全球首例甲型H10N8禽流感病毒感染导致重症肺炎死亡病例分析

目的报告全球首例人感染甲型H10N8禽流感病例的救治经过，对比其与人感染H7N9禽流感的病例特点，给临床诊疗提供依据。方法2013年11月30日江西省南昌市出现首例人感染甲型H10N8禽流感死亡病例，分析其临床病症及流行病学调查，并与以往人感染H7N9禽流感的临床病症进行比较分析。结果73岁女性患者，因咳嗽、咳痰、胸闷3d，发热1d，于2013年11月30日入住南昌大学第三附属医院呼吸科；12月2日因病情加重转入重症医学科重症监护病房（ICU）；12月5日病情进展出现器官功能衰竭（MOF）；12月6日08：30出现心脏停搏，抢救无效死亡。①流行病学调查：该患者为老年人，有多种慢性病（高血压、冠心病、重症肌无力等）、免疫功能受损（胸腺瘤切除术后）等易感因素；且在就诊前1周有活禽经营市场暴露史，发病前患者家中有感冒症状者；传播途径为经呼吸道传播，与人感染H7N9禽流感相似。②临床表现：该患者有流感样症状，如咳嗽、发热（39．1℃），但没有头痛、肌肉酸痛，2-3d出现重症肺炎并进行性加重，伴呼吸窘迫，从气管插管内吸出大量血水样痰（2000mL／24h），病情迅速进展，出现急性肾损伤、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、脓毒性休克及意识障碍等，与人感染H7N9禽流感相似。③辅助检查：该患者除淋巴细胞比例降低（0．070）、天冬氨酸转氨酶（AST）轻度升高（57u／LJ）、C-反应蛋白（CRP）升高（〉200mg／L）外，血小板、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸转氨酶、肌红蛋白均不升高，白细胞总数略升高（10．34x109／L），这与人感染H7N9禽流感病例特征不相符。肺部感染实变影进行性扩展；与H7N9禽流感一致。④诊疗：依据患者临床表现、肺部感染实变影进行性增大、有流行病学史，故考虑甲型禽流感可能。虽然在早期就给予治疗量的奥司他韦抗病毒，以及积极的呼吸、循环支持和抑制免疫反应等综合治疗，但患者最终因呼吸衰竭、休克而死亡。⑤经中国疾病预防控制中心（CDC）证实，该患者为甲型H10N8禽流感，与该患者密切接触者经南昌市及中国CDC多次筛查均未感染。结论人感染甲型H10N8禽流感与人感染H7N9禽流感并不完全雷同，很难从传统的实验室指标得到提示；临床病症及流行病学史是诊断的要件。参照人感染H7N9禽流感治疗方案给予神经氨酸酶抑制剂治疗H10N8禽流感患者并未逆转肺部的恶化进程。中国CDC检测发现甲型H10N8禽流感病毒导致人感染和传播的风险低。

H10N8亚型禽流感病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法。该方法可特异性地检测出H10N8亚型AIV的HA和NA基因,与其它亚型AIV及其他常见禽呼吸道病原均无交叉反应;能够检测到AIV的最低检出量为10-1 EID50/0.1 mL,比常规RT-PCR方法敏感100倍;批内和批间重复性试验的变异系数(CV)均小于2%。SPF鸡感染试验样品检测结果显示,该双重荧光定量RT-PCR方法和病毒分离鉴定方法的符合率为94.44%,与常规RT-PCR方法的符合率为88.23%,而常规RT-PCR方法与病毒分离方法的符合率为83.33%,表明该方法与病毒分离方法的准确率更接近,可以用于临床检测。本实验结果表明H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为H10N8亚型AIV的检测及监测提供了有力的技术手段。

寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎的作用

目的探讨寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染小鼠肺炎的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg/kg)、连花清瘟颗粒组(3.3 g/kg)和寒喘祖帕低、中、高剂量组(0.38、0.76、1.52 g/kg)。除正常组外,其余组小鼠均采用甲型流感病毒H1N1/PR8株病毒液经滴鼻感染建立肺炎模型。各组连续给予相应药物4 d,取样。测定小鼠体质量、肺指数及抑制率、流感病毒载量、14 d内小鼠死亡率、生存时间;ELISA法检测肺组织中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理改变并评分。结果寒喘祖帕颗粒中、高剂量组可降低感染后小鼠肺指数,其肺指数抑制率分别为24.01%、32.63%;可降低死亡率,其死亡保护率分别为44.44%、50%。寒喘祖帕低、中、高剂量组均可降低小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平,改善小鼠肺部病变,延长平均存活天数,生命延长率分别为17.84%、24.32%、19.46%。结论寒喘祖帕颗粒可改善流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎症状,可降低死亡率、延长平均存活天数。

甲型H10N8流感重症患者1例

患者，男性，75岁，急性起病，病程2d。主要表现为发热，最高体温38.7℃，伴乏力纳差，无寒战，轻咳，无明显咯痰，无胸痛、胸闷、气喘，无呕吐，自用感冒药（具体不详）效果差，于2014年2月3日入住我院。查体：体温38.7℃，P 100次/ min， R 22次/ min，BP 166/100mm Hg。

一株鸽源H10N8亚型禽流感病毒的遗传进化分析及小鼠感染特性的研究

为了解从江苏某活禽市场分离鉴定出的一株鸽源H10N8亚型禽流感病毒(AIV)A/pigeon/Jiangsu/JYP090602/2019株的生物学特性,本研究对该分离株进行空斑纯化和全基因组测序,并以10^(6) EID_(50)病毒感染BALB/c小鼠进行致病性研究。序列分析结果显示,该病毒HA基因的裂解位点为334PEIMQGR↓GLF^(343),只含有一个碱性氨基酸,为低致病性AIV的分子特征。其HA基因与A/chicken/Zhejiang/102622/2016(H10N8)株HA基因的同源性达98.7%,NA基因与A/pigeon/Longquan/LQ67/2016(H2N8)株NA基因的同源性达96.5%,内部基因PB2、PB1、PA、M、NP和NS分别与H7N3、H1N9、H10N7、H1N2、H7N3和H11N3亚型AIV相应基因的同源性最高,具有遗传多样性。小鼠感染试验结果显示,该病毒仅引起小鼠体质量轻微变化,但能够在小鼠的肺脏和心脏中复制,肺脏病毒滴度为4.74 lg EID_(50)/mL,且可引起肺部组织病变。上述结果表明该病毒株为新型重组病毒,对小鼠具有一定致病性,本研究为H10亚型禽流感的预警和防控提供一定的参考依据。

H10N8亚型禽流感病毒的研究进展

中国于2013年底首次发现H10N8亚型禽流感病毒(AIV)能感染人并致死的病例,而在此之前从未有过关于H10N8亚型病毒能感染人的报道,目前也未在其他国家监测到H10N8亚型AIV感染人的病例。与H7N9亚型AIV相似,H10N8亚型AIV在家禽中致病性很弱,可一旦感染人能表现出很强的致病性。感染了H10N8亚型AIV的患者病情恶化快、死亡率高、对人的健康危害很大,但至今尚无有效的防制手段。目前还不太清楚H10N8亚型AIV是通过何种途径传播给人的,今后H10N8亚型AIV是否会在人群中引发新的疫情暴发是人们普遍关心的问题。文章简要介绍了H10N8亚型AIV的特点及研究现状。

四重荧光定量RT-PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒

目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测。结果该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、H7、N9与RNase P灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55%。用该法检测1 896例临床标本,结果 Flu A 235例,H7N9 127例,与其他试剂报告结果完全一致。结论建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测H7N9病毒,灵敏度与特异性好,可用于H7N9病毒感染患者的早期诊断。

热毒宁吸入溶液对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染所致小鼠病毒性肺炎的药理作用研究

目的探讨热毒宁吸入溶液对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠致肺炎模型的药理作用,为临床应用提供基础。方法实验动物按体质量随机分为8组,分别为正常对照组、模型对照组、利巴韦林对照组、热毒宁注射给药对照组,热毒宁雾化吸入给药高剂量组0.23 g生药/kg(20 min)、中剂量组0.12 g生药/kg(10 min)、低剂量组0.06 g生药/kg(5 min)和极低剂量组0.03 g生药/kg(2.5 min)。采用甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠致肺炎模型,通过检测肺指数、肺部病理变化及肺组织中病毒载量、炎症因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量等指标评价热毒宁吸入溶液治疗流感病毒性肺炎的药理作用。结果热毒宁吸入溶液4个剂量组均可不同程度上降低小鼠肺指数、减轻肺组织病理损伤、降低病毒载量及减少IL-6、TNF-α的含量。结论热毒宁吸入溶液雾化吸入给药对甲型流感病毒A/PR/8/H1N1感染所致小鼠病毒性肺炎具有显著治疗作用。

金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2作用研究

【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,并观察金翘片的解热、镇痛、抗炎作用。【结果】金翘片具有明显的抑制甲型H3N2流感病毒致肺病变作用(P <0.05或P <0.01),抑制率随剂量增大而增大,呈量效关系;同时也对禽流感病毒H9N2感染鼠肺病变表现出明显的抑制作用(P<0.01)。并具有显著的解热、镇痛、抗炎作用。【结论】金翘片在体内具有显著的抗甲型H3N2流感病毒、抗禽流感病毒H9N2及解热、镇痛、抗炎作用。

医院成功应对甲型H7N9禽流感的实践

借鉴SARS和甲型H1N1流感防控经验,结合医院实际,从预警前移、加强培训与演练、加强质量监管、加强信息管理、强化服务管理等5方面,总结了医院成功救治H7N9感染患者的经验。

全球首例人感染H10N8禽流感患者的诊断与治疗的评估

目的评估影像学对人感染H10N8的诊断与临床治疗的价值。资料与方法回顾性分析1例人感染H10N8确诊患者的胸部影像学资料及特点。结果 1例73岁女性患者因咳嗽、咳痰、胸闷3 d,发热1 d,于2013年11月30日入住南昌大学第三附属医院。患者入院出现重症肺部感染表现,12月1日胸部CT示右肺中下叶大片实变影伴空气支气管征,左肺下叶磨玻璃样渗出性病变;于12月3—5日复查床边胸部X线片,病灶迅速进展扩散,累及的肺叶增多,面积扩大,病灶融合,胸腔出现大量积液,短时间内发展为急性呼吸窘迫综合征,为典型的"白肺"征。12月6日患者经抢救无效死亡。12月10日中国疾病预防控制中心报告:该病例为人感染H10N8禽流感。结论人感染H10N8禽流感的胸部影像学表现为进行性实变和渗出。

人感染H7N9禽流感与甲型H1N1流感重症肺炎的临床及CT影像学特点分析

目的通过对人感染H7N9禽流感与甲型H1N1流感重症肺炎的临床及CT影像学特点的分析及探讨，为以后的临床工作，提供一定价值的参考。方法选择获得临床确诊的人感染H7N9禽流感患者15例和甲型H1N1流感重症肺炎患者25例作为研究对象，对患者的临床表现、并发症以及治疗转归情况进行回顾性分析，对2组患者进行CT影像学检查，并对检查结果展开对比分析。结果经对比发现，H7N9患者气促、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征发生率，入住ICU患者所占比例均显著高于H1N1患者（P＜0.05）；H7N9组患者有创机械通气治疗率、死亡率显著高于H1N1组患者（P＜0.05），好转率显著低于H1N1组（P＜0.05）；H7N9患者CT检查发现小叶间隔变厚、胸腔积液、网格状密度影表现高于H1N1患者（P＜0.05）。结论人感染H7N9禽流感患者的基础疾病较H1N1患者多，并且病情发展迅速，死亡率高，经CT检查可以对H7N9和H1N1患者的影像特征进行客观反映，对于临床治疗具有重要的指导意义。

H10亚型和N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

根据基因库中H10亚型禽流感病毒(AIV)HA基因、N8亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化引物之间的浓度,建立了H10亚型和N8亚型AIV三重RT-PCR检测方法。该法对含有H10和N8亚型AIV的模板可特异性扩增出267 bp(H10亚型AIV)、464 bp(N8亚型AIV)和693 bp(AIV)目的条带,对H10亚型AIV扩增出267、693 bp目的条带,对N8亚型AIV扩增出464、693 bp目的条带,对其他亚型AIV仅扩增出693 bp目的条带,对常见禽病病原体均未扩增出任何条带。该法对H10亚型和N8亚型AIV检测下限为10~3拷贝/μL。120份临床样品检测结果与病毒分离鉴定一致。研究建立的H10亚型和N8亚型AIV三重RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,为同时快速鉴别检测H10亚型和N8亚型AIV提供一种简便、快速和有效的方法。

1例人感染H_(10)N_8禽流感重症患者的护理

H10 N8由不同毒株经过基因重排而产生，是一种新型的禽流感病毒类型，容易感染哺乳动物［1］。2014年1月25日，江西省南昌市疾病预防控制中心发现1例重症肺炎疑似禽流感病例，经中国疾病预防控制中心进一步检测及国家卫生计生委组织专家会诊，确诊为人感染 H10 N8禽流感病例，为全球第二例、江西省成功治愈的首例病例。现将其护理体会报告如下。

受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型H1N1流感病毒感染小鼠记忆性CD8^+T细胞的应答

受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)是坏死复合体的关键成分之一,介导细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的发生。前期研究发现流感抗原特异性CD8^+T细胞的初次应答部分依赖于RIPK3分子,为探讨其在记忆性CD8^+T细胞应答中的作用,对初次感染后的C57BL/6小鼠在免疫记忆阶段进行了再次感染,并用流式细胞仪检测了流感病毒特异性的记忆性CD8^+T细胞的表型和功能。结果发现小鼠初次感染甲型H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34后37d,RIPK3敲除小鼠的CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力均显著低于野生型小鼠;在再次感染相同病毒时,RIPK3敲除小鼠流感病毒特异性CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子IFN-γ的能力依旧显著低于野生型小鼠;而CD8^+中枢型记忆性T细胞(TCM)比例显著高于野生型小鼠,效应型记忆性T细胞(TEM)或效应性T细胞(TEff)比例却显著低于野生型小鼠。提示RIPK3分子参与调节流感病毒特异的记忆性CD8^+T细胞诱生数量和分泌细胞因子功能,并影响其TCM与TEM/TEff的比例,为深入探索病毒特异的记忆性CD8^+T细胞应答的分子机制提供了新线索。

人甲型禽流感病毒（H5N1亚型）感染研究最新进展

甲型禽流感病毒（H5N1亚型）（以下简称H5N1）感染是鸟类流行病，可引起人类致病，其死亡率高，可引起大流行。该文对世界卫生组织2005年版的禽流感报告进行了更新，并介绍了第二届世界卫生组织咨询会议上关于人甲型禽流感病毒（H5N1亚型）感染的临床表现方面的内容。

新型甲型H7N9禽流感病毒HA与NA的进化分析

目的研究2013年甲型H7N9流感病毒血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)的基因进化特征,探讨该病毒的遗传变异和分子特性。方法收集GenBank中已登录的禽流感病毒基因相关参考序列,利用生物信息学软件DNAMAN和MEGA 4.0对HA和NA基因序列进行进化分析,并利用Phymol软件进行同源建模。结果 2013年甲型H7N9流感病毒HA与NA的氨基酸序列与国际/国内参考毒株的同源性为95.7%～99.8%。同源建模发现该毒株HA的氨基酸序列发生了Q226L突变,NA上也发生了R294K和69 5N del氨基酸突变。结论新型甲型H7N9流感病毒的HA和NA基因序列与我国江浙地区和部分东亚国家的H7N9禽流感病毒参考株具有高度的同源性,该毒株HA与NA蛋白氨基酸序列发生的变异,可能是病毒致病性改变的原因之一。

人感染甲型H7N9禽流感肺炎1例

患者男，57岁。1周前受凉后出现高热达39．4℃，伴肌肉酸痛，咳嗽、咳痰；外院检查血常规示白细胞偏低（具体数值不详），发病第5天正位胸片示双肺纹理粗（图1），甲型流感病毒检测阴性，考虑为病毒性感冒，给予清热解毒、退热对症治疗，病情未见好转遂来我院。查体：体温39．3℃，双肺呼吸音粗，未闻及明显干湿啰音、胸膜摩擦音及哮鸣音。血常规WBC2．04×10^9／L ，N86．3％，PLT91×10^9／L。血气分析：PO256mmHg ，PCO231．1mmHg。患者否认结核等传染病及其接触史，无食物及药物过敏及家族遗传病史，否认家族中有同类病史。

H10N8禽流感病毒血凝素中和抗体的结合位点鉴定

目的制备并筛选H10N8型禽流感病毒血凝素蛋白的中和抗体,并对其抗原结合位点进行鉴定。方法采用基因工程技术制备H10N8血凝素蛋白单克隆抗体,通过假病毒微量中和实验筛选中和抗体,ELISA和Western blot实验确定抗体结合血凝素蛋白的区域,Discovery Studio 3.5模拟与对接分析软件预测抗原结合位点,进而研究其在H10亚型内的保守性。结果获得1株具有假病毒中和活性的H10N8单克隆抗体,该抗体的结合表位在HA1上,且具有H10亚型内的保守性。结论成功制备1株中和抗体,为H10N8禽流感疫苗和单克隆药物的研究提供了基础。

人感染甲型H7N9禽流感疫情及动物源性疾病的防控措施分析

本文从病原学特征、流行情况、临床表现等方面论述了人感染甲型H7N9禽流感疫情的基本情况,并以禽流感的防控措施为例探讨了动物源性疾病防控工作的要点。