限值L=20 EU/m L,且与经凝胶法检定的同批疫苗结果一致。采用动态浊度法检测甲肝疫苗细菌内毒素含量是可行的,值得推广应用。

脊灰减毒活疫苗免疫强度对甲型肝炎报告发病率的影响

目的分析TOPV免疫强度与甲肝报告发病率变化的关系和内在联系。方法数据来自西安市1989-2003年疫情年报资料,应用χ2、rs、RR等方法处理数据。结果自1993年实施TOPV强化免疫后甲肝发病呈明显下降趋势(I=10,P<0.01),与TOPV免疫强度有明显的剂量-反应关系(rs=-1.000),但以扫荡式强化下降幅度最为显著(χ2=322.3736,P<0.001),经分组比较:年龄组下降以接种组(0～47月龄)最为显著(χ2=1217.6138,P<0.001),职业组下降以散居儿童最显著(χ2=340.8883,P<0.001);强化服苗后季节发病亦有显著变化(χ2=251.5852,P<0.001)。结论在西安市未实施甲肝疫苗普种出现发病率明显下降可能与1993年以来TOPV强化有关,其机制可能与肠道病毒间干扰作用有关。

甲型肝炎减毒活疫苗稳定性的研究

本文对甲型肝炎病毒L－A－1疫苗珠制备的多批减毒活疫苗放置不同温度、不同时间及反复冻融后的疫苗病毒的稳定性进行研究。结果表明，疫苗置－20℃16个月、4～8℃3个月，室温1周，35℃1天，疫苗清度仍达到≥6.5LogTCID50／ml的合格滴度。疫苗置室温3、5天后冻存一周，再放置室温3天，冻存一个月，其病毒滴度无明显改变，表明此疫苗稳定性良好，可耐受一定范围高温。

甲型肝炎减毒活疫苗检定方法精确度的探讨

目的 提高甲肝减毒活疫苗检定方法的精确度。方法 比较不同刑量组与剂量组不同的试验数，以 及采用点斜法与Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法计算ＴＣＩＤ５０。结果 通过比较４种不同的试验设计，发现随着稀释倍数减小或／和各 稀释度试验管数增加，ＴＣＩＤ５０的标准误减小，以减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数，其标准误的缩小最为明显。 点斜法计算的ＩＣＩＤ５０９５％可信区间较Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法为窄。结论 减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数，并采 用点斜法计算ＴＣＩＤ５０，能使疫苗检定方法的精确度满足规范化甲肝活疫苗滴定的要求。

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响。方法按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平。结果除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降。同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组。并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异。结论通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性。

HBsAg阳性者接种甲型肝炎减毒活疫苗的反应及免疫效果

通过对HBsAg阳性志愿者接种甲型肝炎减毒活疫苗的抗体应答及其它有关临床反应观察，表明HBsAg阳性者接种甲肝减毒活疫苗后，其局部及全身临床反应与对照组差异无显著意义，肝酶检测2、4、8周（SGPT）与免疫前相对照，未见有意义的改变，但却能同样地产生良好的抗体反应，两组抗体水平相似。证实甲肝减毒活疫苗不仅可对此类易感人群接种，还可提供同样的保护。

可生物降解微球甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴的免疫应答

目的 探索用一种新型的甲型肝炎减毒活疫苗及其免疫途径。方法 用可生物降解的材料聚乳 酸／乙醇酸（ＰＬＡ／ＰＬＧ）包裹甲型肝炎减毒活疫苗，制成微球型疫苗，检测微球的大小及在体外病毒释放的状况，和口 服免疫恒河猴后病毒在体内繁殖及免疫应答状况。结果 微球大小在６～１０μｍ范围，体外病毒抗原释放长达２７ｄ 左右，体外抗原释放高峰在３～７ｄ，口服免疫恒河猴后，约１ｗ左右开始排毒，以后一直呈间断排毒。抗体应答于第 ３ｗ出现，高峰期在５～６ｗ，达１２６１ＭｍＩＵ／ｍｌ，随后逐渐下降，口服加强免疫后，抗体回升，野毒株攻击后，抗体再度回升 达１２４４ｍＩＵ／ｍｌ。结论 微球型甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴后，能引起一定水平的免疫应答。

甲型肝炎减毒活疫苗生产中病毒释放的最佳方法探索

目的 探索甲型肝炎减毒活疫苗 (简称甲肝活疫苗 )生产中感染细胞释放病毒的最佳方法。方法 采用超声波细胞粉碎仪、- 70℃及液氮冻融 3种方法粉碎细胞 ,对细胞破碎情况、病毒抗原滴度和感染性滴度进行了比较。结果 超声波连续粉碎 3次 (90秒 /次 )、- 70℃反复冻融粉碎 4次和液氮冻融粉碎 6次 ,细胞破碎率分别为 94%、82 %和 81% ;病毒抗原滴度和感染性滴度均达高峰 ;抗原滴度均为 1∶2 5 6 ,感染性滴度 (logCCID50 /ml)分别为 8 6 7、6 5和 6 0。继续超声和 -70℃冻融粉碎细胞 ,病毒抗原滴度和感染性滴度基本不变 ,而液氮冻融至第 10次时 ,抗原滴度无明显变化 ,感染性滴度下降2 0logCCID50 /ml。结论 超声波破碎率最高 ,细胞碎片最小 ,病毒充分释放 ,且不损伤病毒 ;- 70℃和液氮冻融破碎率较低 ,细胞碎片较大 ,病毒释放效率低 ,病毒损伤以液氮冻融为重。

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)快速繁殖株不同代次全基因序列比较

为探索甲型肝炎减毒活疫苗 (H2株 )细胞适应的分子机制 ,将甲型肝炎减毒活疫苗毒株(HAVH2K7)在人胚肺二倍体细胞KMB17上快速连续系列传代增强适应 ,繁殖周期由原来的 2 8d缩短为 14d ,连续传代后抗原滴度和感染性滴度不断增加 ,传至 2 2代抗原滴度达 1∶10 2 4 ,感染性滴度lgCCID50 (每ml)为 7 83 .分别将第 6代和第 2 2代病毒用AC PCR法和PCR法扩增 .扩增片段分别与pGEM T载体连接得到重组质粒 ,测定cDNA插入片段的序列 .对 2个不同代次全基因序列及氨基酸序列比较分析表明 ,HAVH2K7适应至第 6代时 ,整个基因组有 6个核苷酸变异 ,全部位于编码区内 ,变异率为 0 0 7% ,导致 3个氨基酸变化 ,分别位于VP2 (A S) ;2C(N H) ;3A(R C) .适应至第 2 2代时 ,整个基因组出现 18个核苷酸突变 ,变异率为 0 2 4 % ,13个是该代次产生的 ,变异最大区域 5′端非编码区 (5′UTR)有 5个核苷酸变异 .编码区突变导致 7个氨基酸变化 ,其中 4个氨基酸变化是该代次在 6代基础上特有的变异 (2C ,Q P ;3A ,A S ;3C ,T A ;3D ,V G) .2C区是编码区变异最多区域 ,共有 4个核苷酸突变 ,在 6代变异基础上出现 3个新突变 ,导致 1个氨基酸变异 .说明 5′UTR的2C区变异对病毒的翻译效率、感染性滴度提高具有重要作用 .