高分辨率熔解曲线技术在胃及结直肠癌甲基化中的应用

DNA甲基化是表观遗传学中的研究热点,与胃及结直肠癌的发生发展,诊断治疗及预后密切相关。高分辨率溶解曲线技术(HRM)是基于实时荧光PCR基础上发展起来的一种新的实时定量技术,近年来在DNA甲基化检测中发展迅速。此文就HRM的技术在胃肠癌甲基化中的应用作一综述。

高分辨率溶解技术定量检测系统性红斑狼疮患者血细胞中CD70启动子低甲基化水平

目的:建立高分辨率溶解技术定量检测系统性红斑狼疮患者血细胞中CD70启动子甲基化的方法,探讨CD70甲基化程度与系统性红斑狼疮发病的相关性。方法:319例系统性红斑狼疮患者及323例健康体检者外周血标本,抽提DNA后进行甲基化修饰。以CpGenome Universal Methylated DNA作为100%甲基化的样本,以100%非甲基化的健康体检者外周血DNA作为稀释剂,分别制成100%,80%,50%,30%,10%,0系列浓度的标准曲线;采用高分辨率溶解技术定量检测CD70甲基化水平。结果:100%,80%,50%,30%,10%,0甲基化标准品的高分辨率溶解曲线从右向左依次排列,待测样本在标准曲线上的位置即代表了其甲基化程度。高分辨率溶解技术重复性好,可检测低至10%甲基化水平。CD70甲基化水平与系统性红斑狼疮发病显著相关(P=0.00047)。结论:建立高分辨率溶解技术定量检测CD70甲基化程度的方法,CD70启动子低甲基化有望成为评估系统性红斑狼疮患病的分子指标。

胶质瘤MGMT启动子甲基化定量检测的MS-HRM方法建立及评估

目的建立甲基化特异高分辨率溶解曲线(Methylation sensitive high resolution melting curve,MS-HRM)定量检测胶质瘤MGMT基因启动子甲基化的方法,用于指导胶质瘤患者术后化疗及预后判断。方法从标本库随机选取胶质瘤组织37例,提取DNA进行甲基化修饰,应用MS-HRM方法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)进行MGMT基因启动子区甲基化检测。结果 MSP方法检测显示部分甲基化标本29例(78.4%),较甲基化(13.5%)和未甲基化(8.1%)差异显著。MS-HRM发现MGMT基因启动子甲基化水平在10%~25%和25%~50%的标本分别有14例(37.8%)和17例(49.5%)。结论成功建立MS-HRM检测胶质瘤MGMT启动子甲基化的方法,该方法特异性高、灵敏度强和可重复性,有望应用于临床胶质瘤MGMT启动子甲基化高通量定量检测,以指导个体化治疗。

高分辨率熔解曲线分析及其在基因诊断中的应用

高分辨率熔解曲线分析（high-resolution melting analysis,HRM）是近年来新兴的一种核酸序列分析技术.相较于传统的基因检测技术,HRM不仅据有极高的特异性和理想的灵敏度,而且能够完成高通量样品检测并实现真正无污染的闭管操作,因此逐渐成为现代医学研究与基因诊断的首选技术.目前,HRM在基因突变扫描,基因分型,序列匹配以及甲基化分析等各项领域中都有极高的应用价值.本文就HRM的特点及其在医学研究及基因诊断中的应用做一综述.