根癌农杆菌介导甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因转化柑桔成年材料的研究

本研究以柑桔优良品种不知火(shinanui)为试料,通过携带质粒pBI121-A的根癌农杆菌转化成年树腋芽,获得转甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因不知火植株。研究结果表明,锦橙试管砧木培养15d时不知火成年树腋芽的嫁接成活率最高,达到90%;不知火不同成熟度的枝条应采用不同的消毒时间,木质化的枝条消毒时间要长些,半木质化的枝条消毒时间要短些。对获得的拟转化植株进行PCR分析以及对PCR阳性植株进行测序,结果表明HAV衣壳蛋白融合基因已整合到不知火的基因组中。

甲型肝炎病毒受体HAVcr-1及其与过敏性疾病的关系

甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus,HAV)是广泛传播的肝炎致病因子,儿童接种HAV疫苗,可以有效控制HAV感染和甲型肝炎流行。近年来对HAV受体的研究也取得很大进展,主要包括:HAV受体(HAVcr-1)的发现、HAVcr-1的结构特征、HAVcr-1与HAV的相互作用等方面,这对阐明HAV吸附和进入宿主细胞的分子机制具有重要意义,尤其最近有关HAVcr-1与过敏性疾病的相关性报道,更使人们对HAV的感染性有了新的认识。本文即针对以上几方面进行综述。

食源性甲型肝炎病毒快速检测技术研究进展

病毒在食源性疾病的爆发中起着至关重要的作用,其中,甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染后能够致人衰弱,并引发急性肝衰竭。由于其传染迅速,影响范围广,HAV污染已经给消费者带来了严重的健康风险,且在全球范围内造成了大规模的食源性疫情和经济损失。因此,早期快速准确的检测HAV对于食品安全和疫情暴发的溯源至关重要,以便及时确定并召回受污染的食品,防止感染的进一步发生。传统的HAV检测方法由于检出率不高以及病毒在细胞内的培养周期长等问题,往往耗时费力,无法快速有效地对其进行检测。本文对目前报道较多的HAV快速检测技术进行了阐述和梳理,对各项技术的检出限、检测时间以及优缺点进行了比较,并对HAV快速检测技术研究进行了展望,为后续HAV的快速检测研究提供依据,也有助于进一步探讨与开发HAV快速检测的新技术,以有效防止HAV的传播与危害。

恒河猴猴群中甲型肝炎病毒(HAV)血清学调查

用ELISA法对 183份来自不同饲养条件下各年龄阶段的自繁猴血清进行了甲型肝炎病毒抗体 (HAVIgG)的检测 ,阳性率为 6 8.9% ,其中单笼猴抗 -HAV阳性率明显低于大笼猴及群养猴 ,并随年龄的增长而升高。同时对 4 1只野生猴进行检测 ,阳性率为 19.5% ,明显低于自繁猴 ,这一结果为恒河猴的饲养管理提供依据。

甲型肝炎病毒感染者抗—HAVIgM与类风湿因子检测及探讨

检测病人血清中HAV—IgM抗体这是目前诊断甲型肝炎最可靠最灵敏的方法,患者于发病后1～4周血清中即可检出HAV—IgM抗体,该特异性抗体主要有两种,即IgM和IgG型的抗—HAV,HAV—IgM抗体在急性甲肝感染时出现较早上升较快,高峰滴度较高、持续时间较短。故凡HAV—IgM抗体阳性特别是滴度较高(>10^(-3))时常提示为急性HAV感染或复发。我们在检测甲型肝炎病毒IgM抗体时发现大多数甲型肝炎患者血清中存在类风湿因子(RF)常干扰HAV—IgM抗体的检测,导致假阳性结果。为此通过对甲型肝炎患者RF检测试图了解RF与肝功能以及RF对抗—HAVIgM检测等的影响。

2020—2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析

为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况,试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料,通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定,并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示:共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒,均属于GⅠa分支,且分属于GⅠa分支不同小分支,其中2020年分离株(20148、20149)与2021年商品肉鸭分离株(SP21042)核苷酸相似性在98.8%~100%;2023年商品鸭分离株(SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009)核苷酸相似性在99.7%~100%;2021年种鸭分离株(21083)与2022年、2023年种鸭分离株(22443、22468、BL23028)、2023年商品鸭分离株(SP23010)核苷酸相似性在98.8%~99.4%,小分支内相似性均高于98.8%,不同小分支间相似性在96.9%~98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明,山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异,需要加以关注。

输血传播甲型肝炎病毒(HAV)的分子和血清学追踪

背景 甲型肝炎病毒经输血途径传播至今尚无分子生物学证据。病例报道：一名33岁无症状的女性自愿者献了一次全血。13天后她被诊断为急性HAV感染。在回顾性研究中，应用定量逆转录PCR法(RT-PCR)在被隔离存放的、该献血者的新鲜冰冻血浆中检出高的病毒载量。而抗HAV IgM和IgG未被检出，丙氨酸转氨酶也未增高。她捐献的红细胞刚好在第14天输给了病人。这位63岁的男性受血者HAV血清呈阳性反应，无HAV临床症状，也没有发现抗HAV IgM。

巨细胞病毒感染对甲型肝炎患儿血清及唾液中抗HAV-IgM检出率的影响及意义

目的 :研究巨细胞病毒感染对甲型肝炎患儿血清及唾液中抗HAV -IgM的影响。 方法 :在 5 1例急性黄疸型肝炎 (急黄甲肝 )合并巨细胞病毒 (CMV)感染的患儿中 ,于病程 10d内、1～ 3月、3～ 6月同时检测血清和唾液中抗HAV -IgM。 结果 :原发性CMV感染者 1～ 3月的唾液抗HAV -IgM检出率明显高于血清检出率 (10 0 % ,37.5 % ,P =0 .0 11) ,活动性CMV感染者唾液中抗CMV -IgM检出率显著高于非活动组及 4例单纯急黄甲肝者。结论 :唾液中抗HAV -IgM可能不直接来自血浆 ,更具临床检测价值 ,活动性CMV感染可延缓唾液中抗HAV

抗甲型肝炎病毒抗体Fab在大肠杆菌中的表达

目的在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab，为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下，构建成Fab表达质粒，在大肠杆菌JM83中进行表达，并对表达产物进行复性。用SDS-PAGE、western blot和ELISA法检测Fab的表达及其与甲肝病毒抗原的结合活性。结果 构建了抗HAV Fab的重组表达质粒p84Fab，在大肠杆菌JM83中获得表达，表达的Fab占全菌的25%，主要以包涵体形式存在，复性后具有抗原结合活性；培养基、菌体可溶性蛋白部分也能检测到有抗原结合活性的Fab。 结论抗HAV抗体Fab在大肠杆菌中得到了表达，并具有良好的抗原结合活性。

中国五省市甲型肝炎病毒基因分型的研究

为了解甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)在中国几个城市的基因型分布 ,选择浙江杭州、江苏启东、安徽铜陵、云南昆明和上海市等的甲肝病人粪便标本或血清标本 ,以逆转录 -套式聚合酶链反应 (RT nPCR)扩增合成HAVVP1/2A交接区基因区 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果表明 ,从这些城市甲肝病人分离到的 17株HAV株均属基因Ⅰ型 ,为IA和IB亚型 ;所有HAV株间核苷酸差异均小于 15 % ,但约 5 0 %HAV株株间核苷酸差异大于 7 5 % ,说明中国流行或散发的HAV株可能有基因IA、IB亚型同时存在。该项研究结果将为HAV的分子流行病学追踪调查提供方法和依据。

中科院解析甲型肝炎病毒(HAV)全颗粒晶体结构

据生物谷网2014年11月18日援引报道，中国科学院生物物理研究所和英国牛津大学等单位的研究人员解析了HAV成熟病毒和空心病毒两种状态的全颗粒高分辨率的晶体结构。结果显示，这两种病毒颗粒的结构具有很大的不同：HAV成熟病毒具有衣壳蛋白vp4，而空心病毒颗粒含有的是未被剪切的衣壳蛋白vpO前体；与目前已经解析的小RNA病毒科成员三维结构比较，HAV病毒结构最大的不同在于其衣壳蛋白vp2的N端进行了180°偏移，转向了病毒二次轴处，增强了病毒五聚体与五聚体之间的相互作用力，部分解释了HAV病毒具有的极强稳定性。

新疆伊犁2005年甲型肝炎病毒流行株基因分型研究

为了解2005年新疆伊犁甲型肝炎病毒（甲肝病毒）流行株分子流行病学特征，收集了部分甲肝病人血清标本，用国际上通用的甲肝病毒结构区基因VP1—2A分型引物，经核酸提取，做RT-PCR，序列测定，对甲肝病毒基因进行分型研究，并对甲肝病毒在甲型肝炎（甲肝）病人血清中存在的时间进行了探讨。结果显示，甲肝病毒核苷酸序列变异在0～3．2％之间，分为不同的基因簇，但都属于1A亚型（同一基因亚型间核苷酸序列变异小于7．5％）;氨基酸序列几乎相同。甲肝发病8周后的病人血清中仍能检测到甲肝病毒。结果说明该流行区有多株甲肝病毒存在，其传染源可能有多个传播途径，当人群免疫水平较低时，可引起甲肝流行。甲肝病毒在病人血液中可存在较长时间。这些工作为今后进一步开展甲肝病毒溯源研究及有效控制甲肝病毒流行提供了理论和技术支撑。

氯灭活甲型肝炎病毒与其核酸变化关系的研究

为了解氯灭活ＨＡＶ与ＨＡＶ核酸变化的关系，采用大片段逐步步移ＲＴ一ＰＣＲ技术对ＨＡＶ核酸全序列进行扫描。结果，在２５℃以１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，可完全灭活ＨＡＶ，而５ｍｇ／Ｌ有效氯作用６０ｍｉｎ则不能。在ＨＡＶ核酸全序列中，各部分对氯的抗力不一，以５′ＮＴＲ为敏感。用１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，检测其为阴性，其次为３′ＮＴＲ，当１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用６０ ｍｉｎ时，亦为阴性；结构区的某些片段对氯的抗力较强。以１０ｍｇ／Ｌ有效氯作用３０ｍｉｎ，进一步缩小氯对ＨＡＶ核酸作用敏感区间｛即近５′ＮＴＲ）的检测发现，病毒最初的１～６７１ｂｐ检测呈阴性，而６６９～１０２３ｂｐ仍呈阳性。结果表明，氯灭活ＨＡＶ与其核酸５′ＮＴＲ的损伤一致，在充分了解氯对ＨＡＶ作用机理的基础上，ＰＣＲ可用于消毒效果的评价。

小浆果中食源性甲型肝炎病毒和诺如病毒流行状况及检测方法的研究进展

小浆果是食源性甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)和诺如病毒(norovirus,NoV)感染爆发的重要传播载体,受到全世界的广泛关注。为及时了解小浆果产品的病毒污染情况,需要对不同类型小浆果中的食源性病毒进行准确检测。由于受污染的小浆果携带病毒含量较低,且自身质地脆弱并含有大量果胶、多酚、多糖、色素等反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)抑制物,容易产生大量的"假阴性"结果,给食源性病毒的监测带来困难。在广泛查阅文献的基础上,本文综述了HAV和NoV在小浆果中的流行状况,指出了小浆果中食源性病毒检测的改进方向,阐述了全程过程控制、分子过程控制和RT-PCR过程控制在食源性HAV和NoV检测中的应用情况,为加强HAV和NoV在小浆果中的防控能力提供方法学参考。

在人二倍体细胞上分离和适应的甲型肝炎病毒株

应用人二倍体细胞ＫＭＢ＿（１７）株，从甲型肝炎患者粪便中直接分离到３株甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）。３株ＨＡＶ在ＫＭＢ＿（１７）细胞上已稳定地传代１０次，其抗原滴度可达５１２，感染滴度为７．０～７．７５１ｏｇＴＣＩＤ＿（５０）／ｍ１。用直接免疫荧光法在感染细胞胞浆内检测到特异性荧光着染颗粒，免疫电镜可见成堆２７～３０ｎｍ空心和实心混杂的病毒颗粒，中和试验结果表明抗－ＨＡＶ血清可完全中和这些病毒。证明分离的３株病毒均属ＨＡＶ，可作进一步研究应用。

甲型肝炎病毒吕8株的快速适应性培养

用12天35℃初步适应培育出一株在KMB17细胞稳定传代、感染性滴度高、增殖周期短的HAV适应株LU8株，其感染性滴度为108．33TCID50／ml，抗原滴度为1：1024，一步生长曲线试验和免疫电镜观察结果表明12天为该株病毒增殖高峰。LUB株和H2减毒株HAV经纯化和灭活后接种豚鼠，第一次接种后4周血清HAV抗体均阳转，第二次接种后滴度为1：13．5和1：4．8（GMT），第三次接种后滴度增至1：16和1：8。提示LUB株抗原性较H2株强。

用多聚酶链反应检测环境样品中甲型肝炎病毒RNA的实验研究

采用直接逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对加标海水、海泥、毛蚶的浓缩样品，用不同消毒方法处理过的甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）及毛蚶实测样品进行了ＨＡＶ－ＲＮＡ分析。结果表明，该方法可检出加标海水、海泥及毛蚶中的ＨＡＶ－ＲＮＡ；对苯酚消毒灭活的ＨＡＶ检验结果表明含有完整核酸序列的灭活病毒也能用ＲＴ－ＰＣＲ方法检出；毛蚶实测样品结果表明，只有１９８８年上海毛蚶ＲＴ－ＰＣＲ阳性，但细胞培养间接免疫荧光法检测结果为阴性，说明毛蚶冻存太久（≥５年），ＨＡＶ已不具感染性。直接ＲＴ－ＰＣＲ方法简便敏感，不需超速离心及其它特殊设备，在普通实验室也能使用。

氯对甲型肝炎病毒抗原性及核酸多态性影响的研究

为了探讨氯灭活甲型肝炎病毒 (HAV)的机制 ,采用酶联免疫吸附试验和RNA的随机引物扩增指纹图谱技术分别检测在氯灭活HAV前后病毒抗原以及核酸多态性的变化。结果显示 :灭活病毒的感染性(加氯 10mg L或 2 0mg L接触 30min)先于破坏病毒的抗原性 (加氯 10mg L或 2 0mg L接触 6 0min) ,当病毒感染性被灭活时 ,往往可以看到病毒核酸多态性的变化。结果表明 :氯灭活HAV可能是通过破坏核酸局部片段所致。