基于Needs甲基化法枸杞多糖指纹图谱的建立

目的多糖是枸杞中主要的活性成分,各产地间枸杞多糖的结构和含量均有差异。目前枸杞多糖的质量控制方法大多都通过单糖组成构建指纹图谱,但仅通过单糖指纹图谱对枸杞多糖进行质量控制,并不能系统地对不同产地的枸杞多糖进行质量控制。因此,我们在单糖指纹图谱的基础上,利用Needs甲基化法确定枸杞多糖的糖残基连接方式,建立Needs甲基化法枸杞多糖指纹图谱,实现对不同产地枸杞的质量控制。方法通过水提醇沉法获得枸杞多糖,并采用Needs甲基化、完全酸水解、硼氢化钠还原及乙酰化等方法结合GC-MS测定枸杞多糖的糖残基连接方式。结果将18批枸杞多糖的糖残基连接方式色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004版)构建出指纹图谱,并结合多种化学计量法评价不同产地间枸杞多糖的差异。相似度计算结果发现,除西藏自治区三批枸杞多糖相似度0.551-0.569,其余15批样品相似度均0.929以上。糖残基连接方式色谱图共标定了16个共有峰,指认了其中10个共有峰,分别为TArap、T-Araf、T-Xylp、1,2-Arap、1,3-Rhap、1,5-Araf、T-Glcp、T-Galp、1,4-Glcp、1,6-Galp。HCA、PCA和PLS-DA分析结果将18批次不同产地的枸杞多糖分为3类,并筛选出了3个标志性成分,分别为T-Araf、1,5-Araf和T-Glcp,以此来判断不同产地间枸杞多糖的差异性。结论首次建立了18批枸杞多糖的Needs甲基化法指纹图谱,为枸杞多糖质量控制提供实验数据参考,进一步证明了多糖在中药质量控制中的作用。

在柱甲基化法自动合成(S-[^(11)C]甲基)-L-蛋氨酸和(S-[^(11)C]甲基)-L-半胱氨酸

用PETtrace回旋加速器通过核反应14N(p,α)11C生产11CO2,经甲烷循环碘化法和11CH3I全自动合成系统制备11CH3I,合成时间约为12min,未校正放化产率大于30%。采用(S [11C]甲基) L 蛋氨酸(11C MET)半自动合成装置,使11CH3I与前体L 同型半胱氨酸硫内酯盐酸盐的碱性溶液在SepPakPlusC18小柱上发生烷基化反应,并经SepPakPlusC18小柱分离,得11C MET注射液,烷基化反应时间约6min,放化产率大于85%,放化纯度大于99%,对映纯度约为90%。采用PET CS I型全自动合成模块,使11CH3I与前体L 半胱氨酸发生在柱烷基化反应,并经柱分离后得到(S [11C]甲基) L 半胱氨酸(11C CYS)注射液,烷基化反应时间约2min,未校正放化产率大于50%,放化纯度大于99%,对映纯度大于90%。制得的11C MET和11C CYS注射液可用于动物和人体研究。

羧甲基化法合成油酸单乙醇酰胺醚羧酸盐

以油酸为起始原料,经酰胺化和羧甲基化反应制得了油酸单乙醇酰胺醚羧酸盐(OAEC).正交实验考察了投料比、催化剂用量、反应温度、反应时间等对羧甲基化反应的影响.最佳工艺条件为:n(油酸单乙醇酰胺)∶n(氯乙酸钠)∶n(NaOH)=1∶1.55∶3.5,65℃反应4 h.在此条件下,油酸单乙醇酰胺的平均转化率达95.94%.IR分析表明合成产物为目的产物,HPLC分析表明产物纯度较高.产物OAEC的表面张力为29.06 mN/m,发泡力为64 mm,去污力为16.90,属低泡温和型表面活性剂.

用羧甲基化法改善沙蒿胶水溶性的研究

为提高沙蒿胶的水溶性而使其应用得以拓宽,采用向其大分子链引入羧甲基基团,制备羧甲基沙蒿胶的方法.考察了影响降低沙蒿胶水不溶物含量的因素,实验结果表明,氢氧化钠用量为0.8%～1.6%、水乙醇体积比(1.5～2.5):20、氯乙酸用量0.6%～0.8%、反应温度50～65℃及反应时间为3～4 h时,可使改性羧甲基沙蒿胶的水不溶物含量由55%降至4%,并使其表观粘度显著提高.

催化甲基化法制备d-α-生育酚

维生素E是由α、β、γ、δ-生育酚及α、β、γ、δ-三烯生育酚等八种化合物组成的混合物,它们的生理活性各异。在构象上,又有d-型和l-型之分,天然的多为d-型而人工合成的则多为d,l-型,天然的d-α-生育酚具有迄今所知的最大的维生素E活性。选用V2O5为催化剂进行了反应条件的优化,得到优化条件为:反应温度250℃、时间1 75h、催化剂用量为维生素E的3 5%、氢气压力0 3mPa(表压)。实验结果为:α-生育酚含量92.31%、维生素E得率为79 83%。

采用化学合成法制备2-甲基萘的研究进展

从煤衍生油、石油焦油、重质芳烃中提取的2-甲基萘可作为重要精细化工和有机化工原料,具有用途广泛、价值较大的特性且可以其聚合合成聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)、液晶聚合物(LCP)等高端新材料。为延伸2-甲基萘的加工产业链及提高其资源利用率,简述2-甲基萘的应用现状和工业生产方法,从化学合成的角度重点综述2-甲基萘的多种合成方法的研究现状及最新进展,主要包括1-甲基萘异构化合成法、萘的甲基化法、C—C键偶联法。汇总分析研究现状后表明:以改性沸石分子筛为代表的高效催化剂的制备是1-甲基萘异构化和萘的烷基化反应的关键技术,应进一步改性和调控催化剂,提高原料的转化率和2-甲基萘的选择性;在连续、温和、较大规模、催化剂低廉条件下高效合成2-甲基萘是C—C键偶联合成2-甲基萘的关键点。对2-甲基萘可延伸的萘基高聚物前驱体和聚萘二甲酸乙二醇酯产业链进行展望,指出应重点开展异构化及萘烷基化法合成2-甲基萘的工艺研究,耦合现有的提纯方法以扩大2-甲基萘的来源,进而减低其制备成本。

改良的甲基化特异PCR法在人宫颈癌Hela细胞检测中的应用

目的介绍一种CpG岛甲基化分析方法,即甲基化特异PCR法(methylation-specific PCR,MSP)以及对该方法的改良。方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,进行甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,并对MSP法进行改良。应用该法分析人宫颈癌Hela细胞中RASSF1A、p16基因5'CpG岛甲基化状态。结果发现人宫颈癌Hela细胞中有RASSF1A、p16基因的甲基化,改良后的MSP更容易获得较好的效果。结论MSP法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改良后该方法更加简便可行。

巢式MSP法检测胃癌患者血浆p16、MGMT基因甲基化

目的:探讨胃癌患者血浆p16和MGMT基因启动子区甲基化状态.方法:采用巢式甲基化特异性PCR法(nested methylation-specific PCR,nMSP)对69例胃癌患者血浆中p16和MGMT基因启动子区甲基化状态进行研究.同时以16例健康体检作为对照.结果:在受检的69例胃癌患者中,p16、MGMT基因启动子区甲基化率分别为30.4%(21/69)、17.4%(12/69).对照组未见p16、MGMT基因启动子区甲基化.胃癌患者血浆中存在p16和MGMT基因启动子区甲基化,其中p16基因启动子区甲基化与对照组相比差异显著,具有统计学意义.结论:检测血浆循环DNA中p16、MGMT基因启动子区的甲基化状态,可为胃癌的早期分子诊断提供了有用信息.

4-三氟甲基苯胺合成方法概述

综述 4 三氟甲基苯胺的合成方法 ,重点介绍了对硝基三氟甲苯还原 ,对氯三氟甲苯胺化 ,异腈酸酯氟解和三氟甲基化法。

结肠癌中DCC基因启动子甲基化及其临床意义

目的探讨DCC基因启动子甲基化在结肠癌发生发展过程中的作用及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测DCC基因表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测DCC基因启动子甲基化。结果在结直肠癌组织中DCC基因甲基化启动子甲基化频率与浸润深度无关(P>0.05);而与肿瘤组织分化程度、临床分期密切相关(P<0.05)。DCC基因启动子甲基化频率在低或未分化组、C、D期组均高于其对应的高或中分化组和A、B期组(P<0.05)。结论 DCC基因启动子甲基化和DCC蛋白表达在正常组织,结肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著的差异,可能与结肠癌的发生发展有关,可作为判断结直肠癌生物学行为的一个指标。

p16基因甲基化及蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织、21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P=0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P=0.007);p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P=0.004)。结论p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。

P16基因甲基化和P53抗体在非小细胞肺癌血清中的表达

目的探讨P16基因甲基化和P53抗体在人非小细胞肺癌血清中的表达。方法选择98例NSCLC患者为试验组(NSCLC组),60例健康者血清作对照(对照组),分别采用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法及用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清P16基因甲基化和P53抗体表达情况。结果 NSCLC组患者血清中P16甲基化和P53抗体与对照组分布差异有统计学意义(P<0.01);有吸烟史的P16基因甲基化表达率和P53抗体水平高于无吸烟史患者(P<0.01);病理为鳞癌的患者的P16甲基化的危险度是病理为腺癌或其他的2.724(1.087~6.826)倍(P<0.01);P16基因甲基化与P53抗体在NSCLC血清中的表达具有相关性。结论 P16基因甲基化和P53抗体的表达与NSCLC发生密切相关,且吸烟有协同作用;P16基因甲基化与P53抗体在NSCLC的表达有相关性。

3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性

目的 对 3株肺癌细胞中 9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性进行评估。方法 通过甲基化特异性多聚酶链反应法 (MSP)结合DNA测序来确定 3株肺腺癌细胞株 (A5 4 9,SH77和SPE A 1)中 9个基因的启动子CpG岛的甲基化状态 :APC ,CDH13,DAPK1,MGMT ,MYOD1,p16 INK4a,p73,RAR β和WT1基因。同时采用半定量RT PCR的方法来量度下列 5个基因的表达 :CDH13,MGMT ,MYOD1,RAR β和WT1基因。结果 在 9个受检基因之中 ,下列 4个基因在三株细胞中均呈同样的甲基化谱式 :仅有去甲基化 :APC和DAPK1,以及兼有甲基化和去甲基化 :p73和p16 INK4a。而其余 5个基因则表现为不同的甲基化模式。尽管 ,这 5个基因的表达谱式大体上符合其启动子CpG岛甲基化的表达静息的原则 ,个别的例外亦是有的。这提示着与DNA甲基化状态无关的机制可能也会参与该基因的表达调控。

人小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP基因组DNA甲基化状态的变化

目的探讨基因组DNA甲基化状态与人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)H446/CDDP细胞获得性多药耐药的关系。方法分别提取人SCLC多药耐药细胞H446/CDDP及其亲代细胞H446的基因组DNA,应用甲基化敏感性随机引物PCR(MS-AP-PCR)方法检测其甲基化状态。结果 H446/CDDP细胞经酶解后的扩增谱带较H446细胞明显增多,且荧光强度较强,表明其基因组DNA甲基化水平较亲代细胞明显增高。结论 H446/CDDP细胞多药耐药性的获得可能与其基因组DNA甲基化水平增高有关。

SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法用免疫组化SP法和甲基化特异性PCR法检测60例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病肺组织中SFRP1基因甲基化及SFRP1蛋白的表达情况。结果肺癌组织SFRP1基因甲基化阳性高于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.001);SFRP1基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);非小细胞肺癌中SFRP1蛋白阳性率低于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.004);SFRP1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);SFRP1甲基化和SFRP1蛋白表达缺失存在相关性(P=0.002)。结论 SFRP1基因甲基化可能是导致SFRP1蛋白表达降低的重要机制,进而导致非小细胞肺癌的发生发展。

脂多糖刺激对马氏珠母贝血细胞DNA甲基化修饰的影响

【目的】研究马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)血细胞基因组DNA的甲基化修饰情况及其在脂多糖(LPS)刺激后的变化,为探究甲基化修饰在珍珠贝免疫防御中的作用提供理论基础。【方法】运用甲基化敏感扩增多态性法(MSAP)分析马氏珠母贝血细胞(正常养殖贝)以及注射LPS后(6、12、24 h)基因组CCGG位点甲基化的修饰水平变化,并对甲基化修饰位点进行回收测序。【结果】共获得1 102个清晰可辨的DNA条带,其中全甲基化位点条带215个,半甲基化位点条带127个,非甲基化位点条带760个。对照组血细胞基因组CCGG位点的甲基化修饰比例为23.76%,注射LPS后,甲基化比例为28.10%~48.25%,注射6 h时最低,12 h时最高;对特异性片段测序后,经Blast比对,得到5条存在甲基化修饰的基因序列,其中2条具有注释信息,分别是干扰素调控因子(Interferon regulatory factor)和磷脂酶BL2(Putative phospholipase B-like 2)。【结论】马氏珠母贝血细胞基因组CCGG位点的甲基化修饰参与调控LPS诱导的免疫反应,在免疫防御中发挥重要作用。

非小细胞肺癌患者血浆DAPK基因甲基化检测及其临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因异常甲基化及其在NSCLC筛查和诊断方面的临床意义。方法用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测112例NSCLC患者癌组织、癌旁组织、外周血血浆和112例正常对照组血浆样品中DAPK基因的甲基化情况,并比较各组检测结果。结果癌组织DAPK基因甲基化率为59.8%,高于癌旁组织的8.0%(P<0.001),其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌癌组织和癌旁组织间的甲基化检出率比较差异均有统计学意义(P<0.001);NSCLC患者血浆中DAPK基因甲基化检测率为21.4%,对照组血浆未检测到DAPK基因甲基化(P<0.001)。血浆中DAPK基因甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型无明显相关性。结论利用nMSP法对血浆样本DAPK基因甲基化检测可为非小细胞肺癌的筛查和诊断提供有价值的信息。