实时荧光半定量MSP检测肺癌组织CDH1甲基化水平实验条件的探讨

目的探讨实时荧光半定量MSP检测肺癌组织中CDH1DNA甲基化水平的最适实验条件。方法通过改变实时荧光半定量MSP反应条件,探讨MSP反应体系最适浓度和反应条件。结果检测CDH1DNA甲基化实时荧光半定量MSP反应体系为dATP,dCTP和dGTP200μmol/L,dUTP400μmol/L,MgCl23.0mmol/L,引物600nmol/L,热启动TaqDNA聚合酶0.04U/μl,模板3μl,DMSO2.5,1×SYBGREEN染料,1×反应缓冲液,总体系25μl。反应条件为95℃预变性12min,95℃15s、退火温度1min(其中62℃2个循环、60℃3个循环和58℃45个循环)、69℃10s,循环次数50。结论改进和建立了CDH1DNA甲基化水平的相对定量检测方法。

CDH1基因甲基化水平与肺癌的相关性研究

目的探讨CDH1(cadherin 1)基因甲基化水平与肺癌及其病理类型之间的相关性.方法应用半定量荧光MSP检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例非肺癌对照肺组织标本中的CDH1甲基化的相对比值,并用免疫组化方法对部分结果进行验证.结果肺癌组织、癌旁组织、远癌组织以及非肺癌对照肺组织CDH1甲基化相对比值的中位数分别为0.272、0.227、0.119和0.000.癌组织和癌旁组织(P<0.05)、癌组织和远癌组织(P<0.05)、远癌组织和非肺癌对照肺组织(P<0.05)的CDH1启动子甲基化水平的差异均有统计学意义(P<0.05);癌组织、癌旁组织和远癌组织中的鳞癌、腺癌及腺鳞癌CDH1基因甲基化相对比值之间的差异均无统计学意义(P>0.05).免疫组化结果与半定量荧光MSP检测结果符合.结论CDH1基因甲基化水平与肺癌具有相关性,与肺癌的组织类型无相关性.CDH1异常甲基化和E-cad表达的减弱和缺失可能是肺癌发生和发展过程中的重要因素.

胃癌组织半乳糖凝集素1表达的意义

目的:研究半乳糖凝集素1(galectin-1)在胃癌组织中的表达,分析其在胃癌生长、侵袭中的作用.方法:外科手术切除的胃癌组织及胃切缘组织标本30例,采用RT-PCR方法从mRNA表达水平检测胃癌组织及远癌切端胃组织中Ga-lectin-1的表达情况,并用免疫组织化学SABC法检测Galec-tin-1蛋白表达及其微血管密度(MVD).结果:胃癌组织Ga-lectin-1 mRNA及蛋白表达水平、MVD均分别显著高于远癌切端胃组织,差异均具有统计学意义(P<0.05).胃癌组织Ga-lectin-1 mRNA和蛋白表达水平在不同浸润深度、TNM分期中具有显著差异(P<0.05).MVD在不同浸润深度、TNM分期及有无淋巴结转移的胃癌组织中具有显著差异(P<0.05).胃癌组织Galectin-1 mRNA和蛋白表达水平与胃癌MVD具有显著的正相关(P<0.05).结论:Galectin-1参与胃癌生长和侵袭,可作为诊断、判断进展程度及预后的指标.

胃癌组织中miR-148a基因甲基化状态与DNA甲基转移酶1的关系

目的探讨胃癌组织中miR-148a基因甲基化与临床病理特征、DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的关系。方法 40例胃癌患者的胃癌组织(胃癌组)及其癌旁组织(癌旁组),采用荧光定量PCR法检测2组miR-148a表达情况,采用甲基化特异性PCR检测miR-148a甲基化状态,采用免疫组织化学法检测DNMT1表达情况。结果胃癌组miR-148a表达水平明显低于癌旁组(P<0.01),胃癌组miR-148a甲基化率为70.0%,癌旁组为17.5%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),胃癌组miR-148a甲基化状态在肿瘤大小、浸润深度上差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组DNMT1蛋白阳性率为72.5%,癌旁组为27.5%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),胃癌组DNMT1阳性率与miR-148a甲基化状态呈正相关(r=0.33,P<0.05)。结论胃癌组织中miR-148a基因呈高度甲基化状态,可能与DNMT1过表达有关。