人胚肺细胞制备甲型肝炎抗原的研究

为生产甲型肝炎抗原,作者提出了一种新方法。采用人胚肺细胞代替2BS,接种HAV后进行离心培养和旋转培养。结果表明本法生产HAAg优于常规法:1.此种细胞价廉易得,对HAV敏感;2.HAV的增殖周期由2～3周缩短至7～10d;3.HAAg的产量增加近1倍。

酶联免疫吸附试验检测甲型肝炎抗原

自从应用免疫电镜法(IEM)检测甲型肝炎抗原以来,其他灵敏检测技术如免疫粘附血凝试验(IAHA)、固相放射免疫试验(SPRIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等也相继建立,其中以ELISA检测甲型和乙型肝炎抗原和抗体较为简便、特异、灵敏。本文介绍ELISA检测甲型肝炎抗原,并与IEM和SPRIA进行比较。

应用微量固相放射免疫测验检测甲型肝炎抗原和抗体

自70年代中期Hollinger及Purcell等先后报告可用(Micro-SPRIA检测甲型肝炎抗原(HAAg)和抗体(抗-HAV)后,这一作为甲型肝炎实验诊断的第三代技术,由于敏感、特异、操作简便和对HAAg纯度要求不高,故日益得到广泛应用。但在国内,近年来仅有少数单位应用该技术的初步报告。

应用组织培养的甲型肝炎病毒抗原作为酶联免疫诊断试剂

用2BS细胞培养甲型肝炎病毒(HAV)TZ84株,一次性加维持液,仅培养8～10天即能稳定地大量地生产甲型肝炎病毒抗原(HAAg),可用于制备甲型肝炎酶联免疫诊断试剂。采用竞争法检测HAV抗体仅需10μl血清,1～2小时即可得出结果,与Abbott试剂相比,符合率为95％,无假阳性出现。方法简便、快速,适用于人群甲型肝炎病毒感染状况的调查,采用抗体捕捉法测抗-HAV IgM,与Abbott试剂相比,符合率为96.98％,无假阳性出现,适用于甲型肝炎的早期诊断,用于临床和流行病学调查,表明所研制的甲型肝炎诊断试剂可靠实用。

铝盐佐剂对甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原细胞免疫反应的研究

目的 评价铝盐佐剂对甲型肝炎病毒抗原 (HAAg)和乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)细胞免疫反应的影响。方法 以甲型肝炎病毒灭活抗原和乙型肝炎病毒基因工程表达抗原为对象 ,采用小鼠迟发型超敏反应 (DTH)、脾脏淋巴细胞增殖实验和淋巴细胞亚型分群实验 ,检测铝盐佐剂吸附前后的细胞免疫反应变化 ,并进行统计学分析。结果 甲型肝炎病毒抗原佐剂吸附后 ,DTH反应强度和特异性T淋巴细胞增殖强度有所降低 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;乙型肝炎病毒表面抗原吸附佐剂后 ,特异性T淋巴细胞增殖显著降低 (P <0 0 5 ) ,CD4+ /CD8+ 比值明显升高(P <0 0 5 )。结论 铝盐佐剂可减弱杀伤型T细胞的分化和增殖 ,优势调节T淋巴细胞向辅助型T细胞 (TH)分化 。

甲型肝炎

甲型肝炎病毒抗原定量参比品的研制；急性甲型肝炎与急性戊型肝炎临床对比分析。

采用RIA对粪甲肝抗原进行临床应用的探讨

1973年Feinstone首先应用免疫电镜从早期甲型肝炎患者的粪便中发现甲肝病毒后,经国际病毒分类及命名委员会鉴定,把它列入肠道病毒72型小核糖核酸病毒科。甲型肝炎是一个世界性分布的疾病,尤其在发展中国家时有暴发流行。近年来随着检测技术的改进,HAV的研究有了新的进展,本文采用RIA方法对粪便中的甲型肝炎抗原进行临床应用探讨,现将100例结果报告如下。材料和方法一、材料来源: (一)50％的牛肉汤——生理盐水;50g牛肉膏加NaCl0.9g溶于100ml的蒸馏水中,pH7.4。 (二)大便肉汤——生理盐水悬液的制备。称取待测病人大便5g,置于200ml玻璃瓶中,加30粒直径为3mm左右的玻璃珠及100ml的牛肉汤——生理盐水中等量混合液,将瓶口塞上,室温振摇或放人振荡器振荡30分钟后,放入低温冰箱-20～-30℃冰冻15分钟,取出置于37℃,水浴速融,如此3～4次,以促使病毒颗粒释放。取其上清液,以3000转/分离心30分钟,再取上清液以5000转/分离心1小时,如此2次,再经0.45nm的微孔滤膜抽滤,

酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎和乙型肝炎抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用

目的探讨酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎(简称甲肝)和乙型肝炎(简称乙肝)抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用,并对皮下和鼻腔接种的免疫效果进行比较。方法将酵母多糖与角鲨烯按一定比例混合,制成复合佐剂,将不同剂量的复合佐剂与HBsAg混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8、16周,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG抗体水平,筛选复合佐剂的最佳免疫剂量。以复合佐剂的最佳免疫剂量与甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、甲肝抗原对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8周检测小鼠血清中抗甲肝抗原IgG抗体水平。以复合佐剂最佳免疫剂量分别与HBsAg和甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组和甲肝抗原对照组,经鼻腔免疫ICR小鼠,共免疫3次,间隔2周,分别于末次免疫后4、8周检测小鼠血清中抗HBsAg和甲肝抗原IgG抗体水平。在试验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并对小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理分析。结果酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对HBsAg的最佳免疫剂量为2 mg酵母多糖+8μl角鲨烯,该组抗体水平明显高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P<0.05);复合佐剂对甲肝抗原也有较好的体液免疫增强作用,抗体水平显著高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P<0.05);复合佐剂通过鼻腔免疫,对HBsAg和甲肝抗原的体液免疫应答也有增强作用,但效果不如皮下免疫,甲肝抗原鼻腔免疫效果优于HBsAg(P<0.05)。在试验期内,小鼠均未出现异常反应,各器官均未发生病变。结论酵母多糖-角鲨烯复合佐剂能显著增强甲肝和HBsAg抗原对小鼠的体液免疫应答,免疫效果优于铝佐剂;皮下免疫效果优于鼻腔免疫;在免疫剂量范围内,复合佐剂安全性良好。

两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平。免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素最佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察。结果免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平最高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAV IgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平最高,其抗体水平在第12周达峰值。实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变。结论甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

甲磺酸去铁胺佐剂对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对照组（生理盐水200 μl）、HAV抗原对照组（HAV 18 EU）、铝佐剂对照组（铝佐剂300μg＋HAY抗原18EU）和复合佐剂组（HAY抗原18EU＋DFO1mg＋铝佐剂150 μg），均经腹部皮下多点注射，0.2ml／只，共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周，采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平，并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外，其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗.HAVIgG；除DFO 0.6mg组外，抗体滴度均在第8周达峰值；不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组，其中DFO4mg和8mg组在8～16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组，且差异有统计学意义（P〈0.05），但与铝佐剂对照组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）；在8～16周时，同一时间DFO4mg、DFO8mg和复合佐剂组的抗体水平较高，并能维持较长时间，至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平。结论DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答，有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。

人血白细胞中HAAg的检出及其临床应用

用间接免疫荧光法(IF)检测47例甲肝病人外周血白细胞中的HAAg,检出率为:发病5～9天70％以上(14/19例),10～14天57.1％(8/14例),20天以上的14例均为阴性。1988年上海甲肝流行期间,对24例甲肝病人连续观察,白细胞中HAAg最早在第11病日消失,最迟为30病日。多数病人HAAg在肝功能正常之前即已消失,仅1例病人肝功能正常时(24病日)仍可检出HAAg。另检测乙肝病人31例,非肝炎病人19例、献血员19例的白细胞HAAg均阴性。