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胚胎干细胞分化为表皮样细胞基因启动子区差异甲基化的研究 被引量:2
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作者 张仁礼 刘彩霞 +4 位作者 孟锦绣 张丽丽 韩冬 蔡佳杰 闻安民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期769-777,共9页
目的:用全基因组甲基化芯片探讨可能参与小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为表皮样细胞(ELCs)的基因DNA甲基化调控机制。方法:利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESCs诱导定向分化为ELCs,分别取未分化的ESCs和诱导分化后的ELCs进行芯片分析,利... 目的:用全基因组甲基化芯片探讨可能参与小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为表皮样细胞(ELCs)的基因DNA甲基化调控机制。方法:利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESCs诱导定向分化为ELCs,分别取未分化的ESCs和诱导分化后的ELCs进行芯片分析,利用甲基化免疫共沉淀技术将每组染色质DNA的甲基化片段共沉淀下来,和本底对照(input)分别标记Cy3和Cy5荧光,一同上样于Roche NimbleGen高密度(2.1M,芯片覆盖22 425个启动子)甲基化芯片,启动子区采用UCSC数据库进行注释,启动子覆盖转录起始位点上游8 200 bp、下游3 000 bp,通过对这些启动子区甲基化谱的分析,筛选出甲基化调控可能与ESCs向ELCs定向分化相关的基因。结果:小鼠ESCs和ELCs两组细胞在基因组水平上有17 500个启动子存在甲基化,其中有3 435个启动子发生甲基化差异变化,高CpG岛的启动子有894个发生差异甲基化,中度CpG岛的启动子有974个发生差异甲基化,低CpG岛的启动子有1 567个发生差异甲基化。结论:在ESCs向ELCs定向分化的过程中,众多的基因启动子区发生了甲基化程度的变化,说明细胞分化是一个复杂的表观遗传学事件。这些基因启动子的差异甲基化在ESCs向ELCs定向分化过程中所起的作用及其机制尚有待进一步的功能学研究阐明。 展开更多
关键词 DNA甲基 胚胎干细胞 表皮样细胞 启动子 甲基DNA免疫共沉淀
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游离二氧化硅所致肺成纤维细胞转分化过程中DNA甲基化差异基因的MeDIP-seq检测 被引量:3
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作者 侯建永 姚武 郝长付 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2017年第1期5-8,共4页
目的:检测游离二氧化硅所致肺成纤维细胞转分化过程中可能存在的DNA甲基化差异基因并探讨其可能作用机制。方法:原代培养肺成纤维细胞和肺泡巨噬细胞,建立共培养的矽肺体外模型,采用甲基化DNA免疫共沉淀测序技术检测分析不同染毒时间(0... 目的:检测游离二氧化硅所致肺成纤维细胞转分化过程中可能存在的DNA甲基化差异基因并探讨其可能作用机制。方法:原代培养肺成纤维细胞和肺泡巨噬细胞,建立共培养的矽肺体外模型,采用甲基化DNA免疫共沉淀测序技术检测分析不同染毒时间(0、24、48 h)的肺成纤维细胞之间的DNA甲基化差异基因,并采用DAVID工具对检测到的甲基化差异基因进行KEGG的通路富集分析。结果:共发现8 791个基因的DNA甲基化程度在3个染毒时间组中均存在差异,DAVID工具分析发现这些差异主要集中在代谢、环境信息过程、细胞过程、生物体系统、人类疾病相关通路等通路中。结论:矽肺形成过程中存在大量DNA甲基化程度发生改变的基因,且这些基因涉及多个通路。 展开更多
关键词 矽肺 DNA甲基 甲基DNA免疫共沉淀测序
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MeDIP-Seq检测大鼠不同状态雪旺细胞基因甲基化水平
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作者 林伟 樊保佑 +2 位作者 冯世庆 任一鸣 周先虎 《天津医药》 CAS 2017年第2期151-154,共4页
目的探寻大鼠正常态雪旺细胞(NSCs)和激活态雪旺细胞(ASCs)差异甲基化基因。方法成年Wistar大鼠结扎坐骨神经,饲养7 d后分别从坐骨神经和臂丛神经提取ASCs和NSCs。S-100抗体免疫荧光染色鉴定细胞,CCK-8法测定细胞生长情况。甲基化免疫... 目的探寻大鼠正常态雪旺细胞(NSCs)和激活态雪旺细胞(ASCs)差异甲基化基因。方法成年Wistar大鼠结扎坐骨神经,饲养7 d后分别从坐骨神经和臂丛神经提取ASCs和NSCs。S-100抗体免疫荧光染色鉴定细胞,CCK-8法测定细胞生长情况。甲基化免疫共沉淀测序(Me DIP-Seq)技术筛选出ASCs和NSCs的差异性甲基化区域;分析与轴突再生相关的差异甲基化基因在染色体的分布情况,并进行基因本体(GO)和信号通路(PATHWAY)分析。结果成功获得了高纯度的ASCs和NSCs,两者S-100均表达阳性。在相同培养条件下,ASCs生长速度更快。Me DIP-Seq共发现177 176个差异性甲基化区域,其中位于启动子(≤1 kb)内1 097个、启动子(1~2 kb)内1 136个,Cp G岛内567个。共获得214个与轴突再生相关的差异甲基化基因,与NSCs相比,ASCs高甲基化基因191个,低甲基化基因23个。这些基因位于各个染色体上,以12号染色体上最多(22个),M染色体最少(2个)。GO分析结果显示差异甲基化基因涉及了轴突生长、轴突形成、轴突延伸和轴突导向等过程;并且与MAPK、细胞黏附分子和Ras等信号通路有关。结论 ASCs和NSCs的甲基化水平存在明显的差异,可能与轴突再生有关。 展开更多
关键词 DNA甲基 大鼠 Wistar 神经元 轴突 计算生物学 激活态雪旺细胞 正常态雪旺细胞 甲基化免疫共沉淀测序
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超声波细胞粉碎机在高通量测序片段化DNA中的应用 被引量:1
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作者 李根亮 卢舒雨 +4 位作者 许苡侥 黄捷 黄晓敏 肖娟 农嵩 《右江民族医学院学报》 2016年第5期466-469,共4页
目的 探讨超声波细胞粉碎机在高通量测序中应用的最佳DNA片段化条件。方法 DNA样品在冰浴条件下采用不同的超声功率、单次间隙时间和超声时间、工作时间(单一样品超声破碎时间)、仪器连续工作时间,通过琼脂糖凝胶电泳和2100生物分析... 目的 探讨超声波细胞粉碎机在高通量测序中应用的最佳DNA片段化条件。方法 DNA样品在冰浴条件下采用不同的超声功率、单次间隙时间和超声时间、工作时间(单一样品超声破碎时间)、仪器连续工作时间,通过琼脂糖凝胶电泳和2100生物分析仪分别检测基因组DNA片段化和羟甲基化免疫共沉淀效果。结果 超声功率280 W、间隙时间/超声时间5s/5s、总工作时间18min,仪器连续工作时间不超过90min,超声波处理时样品始终保持冰浴环境可获得高通量测序需要的、长度主要集中在200~500bp之间的DNA片段。结论 在我们优化的实验条件下,利用超声波细胞粉碎机可以得到重复性较好的基因组DNA片段,可满足高通量测序文库构建中对DNA片段质量的要求。 展开更多
关键词 基因组DNA 高通量测序 超声波细胞粉碎机 DNA片段 (羟)甲基化免疫共沉淀
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1对同卵双生新生儿DNA甲基化谱差异分析 被引量:2
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作者 李淑瑾 关亚卿 +4 位作者 张贺玲 付丽红 张晓静 马春玲 丛斌 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第4期299-302,共4页
目的探索1对同卵双生新生儿之间DNA甲基化谱的差异。方法应用甲基化免疫共沉淀结合高通量测序法对1对同卵双生新生儿的DNA甲基化谱进行检测,分析基因组DNA甲基化特点及其之间的差异,筛选适用于法医学分析的甲基化位点。结果两样本各获得... 目的探索1对同卵双生新生儿之间DNA甲基化谱的差异。方法应用甲基化免疫共沉淀结合高通量测序法对1对同卵双生新生儿的DNA甲基化谱进行检测,分析基因组DNA甲基化特点及其之间的差异,筛选适用于法医学分析的甲基化位点。结果两样本各获得7 300万原始测序序列(raw reads)数据,与人类基因组参考序列比对,各得到4 800万和5 000万唯一比对reads,其中大部分分布在重复区域,且在Alu序列分布最为广泛。两样本DNA甲基化富集区域(peak)各检测到257 362条和197 272条,基因组覆盖率分别为6.53%和5.29%,分布在基因组不同区域,以中间内含子区含量最多。分析两样本甲基化差异区域得到2 205条差异的甲基化序列,其中595条位于基因区域,1 610条位于基因间区,从中筛选出113条序列,用于进一步深入研究其法医学应用价值。结论本研究初步证实了DNA甲基化用于同卵双生子鉴定的可行性,为筛选同卵双生子DNA甲基化差异位点提供了基础数据。 展开更多
关键词 法医遗传学 DNA甲基 甲基化免疫共沉淀 同卵双生子 高通量测序
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N6-甲基腺苷修饰在脂多糖诱导的急性肺损伤中的变化 被引量:1
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作者 徐宸桢 李宁 +3 位作者 付庭吕 宋从宽 王文捷 耿庆 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期1067-1070,共4页
目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)修饰在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的变化,并探讨其机制。方法:将12只8~10周龄的C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组和LPS组。LPS组给予LPS(5 mg/kg)气管内滴注,对照组给予同等剂量生理盐... 目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)修饰在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的变化,并探讨其机制。方法:将12只8~10周龄的C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组和LPS组。LPS组给予LPS(5 mg/kg)气管内滴注,对照组给予同等剂量生理盐水气管内滴注,12 h后取材,比较两组小鼠肺组织湿干重比。比较两组小鼠肺组织病理变化。应用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测炎性因子和相关基因表达水平。运用m6A甲基化免疫共沉淀测序(meRIP-seq)和RNA测序(RNA-seq)技术检测两组小鼠肺组织的m6A修饰水平和RNA水平,并采用生物信息学对结果综合分析。组间比较采用t检验。结果:LPS组小鼠肺湿干重比(7.56±0.34)高于对照组(3.99±0.54),差异有统计学意义(t=13.749,P<0.05),且苏木精-伊红(HE)染色提示炎性细胞浸润和肺间质水肿程度加剧。LPS刺激增加小鼠肺组织炎性因子IL-1β(1.00±0.27比11.76±6.78)、IL-6(1.00±0.16比2.16±0.70)、TNF-α(1.01±0.09比1.93±0.73)的mRNA水平,差异有统计学意义(t=3.447、3.692、2.843,P<0.05)。meRIP-seq共筛选出772个有表达差异的m6A甲基化位点,其中40.93%的位点显著上调。meRIP-seq和RNA-seq联合分析发现50个差异表达基因,包括B细胞易位基因1(BTG1)、心室区表达PH结构域1(VEPH1)、Toll样受体5(TLR5)和驱动蛋白超家族蛋白26A(KIF26A)等。结论:m6A修饰在LPS诱导的ALI中发生变化,m6A修饰可能作用于BTG1、VEPH1、TLR5、KIF26A等基因,并在ALI中发挥作用。 展开更多
关键词 N6-甲基腺苷 急性肺损伤 m6A甲基化免疫共沉淀测序 信使RNA 表观遗传修饰
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MeDIP-Seq法检测冠心病患者全基因组甲基化谱 被引量:2
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作者 赖伟华 潘伟祥 +3 位作者 冯颖青 余细勇 陈纪言 钟诗龙 《中国药房》 CAS 北大核心 2015年第35期4938-4941,共4页
目的:探究冠心病(CHD)患者与健康志愿者全基因组甲基化的差异,从表观遗传学角度初步探讨DNA甲基化与CHD的相关性。方法:采用病例对照研究法,将受试者分为CHD组(CHD患者50例)和健康对照组(Health组,健康志愿者50例),采用甲基化DNA免疫共... 目的:探究冠心病(CHD)患者与健康志愿者全基因组甲基化的差异,从表观遗传学角度初步探讨DNA甲基化与CHD的相关性。方法:采用病例对照研究法,将受试者分为CHD组(CHD患者50例)和健康对照组(Health组,健康志愿者50例),采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(Me DIP-Seq)法对两组受试者DNA进行测序,分析比较其全基因组甲基化的差异。结果:CHD组甲基化峰(Peak)的数量高于Health组,差异有统计学意义(P<0.05)。Peak主要分布在5’UTR、Intron基因功能元件上。CHD组APQ1、SHB等基因启动子区域内的reads数低于Health组,其甲基化水平降低;而GRK5基因及染色体chr X上多个基因启动子区域内的reads数则高于Health组,其甲基化水平增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:CHD患者全基因组甲基化水平高于健康志愿者,相关基因启动子甲基化水平的变化可能与CHD的发生有关。 展开更多
关键词 冠心病 DNA甲基 甲基DNA免疫共沉淀测序
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三维和二维培养的脐带间充质干细胞 DNA甲基化水平比较
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作者 黄金献 李栋 +2 位作者 李聪 时庆 鞠秀丽 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2019年第11期1-8,共8页
目的探讨三维培养对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)全基因组DNA甲基化状态的影响。方法通过贴壁培养法获得UC-MSCs,采用流式细胞术鉴定其细胞表型。采用聚氟乙烯巢状片进行三维培养,吖啶橙荧光观察UC-MSCs在支架上生长情况。采用甲基化DNA... 目的探讨三维培养对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)全基因组DNA甲基化状态的影响。方法通过贴壁培养法获得UC-MSCs,采用流式细胞术鉴定其细胞表型。采用聚氟乙烯巢状片进行三维培养,吖啶橙荧光观察UC-MSCs在支架上生长情况。采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-Seq)技术检测细胞全基因组DNA甲基化情况。结果成功分离培养UC-MSCs并证明其表型符合国际标准,细胞黏附在聚氟乙烯巢状片三维培养体系中且生长良好。MeDIP-Seq结果显示,三维培养后UC-MSCs全基因组DNA甲基化水平较二维培养整体上调。基因本体(GO)分析显示,与二维培养的细胞相比,三维培养的UC-MSCs中上调的差异甲基化基因多参与蛋白质的代谢、膜相关细胞器的组成、酶活性调节等;而下调的差异甲基化基因主要参与囊泡运输和cGMP代谢过程。通路分析显示,三维培养的UC-MSCs中上调的差异甲基化基因多参与RNA转运、神经配体受体活性、Notch信号通路等;下调的差异甲基化基因多参与磷酸肌醇代谢通路和囊泡分泌相关的通路。结论三维培养改变了UC-MSCs的DNA甲基化谱,所涉及的甲基化上调基因多参与细胞的迁移和增殖功能。三维培养降低了UC-MSCs的免疫调控和分泌囊泡相关基因的甲基化水平。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 三维培养 DNA甲基 甲基DNA免疫共沉淀测序
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Genomewide decoupling of H2AK119ub1 and H3K27me3 in early mouse development 被引量:2
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作者 Yezhang Zhu Jiali Yu +6 位作者 Yan Rong Yun-Wen Wu Yang Li Lejiao Zhang Yinghao Pan Heng-Yu Fan Li Shen 《Science Bulletin》 SCIE EI CSCD 2021年第24期2489-2497,M0004,共10页
Polycomb group(Pc G)proteins are crucial chromatin regulators during development.H2 AK119 ub1(H2 Aub)and H3 K27 me3 are catalyzed by Polycomb-repressive complex 1 and 2(PRC1/2)respectively,and they largely overlap in ... Polycomb group(Pc G)proteins are crucial chromatin regulators during development.H2 AK119 ub1(H2 Aub)and H3 K27 me3 are catalyzed by Polycomb-repressive complex 1 and 2(PRC1/2)respectively,and they largely overlap in the genome due to mutual recruitment of the two complexes.However,it is unclear whether PRC1/H2 Aub and PRC2/H3 K27 me3 can also function independently.By developing an ultra-sensitive carrier-DNA-assisted chromatin immunoprecipitation sequencing method termed CATCH-Seq,we generated allelic H2 Aub profiles in mouse gametes and early embryos.Our results revealed an unexpected genomewide decoupling of H2 Aub and H3 K27 me3 in mouse preimplantation embryos,where H2 Aub but not H3 K27 me3 was enriched at Pc G targets while only H3 K27 me3 was deposited in the broad distal domains associated with DNA methylation-independent non-canonical imprinting.These observations suggest that H2 Aub represses future bivalent genes during early embryogenesis without H3 K27 me3,but it is not required for the maintenance of non-canonical imprinting,which is mediated by maternal H3 K27 me3.Thus,our study reveals the distinct depositions and independent functions of H2 Aub and H3 K27 me3 during early mammalian development. 展开更多
关键词 POLYCOMB H2AK119ub1 H3K27me3 Preimplantation development Non-canonical imprinting
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