甲基亚砷酸对内皮型一氧化氮合酶磷酸化影响

目的观察无机砷的活性中间产物-甲基亚砷酸（MMA^Ⅲ）对牛主动脉血管内皮细胞（BAEC）的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化以及活性氧自由基（ROS）产生的影响。方法培养的BAEC分别暴露于MMA^Ⅲ（0．75／μmol／L，0-15min）；亚砷酸钠（iAs^Ⅲ，100／μmol／L，0～60min）；或N-乙酰半胱氨酸（NAC，1mmol／L）预处理2h后，再暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L，0-15min）。收获细胞悬液进行eNOS磷酸化蛋白的westem blot分析；应用二氰二乙酰荧光素法（H2DCFDA）观测细胞内的ROS产生。结果BAEC暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）15min后，eNOSser1179磷酸化显著增加（P〈0．05），NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象；MM^Ⅲ暴露也能够诱导eNOSser1179磷酸化（P〈0．05），但是需要高浓度和更长的暴露时间（100μmol／L，30min）；MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）暴露能够诱导BAEC产生ROS，NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象。结论MMA^ Ⅲ暴露能够诱导细胞内产生ROS以及ROS依赖性eNOS磷酸化。

甲基亚砷酸对内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的研究甲基亚砷酸(MMAⅢ)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响,并初步探讨MMAⅢ抑制eNOS活性的作用机制。方法从体外培养的牛大动脉血管内皮细胞中制备eNOS提取液,单独暴露于MMAⅢ(暴露剂量分别为1、2.5、5、10、15μmol/L)或其他砷化合物(亚砷酸钠、砷酸钠、甲基砷酸或二甲基砷酸,暴露剂量均为10μmol/L);或者联合暴露于MMAⅢ(10μmol/L)和二硫苏糖醇(DTT,100μmol/L)。37℃暴露5min后测定L-[3H]精氨酸产生的L-[3H]瓜氨酸量来反映eNOS活性。结果eNOS活性随着MMAⅢ暴露剂量增加而逐渐降低,MMAⅢ的2.5、5、10、15μmol/L剂量组的eNOS活性分别是对照组的44.4%、23.4%、11.7%和6.6%,均显著低于对照组(p<0.01);MMAⅢ对eNOS活性的50%抑制剂量(IC50)为2.1μmol/L;其他砷化合物10μmol/L暴露对eNOS活性均无明显影响(p>0.05);DTT(100μmol/L)能够部分恢复MMAⅢ暴露引起的eNOS活性降低。结论MMAⅢ对eNOS活性具有显著抑制作用;MMAⅢ抑制eNOS活性很可能与MMAⅢ和eNOS分子的二巯基结构的相互作用有关。

单甲基亚砷酸联合隐丹参酮抑制多发性骨髓瘤U266细胞增殖作用机制的研究

目的研究单甲基亚砷酸(MMAIII)联合隐丹参酮(CPT)对多发性骨髓瘤U266细胞的协同抑制效应,阐明其诱导多发性骨髓瘤凋亡的作用机制。方法多发性骨髓瘤U266细胞用含10%gibco胎牛血清的RPMI1640培养液培养,按隐丹参酮单药组、MMAIII单药组和联合组分别加药处理。cell-counting-kit-8(CCK8)法检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡标记蛋白PARP的总蛋白和剪切表达水平;酶标仪检测酸性鞘磷脂酶活性;免疫荧光技术检测细胞膜神经酰胺和脂筏标记物。结果 CCK8法检测结果显示,隐丹参酮浓度15μM时细胞存活率为(80.9±5.4)%(24h)、(60.0±8.4)%(48h),单甲基亚砷酸浓度1μM时细胞存活率为(82.5±5.8)%(24h)、(67.7%+9.7)%(48h),隐丹参酮(15μM)联合单甲基亚砷酸(1μM)作用U266细胞24h、48h后细胞存活率为(29.1±7.0)%(24h)、(18.0±2.7)%(48h);流式细胞术结果显示,联合用药组细胞凋亡率为(41.7±4.4)%、单甲基亚砷酸组为(10.6±4.0)%、隐丹参酮组为(10.5±3.0)%;Western Blot显示,联合作用组凋亡蛋白PARP剪切活化水平较单甲基亚砷酸单药组及隐丹参酮单药组有显著升高;酸性鞘磷脂酶活性测定结果显示,联合用药组上调多发性骨髓瘤U266细胞酸性鞘磷脂的活性;免疫荧光技术检测结果显示,联合用药后多发性骨髓瘤U266细胞膜上荧光强度增加,加入Filipin后荧光强度较联合用药减少。结论 MMAIII与CPT协同作用能诱导人多发性骨髓瘤U266细胞凋亡发生,其作用机制主要与促进细胞膜鞘磷脂水解生成神经酰胺、诱导脂筏聚集促进凋亡相关蛋白剪切活化密切相关。

中药砷剂活性代谢产物单甲基亚砷酸的生物学效应研究进展

三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）俗称砒霜,始载于宋《开宝本草》,其味苦酸,有毒,归脾、肺、肝经,具有蚀疮、去腐、杀虫、劫痰定喘、劫疟之功。砷是一种广泛存在于人类生活环境中的致癌物质,与包括皮肤癌、肺癌和膀胱癌在内的多种恶性肿瘤相关。近年来,As2O3被成功应用于治疗急性早幼粒细胞性白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）。此外,砷可以诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡。单甲基亚砷酸（MMAIII）是As2O3甲基化的活性代谢产物,大量研究表明MMAIII具有比As_2O_3更强的生物学活性。

三氧化二砷中间代谢产物二甲基亚砷酸（DMA^Ⅲ）与大鼠血红蛋白相互作用的分子机制研究

为了研究三氧化二砷的中间代谢产物三价二甲基亚砷酸DMAIII与大鼠血红蛋白的作用位点及其机制,本研究将SD大鼠随机分成对照组和给药组,对照组单次经口给蒸馏水,给药组单次经口给予三价亚砷酸(iAsIII),分离大鼠血红细胞→溶血→获得血红蛋白。利用高效液相质谱(HPLC)联用结合电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)分析砷结合血红蛋白的化学形态。利用时间飞行质谱(LC/ESI-TOF-MS)分析DMAIII与血红蛋白结合位置,进一步采用分子对接(molecular docking)方法预测了DMAIII与血红蛋白的结合模式,从分子水平上分析了DMAIII与血红蛋白的作用机制。实验结果表明,砷以DMAIII与大鼠血红蛋白结合,主要结合位点为血红蛋白的alpha链螺旋的Cys13周围的氨基酸口袋,该位置使DMAIII更容易结合半胱氨酸,并阻止了DMAIII的游离。指出DMAIII与血红蛋白的高亲和力与Cys13周围的空间结构有直接关系。

人肝细胞中甲基硫代砷酸的表征及其代谢过程的推测

利用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术对染砷后Chang肝细胞中的砷代谢产物进行分析。借助合成标准,采用标准加入法,表征出肝细胞中一种未知砷代谢产物甲基硫代砷酸(MMTA)。定量分析显示,MMTA含量随染砷浓度升高呈上升趋势。采用质量平衡分析法对双氧水处理前后的染砷细胞样品进行研究。结果显示,除小分子砷代谢产物外,细胞中部分砷代谢产物以大分子形态存在,推测其为砷蛋白类物质。由于MMTA系首次在人体肝细胞中发现,本研究结合实验现象和相关文献推测该物质系细胞代谢产物,并且其代谢途径与二甲基硫代砷酸相似,是以细胞内与其对应的一甲基亚砷酸为代谢起点。

AS3MT基因多态性与癫痫患儿临床特征、治疗效果的关系

目的探讨亚砷酸甲基转移酶([Arsenic(+3 oxidation state)methyltransferase,AS3MT])基因多态性与癫痫患儿临床特征、治疗效果的关系。方法将2019-07/2022-07月作者医院收治的164例癫痫患儿作为癫痫组,同时选取210例健康儿童作为健康组。癫痫组规律接受6个月及以上丙戊酸钠治疗,根据治疗效果不同分为有效组(n=129)和无效组(n=35)。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术鉴定AS3MT rs7085104基因分型;采用Hardy-Weinberg遗传平衡度检验进行样本代表性评估;采用单因素及多因素Logistic回归分析探讨影响癫痫患儿治疗效果的因素。结果健康组与癫痫组AS3MT rs7085104 AA、GA、GG三种基因型均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。癫痫组AS3MT rs7085104 AA、GA、GG基因型频率分别为31.10%、48.17%、20.73%,健康组AA、GA、GG基因型频率分别为15.71%、38.10%、46.19%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫每月发作频率>3次、有出生窒息史、有热性惊厥史患儿AS3MT rs7085104 AA、GA基因型分布频率分别高于癫痫每月发作频率≤3次、无出生窒息史、无热性惊厥史患儿,而GG基因型分布频率分别低于癫痫每月发作频率≤3次、无出生窒息史、无热性惊厥史患儿(P<0.05)。有效组AS3MT rs7085104 AA、GA、GG基因型频率分别为24.81%、52.71%、22.48%,无效组AA、GA、GG基因型频率分别为54.29%、31.43%、14.28%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,癫痫每月发作频率>3次[OR=2.776,95%置信区间(confidence interval,CI):1.751~4.440]、有热性惊厥史(OR=2.375,95%CI:1.555~3.627)、AS3MT rs7085104 GA基因型(GA vs.AA,OR=0.397,95%CI:0.257~0.612)、AS3MT rs7085104 GG基因型(GG vs.AA,OR=0.322,95%CI:0.200~0.518)是癫痫患儿治疗无效的影响因素(P<0.05)。结论AS3MT rs7085104基因多态性与癫痫患儿每月发作频率、出生窒息史、热性惊厥史有关,同时影响丙戊酸钠的治疗效果,且携带AA基因型患儿的治疗效果更差。

生物体砷代谢解毒机制的研究进展

近年来砷污染问题引起了世界各地的广泛关注,砷通过地下水饮用、食物链传递进入人体,对人体产生伤害。因此,必须采取措施控制砷进入动植物和人体的数量,改变砷在生物体内的赋存形态,从而降低砷对人体产生的毒害。本文综述了砷在生物体内的基本代谢过程;砷代谢过程中的关键酶:砷酸盐还原酶、亚砷酸甲基转移酶的结构及功能。通过调控砷代谢过程中的关键酶活性,可改变砷在生物体内的形态配比和毒性,从而降低砷对人体产生的健康风险。