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转基因锦橙中甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因的遗传和表达稳定性研究 被引量:1
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作者 彭爱红 雷天刚 +4 位作者 许兰珍 刘小丰 何永睿 姚利晓 陈善春 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期31-35,共5页
为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2... 为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2个转基因锦橙株系在无性繁殖过程中,甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因都能稳定遗传;甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系JTH1及其无性繁殖后代之间能够稳定的表达,而在转基因锦橙株系JTH2及其无性繁殖后代之间不能稳定的表达,T0代中目的基因的相对表达量显著高于T2代. 展开更多
关键词 基因锦橙 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 遗传稳定性 表达稳定性
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甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建与遗传转化柑橘的研究(英文) 被引量:4
2
作者 胡蓉 魏泓 +1 位作者 陈善春 何永睿 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期425-431,共7页
基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序... 基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序列。经测序鉴定后正向克隆于植物表达载体 pBI12 1中 ,衣壳蛋白融合基因位于pBI12 1质粒T DNA左右边界区间内 ,处于CaMV35S启动子控制之下。经限制性内切酶分析和PCR鉴定后利用冻融法将重组质粒 pBI12 1 A导入根癌农杆菌LBA4 4 0 4。以锦橙 (Citrus.SinensisOsbeck)上胚轴为转化材料 ,通过根癌农杆菌介导法将衣壳蛋白融合基因转化到植物基因组中。 12 0株转化外植体经卡那霉素 5 0mg/L筛选 ,其中 13株生长状况良好未出现白化现象的拟转化芽微嫁接到实生砧木继续培养。PCR分析证明 ,13株拟转化植株中有 5株植物基因组中已导入甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 ,转化率为 4 1%。此研究是对遗传转化柑桔表达外源蛋白的初步探讨 。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 柑橘 植物表达载体 遗传转化 食用疫苗
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根癌农杆菌介导甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因转化柑桔成年材料的研究 被引量:4
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作者 彭爱红 彭祝春 +5 位作者 何永睿 许兰珍 雷天刚 刘小丰 姚利晓 陈善春 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期51-55,共5页
本研究以柑桔优良品种不知火(shinanui)为试料,通过携带质粒pBI121-A的根癌农杆菌转化成年树腋芽,获得转甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因不知火植株。研究结果表明,锦橙试管砧木培养15d时不知火成年树腋芽的嫁接成活率最高,达到90%;... 本研究以柑桔优良品种不知火(shinanui)为试料,通过携带质粒pBI121-A的根癌农杆菌转化成年树腋芽,获得转甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因不知火植株。研究结果表明,锦橙试管砧木培养15d时不知火成年树腋芽的嫁接成活率最高,达到90%;不知火不同成熟度的枝条应采用不同的消毒时间,木质化的枝条消毒时间要长些,半木质化的枝条消毒时间要短些。对获得的拟转化植株进行PCR分析以及对PCR阳性植株进行测序,结果表明HAV衣壳蛋白融合基因已整合到不知火的基因组中。 展开更多
关键词 柑桔 根癌农杆菌 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 转化
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衣壳蛋白和甲基转移酶对戊型肝炎病毒的基因分型 被引量:2
4
作者 胡玲玲 王跃荣 《检验医学与临床》 CAS 2015年第11期1545-1546,1549,共3页
目的探讨人戊型肝炎病毒(HEV)的部分编码区序列能否作为其基因组分型的依据。方法从GenBank中查找并下载全基因组测序完整的能感染人类的HEV基因组及蛋白序列共35株,用Clustal W程序对35株HEV全序列以及部分编码区序列进行多序列比对,并... 目的探讨人戊型肝炎病毒(HEV)的部分编码区序列能否作为其基因组分型的依据。方法从GenBank中查找并下载全基因组测序完整的能感染人类的HEV基因组及蛋白序列共35株,用Clustal W程序对35株HEV全序列以及部分编码区序列进行多序列比对,并用treev 32绘制基因进化树,研究其进化关系。结果HEV的基因组全长7.5kb;而衣壳蛋白和甲基转移酶的编码序列分别为1 982bp和545bp,这2种蛋白的多序列比对和进化分析结果与完整基因组的分型结果相符。结论衣壳蛋白和甲基转移酶可作为HEV的分型依据,且是一种更简便、快捷的方法。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因 衣壳蛋白 甲基转移酶
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兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因克隆与序列分析 被引量:20
5
作者 刘怀然 陈洪岩 +4 位作者 关云涛 王云峰 李昌文 夏长友 张立成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期321-324,共4页
自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为A... 自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为AF45 376 1)。将测得序列与GeneBank中记录的RHDV不同分离株进行比较。比较结果表明 :各毒株间核苷酸的同源性为 91%~ 98% ,氨基酸同源性为 94%~ 99% ,氨基酸变异多发生在高变区 ,进一步证明了毒株的高度保守性 ,为明确我国RHDV地方株VP6 0蛋白的分子特征。 展开更多
关键词 出血症 病毒 衣壳蛋白 VP60 基因克隆 序列分析
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虎纹蛙病毒主要衣壳蛋白基因的克隆及其序列 被引量:11
6
作者 苗素英 何建国 +4 位作者 张利红 曾慷 王晓红 张旻 江静波 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期559-563,共5页
从新分离感染虎纹蛙的病毒培养细胞中提取病毒DNA作模板 ,用分别对应于蛙病毒 3型 (FV3)主要衣壳蛋白 (MajorCapsidProtein ,MCP)基因读码框两侧的寡核苷酸片段作引物进行PCR扩增 ,得到预期大小基因片段 ,进一步将此基因片段插入到pGE... 从新分离感染虎纹蛙的病毒培养细胞中提取病毒DNA作模板 ,用分别对应于蛙病毒 3型 (FV3)主要衣壳蛋白 (MajorCapsidProtein ,MCP)基因读码框两侧的寡核苷酸片段作引物进行PCR扩增 ,得到预期大小基因片段 ,进一步将此基因片段插入到pGEM T载体中 ,进行全长片段的序列测定和分析。结果表明 ,编码虎纹蛙病毒的MCP基因的读码框核苷酸数为 1392bp ,编码 4 6 3个氨基酸 ;基因的核苷酸序列与其他脊椎动物虹彩病毒的MCP基因序列比较结果显示 ,该病毒与蛙病毒属的FV3的同源性 (98% )明显高于囊肿病毒属的FLDV 1(5 2 % ) ,并且与虹彩病毒科其他成员的MCP基因序列均有所不同 。 展开更多
关键词 虎纹蛙 虹彩病毒 衣壳蛋白基因 克隆 病毒分类
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鸭病毒性肠炎病毒基因文库的构建及其核衣壳蛋白基因的发现、克隆与鉴定 被引量:22
7
作者 程安春 汪铭书 +6 位作者 文明 周伟光 郭宇飞 贾仁勇 徐超 袁桂萍 刘一尘 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期948-953,共6页
提取鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组DNA,超声波处理使其片段化,经补平末端后,分级分离并收集各部分DNA片段,与质粒pBluescript Ⅱ SK(+)连接,转化大肠杆菌DH5α,成功构建了DEV基因文库.随机选取文库中的重组质粒测序分析,DNA序列拼... 提取鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组DNA,超声波处理使其片段化,经补平末端后,分级分离并收集各部分DNA片段,与质粒pBluescript Ⅱ SK(+)连接,转化大肠杆菌DH5α,成功构建了DEV基因文库.随机选取文库中的重组质粒测序分析,DNA序列拼接后获得大于100bp以上ORF共187个,将其中一个含完整ORF的DNA片段,以BLASTX软件与Genbank上相应基因进行比对分析,初步确定为一种核衣壳蛋白基因.根据该基因片段序列,设计引物对DEV DNA进行PCR扩增,并克隆到pGEM-T载体上,转化宿主菌JM109,提取阳性重组质粒,经PCR检测、酶切鉴定、测序和生物信息学分析,确定该基因片段为DEV核衣壳蛋白基因. 展开更多
关键词 病毒性肠炎病毒 基因文库 衣壳蛋白基因
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从我国分离的3株蛙虹彩病毒与蛙病毒3型主要衣壳蛋白基因同源性的比较 被引量:13
8
作者 张奇亚 肖枫 +1 位作者 李正秋 桂建芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期372-374,共3页
Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm-raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological ch... Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm-raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological characterisitics had shown that the RGV isolates belong to genus Ranavirus. The DNA sequence analysis of the 5′end of the major capsid protein(MCP) gene of RGV isolates by PCR amplification produced a 531bp fragment.DNA templates were prepared from cells infected with different RGV isolates and the specific primers designed were based on highly conserved region at the 5′ of the gene encoding Frog virus 3(FV3) MCP, which is the typical species of the genus Ranavirus.The PCR products indicate that the nucleotide sequence of MCP gene of the RGV9506,RGV9807 and RGV9808 showed 99.6%, 99.8% and 98.4% homology respectively with the corresponding region of the MCP gene of FV3. 展开更多
关键词 蛙虹彩病毒 病毒3型 FV3 聚合酶链式反应 衣壳蛋白基因 基因同源性 水产动物
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我国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30核衣壳蛋白基因和基因组启动子区的分子特征分析 被引量:15
9
作者 包静月 王志亮 +9 位作者 李林 赵文姬 索朗次仁 李金明 王英丽 吴晓东 刘春菊 刘雨田 于小静 杨咏梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期464-471,共8页
首次对我国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30的核衣壳蛋白(N)基因和基因组启动子(GP)区进行序列测定和分子生物学特征分析。首先应用逆转录聚合酶链式反应从发病山羊病料中扩增出小反刍兽疫病毒N基因片段,用cDNA3′末端快速扩增... 首次对我国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30的核衣壳蛋白(N)基因和基因组启动子(GP)区进行序列测定和分子生物学特征分析。首先应用逆转录聚合酶链式反应从发病山羊病料中扩增出小反刍兽疫病毒N基因片段,用cDNA3′末端快速扩增方法获得基因组启动子区片段,对聚合酶链式反应产物进行直接测序,然后对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,绘制系统发生树。我国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30的N基因由1689个核苷酸组成,编码525个氨基酸,与India/Jhansi/03等6个已知N基因全序列的PPRV毒株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为91.7~97.6和94.9~98.5。小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30N蛋白与磷蛋白作用的结构序列之一为495LFRLQAM501保守序列,N蛋白281-289位氨基酸含有一个T细胞表位,为281YPALGLHEF289保守序列。小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30的GP区由107个核苷酸组成,与Tur-key2000等5株其他PPRV毒株同源性为91.8~98.2。N基因核苷酸序列和相应的氨基酸序列系统进化分析表明小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30与亚洲国家分离株关系最近。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 衣壳蛋白 基因组启动子区 核苷酸序列
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兔出血症病毒衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的表达 被引量:15
10
作者 严维巍 崔治中 王永坤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期135-138,共4页
将RHDVVP6 0基因插入酵母转移载体pPICZB中转化毕赤酵母菌GS115株 ,经筛选获得染色体基因组中整合入VP6 0基因的重组酵母菌。以甲醇诱导培养后经SDS PAGE和Westernblot检测表达产物 ,在 6 0kD处出现一特异蛋白条带 ,表明RHDV的衣壳蛋白... 将RHDVVP6 0基因插入酵母转移载体pPICZB中转化毕赤酵母菌GS115株 ,经筛选获得染色体基因组中整合入VP6 0基因的重组酵母菌。以甲醇诱导培养后经SDS PAGE和Westernblot检测表达产物 ,在 6 0kD处出现一特异蛋白条带 ,表明RHDV的衣壳蛋白得到了成功表达。血凝试验表明 ,表达的重组蛋白具有血凝特性 ,可以凝集人“O”型红细胞 ,血凝价达 2 8,同时 ,该血凝性可被抗RHDV的高免血清所抑制。经电镜观察 ,重组酵母表达的衣壳蛋白可以在酵母菌体内自聚成大小约4 0nm ,和天然RHDV病毒子在物理形态上类似的病毒样颗粒 (VLPs)。该病毒样颗粒与兔抗RHDV高免血清作用后可被凝集成团 ,表明该VLPs与天然RHDV在抗原性上也极为相似。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白基因 毕赤酵母 表达 病毒样颗粒
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猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达 被引量:6
11
作者 唐丽杰 李一经 +2 位作者 贾永清 王君伟 刘宝全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期611-614,共4页
以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 ... 以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 衣壳 克隆 蛋白基因 基因表达
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中国大菱鲆虹彩病毒主要衣壳蛋白基因的PCR扩增及序列分析 被引量:11
12
作者 史成银 王印庚 +1 位作者 黄倢 王清印 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期588-593,共6页
应用同源PCR技术,从被一种球状病毒感染的患病大菱鲆(Scophthalmus maximus)脾脏和肾脏组织中扩增出了一段长度为620 bp的DNA片断.序列测定和Blast分析表明,该DNA片断与鱼类虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)C末端编码区的DNA序列高度相似,由... 应用同源PCR技术,从被一种球状病毒感染的患病大菱鲆(Scophthalmus maximus)脾脏和肾脏组织中扩增出了一段长度为620 bp的DNA片断.序列测定和Blast分析表明,该DNA片断与鱼类虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)C末端编码区的DNA序列高度相似,由此证实感染养殖大菱鲆的这种球状病毒为一种鱼类虹彩病毒,暂命名为大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV).多序列比对和分析发现,TRBIV MCP C末端的205个氨基酸序列与GenBank中20种虹彩病毒相应序列的相似性分别为99.47%(韩国大菱鲆虹彩病毒)、97%~98%(待指定病毒属的7种病毒),以及50%以下(蛙病毒属、淋巴囊肿病毒属、虹彩病毒属的12种病毒),由此绘制出了包含TRBIV在内的21种虹彩病毒的系统发育树.研究结果表明,感染中国养殖大菱鲆的TRBIV属于虹彩病毒科待指定病毒属,位于该属ISKNV亚群和RSIV亚群之间,是该病毒属的一个新成员. 展开更多
关键词 大菱鲆 虹彩病毒 主要衣壳蛋白基因 聚合酶链反应 序列分析
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犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究 被引量:13
13
作者 李金中 夏咸柱 +3 位作者 殷震 李佑民 涂长春 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第6期519-526,共8页
根据犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因的核苷酸序列,设计合成了10条引物。用1对引物从延吉犬病料中扩增出了含F2区基因的314bp的片段,除两端引物序列外为265bp,编码88个氨基酸。它与日本弱毒株(CDV-J... 根据犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因的核苷酸序列,设计合成了10条引物。用1对引物从延吉犬病料中扩增出了含F2区基因的314bp的片段,除两端引物序列外为265bp,编码88个氨基酸。它与日本弱毒株(CDV-J)、Onderstepoort弱毒株(CDV-ON)、海豹瘟热病毒2型(PDV2)、1型(PDV1)在核苷酸和氨基酸水平上的同源性,分别为98.1%和95.5%、96.2%和93.2%、94.3%和93.2%、77.4%和87.5%。对5份来自不同地区的CDV病料的融合区基因片段进行了扩增、克隆和序列分析,其中北京1号犬(CDV-B1)、2号犬(CDV-B2)、沈阳犬(CDV-S)和长春犬(CDV-Z)的283bp片段完全相同,而与哈尔滨犬(CDV-H)的该片段有3个核苷酸和2个氨基酸不同。在核苷酸和氨基酸水平,北京犬野毒株等与CDV-H、CDV-J、CDV-ON、PDV2、PDV1的同源性分别为98.9%和97.9%、97.9%和95.8%、96.5%和97.9%、93.3%和98.9%、77.0%和84.2%。本研究揭示了CDV的流行毒株和相关毒株在融合蛋白上的亲缘关系,进一步证实了PDV2? 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 病毒 融合蛋白 基因变异
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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量:10
14
作者 田浪 王红宁 +4 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 周万蓉 王鸿宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1078-1083,共6页
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒(RHDV),命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性;但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成... 从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒(RHDV),命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性;但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线;电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序,序列分析表明VP60基因序列全长1740bp,编码579个氨基酸,测序结果提交GenBank(注册号为DQ069280),并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较,结果表明核苷酸同源性为90.0%~98.0%,氨基酸同源性为94.1%~99.0%,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区;同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株,丰富了地方毒株资源,为明确我国地方株的分子流行病学,以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 无血凝性 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析 RT—PCR
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我国分离的盖塔病毒衣壳蛋白基因和3′非翻译区分子特征研究 被引量:14
15
作者 翟友刚 王焕琴 +1 位作者 付士红 梁国栋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期270-275,共6页
对我国海南省和河北省分离到的3株盖塔病毒(GETV)(M1、HB0215-3和HB0234)进行衣壳蛋白基因和3′UTR区序列测定,并分析比较该病毒的分子生物学遗传特征。首先应用逆转录聚合酶链反应扩增出病毒衣壳蛋白基因和3′UTR片段,纯化后连接... 对我国海南省和河北省分离到的3株盖塔病毒(GETV)(M1、HB0215-3和HB0234)进行衣壳蛋白基因和3′UTR区序列测定,并分析比较该病毒的分子生物学遗传特征。首先应用逆转录聚合酶链反应扩增出病毒衣壳蛋白基因和3′UTR片段,纯化后连接到载体中进行测序,然后用Clastal X和DNASTAR软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA软件绘制系统发生树。3株病毒衣壳蛋白基因分别由801、804和804个核苷酸组成,分别编码267、268和268个氨基酸,3株病毒之间核苷酸和氨基酸序列同源性为97.6%-100%和97.8%-100%,与其他GETV分离株核苷酸同源性在95.4%-99.6%之间。3株病毒3′UTR分别由411、401和401个核苷酸组成,发现中国株存在10个(45-54位)核苷酸缺失和2个(64位、148位)特有的核苷酸位点。进化分析表明盖塔病毒之间的进化关系与分离年代相关,中国境内流行的盖塔病毒是相对独立的一个类群。 展开更多
关键词 盖塔病毒 衣壳蛋白基因 3′非翻译区 核苷酸序列 系统发生树
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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 被引量:9
16
作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 安芳兰 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳前体基因 绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞
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4株鹅源新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:13
17
作者 万洪全 吴艳涛 +1 位作者 刘秀梵 张如宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期208-213,共6页
测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性... 测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性为 86 0 %~86 8% ,F基因转录起始序列及起始密码子位置与已知NDV完全相同 ;F蛋白具有和已知NDV相似的各种功能区 ,F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列为112 RRQKRF117,符合NDV强毒株的特征。对F基因第 3 3 4~ 1 6 82位核苷酸之间 3种限制性内切酶HinfⅠ、BstoⅠ、RsaⅠ酶切图谱的分析表明 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析 基因 基因克隆
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新城疫病毒F蛋白细胞融合活性位点中保守氨基酸基因突变分析 被引量:6
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作者 王志玉 任桂杰 +5 位作者 温红玲 宋艳艳 王桂亭 姚苹 许洪芝 张文强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期38-43,共6页
为了确定新城疫病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中保守氨基酸在F蛋白的细胞融合作用,弄清F细胞融合的分子机理,采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并于真核细胞内进行表达,Gie... 为了确定新城疫病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中保守氨基酸在F蛋白的细胞融合作用,弄清F细胞融合的分子机理,采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并于真核细胞内进行表达,Giemsa染色定性和指示基因法定量检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况。结果表明,NDV F第117位苯丙氨酸(F)突变成亮氨酸(L)时对细胞融合作用没有显著影响。R112和K115同为保守序列,分别突变为G时,细胞融合活性只有原来的44%,下降了56%。细胞表面表达效率没有明显的改变。N147突变为K时,细胞融合活性明显下降,只有原来的15%,而细胞表面表达效率没有明显的改变。L154为保守序列,突变为K时,细胞融合活性消失,说明L154是一个非常关键的氨基酸,对维持F蛋白的细胞融合活性非常重要。细胞表面表达效率也有所下降(为原来的94%)。D462属于高度保守氨基酸,当突变为N时,细胞融合活性消失,但经细胞表面表达效率分析证明,此突变蛋白未表达于细胞表面,证明在细胞浆转运至细胞表面的过程中发生了问题。当突变为R和E时,细胞融合活性未发生改变,但细胞表面表达效率有所下降,分别为野毒株的63%和44%。说明NDV F分子上与HN相互作用的特异性区域中的某些保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,对F蛋白的折叠、加工、转运等,发挥着不同作用,从而影响F蛋白的细胞融合作用和/或在细胞表面的表达量。 展开更多
关键词 副粘病毒 融合蛋白 细胞融合 氨基酸 基因 新城疫病毒
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黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究 被引量:12
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作者 李华平 胡晋生 范怀忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期162-169,共8页
构建了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒(CMV)两个株系(BS和HI)的衣壳蛋白(CP)基因的植物表达载体,并通过农杆菌共培养法和基因枪法,分别将两个株系的CP基因转化入了两种烟草植株。其CP基因转化频率及植株再生率研究结果表... 构建了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒(CMV)两个株系(BS和HI)的衣壳蛋白(CP)基因的植物表达载体,并通过农杆菌共培养法和基因枪法,分别将两个株系的CP基因转化入了两种烟草植株。其CP基因转化频率及植株再生率研究结果表明,农杆菌共培养法比基因枪法、土耳其烟比本生烟、农杆菌1:10倍稀释液比培养原液和1:100倍稀释液,具有更高的转化频率和植株再生能力。Southernblot和PCR一Southernbolt检测CP基因整合研究结果表明,在两株系CP基因转化的各12株烟草中,各有9株含有各自的CP基因。Northernbolt分析表明,在各7株转基因植株中,各有5株具有各自CP基因的mRNA的转录。DAS一ELISA检测表明,各5株转基因植株中都含有各自株系不等量表达的CP。用HI株系进行攻击接种表明,具有mRNA转录和翻译的两株系的各5株转基因植株都显示了较高的抗病水平。 展开更多
关键词 基因烟草 黄瓜花叶病毒 香蕉株系 衣壳蛋白
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达 被引量:6
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作者 吴兴安 胡刚 +6 位作者 李继业 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期78-80,65,共4页
淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV... 淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白 基因片段 原核载体 虹彩病毒 诱导表达
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