2022—2023年北京市通州区甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的分析2022—2023年北京市通州区流感病原学监测中甲型H3N2亚型流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性,为流感防控提供科学依据。方法对通州区2022—2023年流感病原学监测结果进行统计分析,选取不同时间分离到的34株甲型H3N2亚型流感毒株,进行HA基因扩增和测序,应用MEGA11进行HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用邻接法构建HA基因遗传进化树,在线预测N-糖基化位点,分析其基因变异和进化特征。结果2022—2023年共检测流感病原学监测样本3660件,流感病毒核酸阳性率为21.50%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为57.81%。发热疫情样本共计4855件,流感病毒核酸阳性率为54.25%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为61.50%。34株甲型H3N2亚型流感病毒的HA基因序列与疫苗株A/Darwin/9/2021相比,核苷酸相似度为97.00%~98.50%,氨基酸相似度为97.40%~98.10%。基因进化分析显示,2022—2023均分布在3c.2a1b.2a分支,2022年8—11月分离的14株毒株分布在1a.1亚分支,2023年2—3月分离的20株毒株则分布在2a.3a.1亚分支。与疫苗株相比,2022—2023年的34株毒株在4个抗原决定簇上(B、C、D和E)发生了多位点氨基酸变异,且在186和225位点上均发生了替换。2022年的14株毒株,增加了158NYTY位点,存在13个潜在糖基化位点,2023年的20株分离株122NESF糖基化位点丢失,共有12个潜在糖基化位点存在。结论2022—2023年,北京市通州区人群中流行的甲型H3N2亚型流感病毒分布在2个进化分支上,2023年3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支取代了2022年3C.2a1b.2a.1a.1分支,成为流行株。及时分析流感病毒基因特性和进化趋势,对流感的防控有重要意义。

吉林省2018-2020年甲型H3N2亚型流感病毒耐药基因分析

目的掌握2018-2020年吉林省内H3N2亚型流感流行株对金刚烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供参考依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株34株,对M2和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果2018-2020年吉林省分离到流感毒株981株,其中甲型流感病毒毒株934株,乙型流感毒株47株。在分离到的甲型流感病毒毒株中,57.49%为H1N1pdm亚型毒株,39.61%为H3N2亚型毒株。对34株H3N2亚型流感病毒测序结果显示M2基因S31N耐药位点上发生了突变;在NA耐药相关基因位点E119V、Q136K、D151A、I222V、H274Y、R292K、N294S均未发生突变。结论吉林省2018-2020年以甲型流感流行为主。34株甲型H3N2亚型流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药,但仍对神经氨酸酶抑制剂敏感。

辽宁省2016～2017年甲型H3N2亚型流感病毒耐药性分析

目的分析辽宁省2016~2017流感年度H3N2亚型流感病毒M2蛋白和神经氨酸酶(NA)基因特点,了解并掌握该年度省内流感毒株对烷胺类药物及NA抑制剂类药物的耐药情况,为流感的治疗及防控提供科学依据。方法选取辽宁省内各市流感样病例,经病毒分离获得的甲型H3N2亚型流感毒株55株,对M2基因及NA基因进行扩增并测序后对耐药位点进行分析。结果 2016年4月~2017年3月,辽宁省共采集流感样病例标本13956份,分离流感毒株1528株。其中甲型流感毒株835株,H3N2亚型毒株378株,约占甲型流感毒株的45.3%。测序获得55株H3N2亚型流感毒株的M2基因片段(第572~1027核酸位点和NA基因片段(第1~914位核苷酸位点)核苷酸序列。经比对分析,全部检出S31N突变,对烷胺类药物均表现为耐药。此外,所有毒株的第51位均发生了异亮氨酸到缬氨酸的突变。NA基因耐药位点均未检出突变,未发现NA抑制剂类药物的耐药株。结论辽宁省2016~2017年流行的甲型H3N2亚型流感病毒普遍对烷胺类药物耐药,未发现NA抑制剂类药物的耐药株。因此,奥司他韦等NA抑制剂类药物是治疗H3N2型流感的敏感药物。但在实际工作中仍应对耐药性进行监测,实时关注耐药株的产生。

2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型HA和NA基因的分子特征分析

目的探讨2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的分子特征,为甲型流感病毒H3N2亚型的防控提供科学依据。方法从全球共享禽流感数据库(GISAID)中获得我国2016~2017年分离的525株甲型流感病毒H3N2亚型病毒和13株H3N2亚型参考株的HA和NA基因序列。应用MEGA 6.0软件分析HA和NA的分子进化特征、氨基酸位点和耐药位点的变异情况。结果进化树分析显示13株参考株之间HA和NA氨基酸的同源性均为96.9%~99.1%。2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的病毒株HA和NA氨基酸序列之间同源性均为96.3%~100%,HA和NA的优势亚分支均为3C.2a.1,相当一部分毒株分型不够明确。HA氨基酸变异分析显示9株发生N121E突变,103株发生N121K的突变且主要来源于2017年的香港毒株;182株发生G/R142K突变;A/Hong_Kong/3079/2017-HA和A/Guangdong-Chengguan/1383/2017-HA均发生A128I突变;NA蛋白仅3株(A/Hunan-Suxian/1980/2016-NA、A/Hunan-Yuhua/11799/2016-NA和A/Ningxia-Yuanzhou/1657/2016-NA)发现H275Y耐药位点突变。结论 2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的HA和NA蛋白与参考株间存在一定的差异,优势亚型均为3C.2a.1;与病毒的毒力及药物相关的部分关键氨基酸位点发生变异。应密切关注H3N2病毒的分子特征,为其防控提供参考。

湖州市2022年甲型H3N2亚型流感病毒分子特征分析

目的了解2022年湖州市甲型流感病毒的流行特点,明确流行株与疫苗株的匹配情况及流感病毒基因组进化特征。方法随机抽取2022年湖州市甲型流感病毒核酸阳性标本进行全基因组测序,采用Bioedit、MEGA 7.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析。结果2022年6月—12月甲型H3N2亚型流感病毒是湖州市流感的唯一流行型别。测得15株甲型H3N2亚型流感病毒全基因组,序列分析显示均属于3C.2a分支,为同一个进化来源,且与疫苗株A/Darwin/9/2021/H3N2关系较近。与疫苗株A/Darwin/9/2021/H3N2相比,15株H3N2亚型流感序列5个抗原决定簇位点的氨基酸序列与疫苗株成高度一致,HA蛋白上受体结合位点(RBS)的5个保守氨基酸也没有变化;HA蛋白增加了一个糖基化位点,NA蛋白糖基化位点没有变化。结论2022年湖州流行的甲型流感未发生具有流行病学意义的变异,接种当年度疫苗对甲型流感有一定的预防效果。需加强流感疫苗接种的宣传教育。

2010年-2013年宜春市甲型H3N2亚型流感病毒HA1基因进化分析

目的掌握宜春市2010年-2013年甲型H3N2亚型流感病毒HA1基因特征,了解WHO甲3型疫苗推荐株对宜春市甲3亚型流感病毒预防效果。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒HA1基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar 5.0、Bio Edit 7.0、Mega 3.1软件对测序结果进行分析处理。结果对14株毒株进行HA1基因序列测定,分别与当年WHO对北半球推荐的疫苗株进行比对,2010年、2012年、2013年氨基酸同源性分别为98.6%~98.7%、99.2%~99.3%、98.4%~98.8%;氨基酸平均替换数分别为7.5个、5个、8.25个,2012年和2013年分别有2处和4处变异位于抗原决定簇,2010年未在抗原决定簇区发生氨基酸变异替换;14株所测甲型H3N2亚型流感病毒与当年疫苗推荐株均在同一分支上,亲缘性较近。结论 2010年-2013年甲型H3N2亚型流感病毒分离株HA1基因在不断发生变异,根据WHO不同年度推荐疫苗株生产的疫苗,对本市的甲型H3N2亚型流感保护效果良好。

辽宁省2014年-2016年季节性A(H3N2)流感病毒耐药基因分析

目的分析辽宁省2014年-2016年甲型H3N2亚型流感毒株基质蛋白2(matrix protein2,M2)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因特点,掌握辽宁省内流感流行株对烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株51株,提取核酸后对M2基因和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果所选毒株均发生了M2基因的S31N耐药位点突变,M2基因的其余耐药位点和NA基因的全部耐药位点未发现耐药突变。结论辽宁省2014年-2016年流行的甲型H3N2型流感毒株普遍对烷胺类药物耐药,对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。奥司他韦、扎那米韦等NA抑制剂类药物依然是近年来甲型H3N2流感防治的敏感药物。

白及提取物体外抗流感病毒药效及其机理研究

目的:评价白及提取物体外抗流感病毒药效及研究其机理。方法:以病毒血凝效价及核酸量为指标,评价白及提取物在鸡胚模型的抗流感病毒作用。以流感病毒致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)及血凝抑制试验(HI)为指标,评价白及提取物抑制流感病毒的入侵作用及作用靶点。以CPE及病毒RNA合成量为指标,评价白及提取物对病毒复制及RNA合成的抑制作用。神经氨酸酶抑制(NAI)试验测定白及提取物对病毒NA活性的抑制作用。结果:鸡胚模型中,白及提取物各剂量组血凝滴度以及病毒核酸量与病毒对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。细胞实验中,白及水提物和醇提物均具有较好的抗病毒入侵效果,抑制率最高分别达到(87.04±7.81)%和(60.14±6.88)%;水提物通过干预MDCK细胞HA受体阻止病毒的入侵。白及水提物和白及醇提物均具有较好的抗流感病毒复制效果,与病毒对照组比较,白及提取物可显著降低病毒RNA的合成(P<0.01)。醇提物具有较好的神经氨酸酶抑制活性,NA-IC_(50)为16.0 mg/mL。结论:白及提取物通过抑制流感病毒与HA受体结合、干预病毒RNA合成及抑制神经氨酸酶活性发挥抗流感病毒作用。

白及提取物小鼠体内抗流感病毒药效研究

[目的]评价白及提取物小鼠体内抗流感病毒的药效。[方法]流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2),经BALB/C小鼠和鸡胚体内增毒建立鼠肺适应株,测定其流感病毒半数致死剂量(mouse influenza virus median lethal dose,MLD50)。雌性BALB/C小鼠84只,适应性培养后随机分为7组,其中模型组,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组以0.1MLD50的鼠肺适应株病毒90μL滴鼻感染,二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液滴鼻。感染后2h,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组分别以白及提取物高、中、低剂量(8g/kg·d、4g/kg·d、2g/kg·d)和达菲0.03g/kg·d灌胃,模型组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液、DMSO组给予等量DMSO灌胃,灌胃剂量均为200μL/只,1次/d,连续7d。灌胃第1、3、5、7天小鼠摘除眼球取血,ELISA法测定血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-α(interferon-α,IFN-α)和IFN-β的含量;取肺脏称重并计算肺指数和肺指数抑制率;荧光定量PCR检测肺组织中病毒载量;HE染色观察肺组织的病理变化,综合评价白及提取物体内抗流感病毒药效。[结果]模型组小鼠肺组织病理切片显示肺组织间质性炎症明显,可见大量炎性细胞浸润,病毒载量不断增加;正常对照组和DMSO组小鼠肺组织中无流感病毒检出,无炎症改变。经白及提取物治疗,肺组织病理切片结果显示,炎症改善、炎性浸润细胞数量下降,高剂量组尤其明显。白及提取物肺指数抑制率最高达35.8%(高剂量组,第7天),达菲组最高可达47.2%。与模型组比较,各时间点白及提取物各剂量组与达菲组Ct值增加,病毒载量逐渐减少。与模型组比较,感染后第1、3、5、7天,白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中细胞因子IL-2含量均升高,除白及提取物中剂量组第3天外,其余时点白及提取物高、中剂量组与达菲组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),低剂量组无统计学差异(P>0.05)。感染后第1~3天,模型组、白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中IFN-α、IFN-β含量明显升高,到第5~7天又逐渐下降。与模型组比较,白及提取物高剂量组和达菲组第1、3、5天IFN-α含量升高,差异具有统计学意义(P<0.01);中、低剂量组第1、3天IFN-α含量升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,白及提取物高、中剂量组和达菲组第1、3、5、7天IFN-β含量升高,差异均有统计学意义(P<0.01);白及提取物低剂量组第5天IFN-β含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]白及提取物在小鼠体内具有显著的抗流感病毒作用,可能与促进IL-2、INF-α、INF-β生成,进而增强小鼠免疫功能有关。

陕西省商洛市2012-2015年流感监测结果分析

目的了解商洛市2012-2015年流感流行情况及趋势分析。方法收集商洛市2012-2015年流感监测平台流感样病例(influenza-like illness,ILI) 2 150例,运用Real-time PCR进行流感分型,用Excel、SPSS 22. 0对数据进行统计分析。结果商洛市2012-2015年流感阳性率分别为28. 57%(38/133)、1. 35%(8/593)、10. 01%(68/679)、5. 37%(40/745);不同年份病原构成不同,2012年、2015年流感以B型为主,构成比分别为71. 05%、80. 00%,2013年流感以新甲型H1为主,构成比为87. 50%,2014年流感亚型以H3为主,构成比为52. 94%;不同年龄组比较发现,0~24岁学生中以B型为主,25~59岁青壮年以H3为主,15~24岁学生流感阳性检出率最高,为12. 42%;性别不同,男女核酸阳性率差异有统计学意义(χ~2=7. 108,P <0. 01),H3亚型男女核酸阳性率差异有统计学意义(χ~2=17. 763,P <0. 01)。结论商洛市2012-2015年流感高发于春冬季,ILI%趋势呈现小幅上升。各年流行株并不相同。流感样病例核酸男性阳性率高于女性。应继续加强流感监测。

2014年北京市西城(南)区学校集中发热疫情流行特征分析

目的分析北京市西城(南)区学校集中发热疫情的流行特征,探讨疫情控制的方法和效果。方法采用描述流行病学方法,对学校集中发热疫情报告、流行特点、症状、疫苗接种情况等进行分析,总结疫情发生原因和控制措施效果。结果 2014年11、12月共报告学校集中发热疫情34起,涉及11所学校,均由甲型H3N2亚型流感病毒引起。疫情呈现内部聚集,81.81%的学校有多个班级出现疫情。发热学生就诊率为45.65%,体温以中、高热为主,70.81%的发热学生符合流感样病例定义,临床表现以咳嗽、咽痛和头痛为主。结论 2014年辖区学校集中发热疫情报告明显高于上一年度,主要是甲型H3N2亚型流感病毒流行,寄宿制学校和小学是疫情防控重点。