甲基化结合蛋白2对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨甲基化结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响。方法:采用qRT-PCR和免疫印迹法检测MeCP2在PANC1、Pa Tu8988、SW1990 3种胰腺癌细胞株中的表达水平;将干扰质粒sh MeCP2(实验组)与对照质粒sh EGFP(对照组)分别转入PANC1细胞中,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力。结果:MeCP2在3种胰腺癌细胞中差异性表达。与对照组相比,实验组PANC1细胞中MeCP2 mRNA和蛋白表达明显降低(t分别为6.58,8.42,P均<0.05);细胞相对增殖率、细胞克隆形成数及迁移能力明显降低(P均<0.05)。结论:下调MeCP2表达可降低胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力。

发育中Wistar大鼠大脑皮层甲基化结合蛋白-2基因表达变化

目的 :研究甲基化结合蛋白 2 (methyl CpG bindingprotein 2 ,mecp2 )基因在发育中正常Wistar大鼠大脑皮层表达水平的变化。方法 :应用实时定量PCR(real timePCR) ,Northern印迹杂交对mecp2基因在正常Wistar大鼠发育的不同阶段 :胚胎第 1 5天 (E1 5 )、第 1 7天 (E1 7)、第 1 9天 (E1 9)、出生当日 (P0 ) ,生后第 7天 (P7)、生后第 1 4天 (P1 4 )、生后第 2 8天 (P2 8) ,成年期大鼠mRNA的表达水平进行定性、定量分析 ;应用Western印迹杂交对MeCP2的表达水平进行半定量分析。结果 :mecp2基因是在正常Wistar大鼠大脑皮层中表达的mRNA ,约为 1 0kb。从胚胎至成年期的发育过程中 ,mecp2基因mRNA的表达虽有波动 ,但差异无显著性。mecp2基因在正常Wistar大鼠大脑皮层中仅表达一种MeCP2 ,相对分子质量为 75 0 0 0。在不同发育阶段其表达水平表现为 ,胚胎E1 5表达水平最低 ,自胚胎E1 9始至成年期MeCP2表达水平较E1 5明显增高。生后第 7日至成年期 ,各时间点间表达水平的变化差异没有显著性。结论 :随着正常Wistar大鼠大脑皮层神经元的发育成熟 ,MeCP2的表达水平逐渐增高 ,说明MeCP2对神经元的成熟有重要作用 。

DNA甲基化结合蛋白

DNA甲基化是哺乳动物细胞中最重要的表观遗传学修饰之一,大约70%—80%的CpG发生这种甲基化修饰.异常的甲基化在许多癌症中频发,启动子CpG岛的高甲基化作为普遍的失活机制介导抑癌基因沉默.甲基化信号由甲基化结合蛋白来转译,它们能够特异性识别并结合至甲基化位点通过募集辅阻遏复合物例如组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase,HDAC)等建立沉默的染色质,从而在DNA甲基化和基因沉默中起桥梁作用.目前,哺乳动物中已鉴定出的甲基化结合蛋白有三类,分别是:MBD(Methyl-CpG-Binding Domain)、Kaiso以及SRA(Set and Ring finger-associated)家族.本文就这三大家族(以MBD为主)各自的结构、功能、结合甲基化DNA的特性以及它们在某些疾病发生中的作用做一综述.

血清胶质纤维酸性蛋白、甲基化CpG结合蛋白2对脑胶质瘤的诊断价值及其与病理特征的相关性分析

目的探讨血清胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)对脑胶质瘤的诊断价值及其与病理特征的相关性。方法回顾性选取2021年1月至2024年1月南京医科大学附属脑科医院(南京脑科医院)收治的80例脑胶质瘤患者,将其作为胶质瘤组,选取本院同期收治的80例非胶质瘤颅内良性肿瘤患者作为对照组。应用双抗体夹心法检测两组患者血清GFAP表达水平,应用荧光定量聚合酶链反应法检测肿瘤组织MeCP2表达水平。比较脑胶质瘤患者与对照组的GFAP、MeCP2表达水平,并建立ROC曲线分析GFAP、MeCP2对脑胶质瘤的诊断价值。分析不同病理特征脑胶质瘤患者GFAP、MeCP2表达水平,并采用Spearman相关性分析GFAP、MeCP2与脑胶质瘤病理特征的相关性。结果胶质瘤组患者GFAP、MeCP2表达水平分别为(81.74±7.47)ng/L、2.31±0.31,均高于对照组[(5.35±1.32)ng/L、0.72±0.16],差异均有统计学意义(P<0.05)。绘制ROC曲线结果显示,GFAP、MeCP2、两者联合诊断脑胶质瘤的曲线下面积(AUC)分别为0.721、0.698、0.897。GFAP、MeCP2两者联合对脑胶质瘤的诊断AUC高于两者单一诊断。病理分级Ⅳ级、远处转移患者GFAP水平均高于其他分级、未远处转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理分级Ⅳ级、肿瘤大小≥3 cm、远处转移患者MeCP2水平均高于其他分级、肿瘤大小<3 cm、未远处转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果表明,GFAP与脑胶质瘤不同病理分级、远处转移均呈正相关(r=0.579、0.378,P<0.05);MeCP2与脑胶质瘤不同病理分级、远处转移、脑胶质瘤肿瘤大小均呈正相关(r=0.657、0.457、0.384,P<0.05)。结论胶质纤维酸性蛋白、甲基化CpG结合蛋白2对于脑胶质瘤均具有重要诊断参考价值,两者联合诊断敏感度、特异度更高,且两者与脑胶质瘤的病理分级、肿瘤大小、远处转移情况密切相关。

CpG岛甲基化结合蛋白在氢醌致骨髓增殖性白血病病毒原癌基因转录激活中的作用

目的深入揭示氢醌（HQ）致MPL转录激活的表观遗传学机制。方法以磷酸盐缓冲液（PBS）溶解HQ，以正常TK6细胞、PBS处理细胞为对照组，分别以2．5、5．0、10．0和20．0μmol／LHQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量一聚合酶链反应检测甲基化CpG结合蛋白1～5（MBD1～5）的表达。结果与对照细胞相比，MBD1—4的mRNA表达量在所有的HQ处理细胞中全部下降，20．0μmol／LHQ对MBD2和MBD4表达的抑制效果最为明显，抑制率分别为50％和32％（P〈O．05）；而10．0μmo1／LHQ对MBD1和MBD3表达的抑制效果最明显，抑制率分别为36％和33％（P〈0．05）；MBD5表达无统计学意义（P〉0．05）。在MPL的CpG岛内有3个MBD1序列特异性结合位点。结论HQ致MPL的转录激活可能与MBD1表达异常有关。

MCF-7耐米托蒽醌细胞株甲基化结合蛋白表达

目的研究乳腺癌细胞(MCF-7)经米托蒽醌诱导耐药后其甲基化结合蛋白(Methyl-DNA-binding protein,MBD)的表达变化,并分析在MCF-7细胞经诱导产生多药耐药性中与甲基化结合蛋白的关系。方法利用耐米托蒽醌的MCF-7耐药株,并用未染毒的野生型MCF-7为对照,通过蛋白印迹法检测不同浓度米托蒽醌处理的细胞组乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和甲基化结合蛋白MBD1、MBD2及MBD4的蛋白表达水平。结果跟野生型MCF-7比较,随着染毒浓度的增大,乳腺癌耐药蛋白BCRP的表达逐渐增加,而MBD1、MBD2、MBD4的表达均呈降低趋势,且MBD4的降低尤为明显,与对照组比较,其MBD4蛋白表达水平分别为(0.910±0.049)、(0.835±0.065)、(0.708±0.082)、(0.660±0.145)(P<0.05)。结论在米托蒽醌诱导产生耐药的MCF-7细胞株中,MBDs的表达,尤其是MBD4,有可能参与了肿瘤耐药的形成。

甲基化结合蛋白2和组蛋白去乙酰化酶6在人瘢痕组织中的表达

目的研究在人不同瘢痕组织及增生性瘢痕不同生长时期成纤维细胞中甲基化结合蛋白2(methyl CpG binding protein 2,MECP2)和组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)的表达及意义。方法收集2016年8月至2017年5月重庆医科大学附属第一医院烧伤整形科收治的118例瘢痕患者及33例上睑松弛患者的手术标本,包括正常皮肤33例(男12例,女性21例,年龄34~68岁);正常瘢痕32例(男19例,女13例,年龄8~68岁);瘢痕疙瘩35例(男11例,女24例,年龄11~62岁);增生性瘢痕51例(男22例,女29例,12~58岁)。其中增生性瘢痕根据生长时间分为4组:0~3个月组10例、4~6个月组11例、7~12个月组13例、>12个月组17例。采用免疫组织化学及蛋白质印迹法检测各组组织中MECP2及HDAC6的表达情况,实时定量聚合酶链反应技术检测各组组织中MECP2 mRNA和HDAC6 mRNA的表达,并比较各组之间的差异。实验所得数据用SPSS 20.0进行统计学分析,各组之间的差异采用单因素方差分析进行检验,2组间比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果免疫组织化学结果显示,MECP2在正常皮肤成纤维细胞中表达呈阴性或弱阳性,在正常瘢痕中表达呈弱阳性,在增生性瘢痕中表达呈阳性,在瘢痕疙瘩成纤维细胞核内大量表达。MECP2蛋白在正常皮肤(1326.4±572.3)、正常瘢痕(2341.4±816.2)、增生性瘢痕(3500.7±1407.6)、瘢痕疙瘩(4787.9±1514.3)中的表达逐渐增加(F=33.820,P=0.001);同样MECP2 mRNA在正常皮肤(0.82±0.43)、正常瘢痕(1.14±0.45)、增生性瘢痕(1.59±0.39)、瘢痕疙瘩(2.14±0.53)中的表达也是逐渐增加(F=23.400,P=0.001)。在正常皮肤(1332.5±746.7)、正常瘢痕(2307.7±1027.4)、增生性瘢痕(4107.4±1223.1)、瘢痕疙瘩(5155.9±1265.3)中HDAC6蛋白的表达差异有统计学意义(F=50.270,P=0.001);HDAC6 mRNA在正常皮肤(0.57±0.23)、正常瘢痕(1.03±0.35)、增生性瘢痕(1.47±0.31)、瘢痕疙瘩(1.87±0.45)中的表达差异有统计学意义(F=38.060,P=0.001)。而在增生性瘢痕中0~3个月组(4758.4±660.1)和4~6个月组(4602.4±583.9)MECP2表达差异无统计学意义(t=1.280,P=0.970),7~12个月组(3000.7±982.7)和>12个月组(1990.7±992.3)MECP2表达量明显降低(F=25.800,P=0.001);HDAC6在0~3个月组(5069.3±1236.1)和4~6个月组(5316.7±1237.4)HDAC6中表达差异无统计学意义(t=1.020,P=0.980),在7~12个月组(3084.7±1685.5)和>12个月组(2304.6±1337.1)表达量明显降低(F=11.410,P=0.001)。结论在人体瘢痕形成过程中MECP2和HDAC6对纤维化的形成发挥着至关重要的作用,由MECP2和HDAC6介导的表观遗传学调控是抑制瘢痕形成的一个重要靶点。

DNA甲基转移酶与甲基化CpG结合结构蛋白2在胃肠间质瘤的表达

目的研究DNA甲基转移酶(DNMT)和甲基化CpG结合结构蛋白2(MBD2)在胃肠道间质瘤(GIST)的蛋白表达。方法采用免疫组织化学法与免疫印迹法对28例成人GIST标本及配对对照标本进行DNMTs与MBD2的蛋白表达研究。结果 DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3L、MBD2蛋白在GIST中表达显著高于配对对照组织,差异有统计学意义(P<0.05),但DNMT3a在GIST的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GIST表达DNMTs(除外DNMT3a)和MBD2更显著。

甲基化CpG结合蛋白家族(MeCPs)在表遗传中的作用

表遗传学(epigenetics)主要研究基因型和表型之间的关系。基因组表遗传修饰主要包括遗传物质DNA的甲基化修饰和核小体组蛋白修饰,最终结果是DNA碱基不发生改变的情况下而表型却发生了变化。甲基化CpG结合蛋白家族(methyl-GpGbindingproteins,MeCPs)是能与甲基化CpG二核苷酸结合的一类核蛋白,从而有机地将DNA甲基化和组蛋白修饰耦合起来,在表遗传中发挥着中枢纽带的作用。本文简述了近年来表遗传中DNA甲基化和组蛋白修饰的最新研究进展以及MeCPs家族在表遗传中的重要作用,目的是使人们进一步了解表遗传作用规律。

甲基化CpG结合域蛋白1在胰腺癌组织中的表达和意义

目的:检测甲基化CpG结合域蛋白1(MBD1)蛋白在胰腺癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法:应用S-P免疫组织化学法检测38例胰腺癌、17例胰腺癌旁组织、8例胰腺良性肿瘤、3例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织中MBD1蛋白的表达。结果:MBD1在胰腺癌组织、正常胰腺组织、胰腺良性肿瘤、胰腺癌旁组织中的表达阳性率分别是76.32%(29/38)、16.67%(1/6)、25.0%(2/8)、29.41%(5/17),3例慢性胰腺炎标本中未见表达;胰腺癌阳性表达率明显高于正常胰腺、慢性炎症、良性肿瘤和癌旁对照组织(P<0.05)。MBD1表达水平的高低与病人的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和TNM分期无显著性差异(P>0.05);而与淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移者胰腺癌组织MBD1的表达阳性率为92.31%(24/26),高于无淋巴结转移者的41.67%(5/12)(P<0.01)。结论:胰腺癌中MBD1呈高水平表达,并与胰腺癌的高转移侵袭活性有关,其机制可能与MBD1介导抑制多个甲基化相关抑癌基因的表达有关。MBD1的转录调控机制有待进一步研究。

甲基化CpG结合结构蛋白2在胃癌的表达及靶向抑制

目的:研究甲基化CpG结合结构蛋白2(methyl-CpG-binding domain protein 2,MBD2)在胃癌的表达及靶向抑制。方法:免疫组化法对40例胃癌及配对胃黏膜组织,免疫荧光法对胃癌细胞SGC-7901行MBD2表达研究。构建3个靶向抑制MBD2的siRNA(MBD2-siRNA-1、MBD2-siRNA-2、MBD2-siRNA-3)。转染MBD2-siRNA入SGC-7901,RT-PCR及Western blot验证MBD2的抑制效果。噻唑蓝比色法检测SGC-7901增殖率。结果:胃癌组织MBD2表达较对照胃黏膜组织增强(χ2=6.646,P=0.010);且低分化胃癌与伴幽门螺杆菌感染的胃癌中MBD2表达更强(χ2值分别为9.730、8.700,P值分别为0.01和0.04)。MBD2蛋白在胃癌胞核分布。MBD2-siRNA可成功转染SGC-7901,并成功筛选靶向抑制MBD2的siRNA(MBD2-siRNA-2)。发现转染MBD2-siRNA-2后96 h,SGC-7901增值率被抑制。结论:MBD2在胃癌表达增强,抑制MBD2可能抑制胃癌增殖。

用变性高效液相色谱术筛查甲基化CpG结合蛋白2基因变异

目的用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)分析和DNA测序筛查甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,MECP2)基因突变,评价DHPLC检测MECP2基因变异的可用性。方法建立检测MECP2基因变异的DHPLC分析法,对52例孤独症患儿MECP2基因3个外显子分为8个片段进行PCR扩增,扩增产物用DHPLC筛查,并以DNA测序验证。结果在Exon 4-1、4-2、4-3、4-4片段,分别发现有17个、2个、2个和1个样本峰型异常,DNA测序分析发现为6种MECP2基因变异。结论DHPLC技术可用于检测MECP2基因变异,方法敏感、重复性好。

甲基化-CpG-结合蛋白家族在肿瘤等疾病中的研究

甲基化-CpG-结合蛋白（methyl-CpG-bindingprotein 2,MeCP2）最早由R.R.Meehan等[1]提出,它是一种含特异性序列的DNA结合蛋白。随后,在哺乳动物中发现有一组蛋白每个都包含与MeCP2中甲基化-CpG-结合序列（methyl-CpG-bindingdomain，MBD）相同的基本结构，并将这组蛋白统称为甲基化-CpG-结合蛋白家族（methyl-CpG-bindingproteins，MBDs）。

DNA甲基化结合蛋白与心血管疾病

心血管疾病目前不仅是发达国家及发展中国家人口死亡和患病的主要原因,也是世界范围内最突出的健康问题。其病因为高血压、吸烟、血脂异常、糖尿病、肥胖、大气污染等。近年来,DNA甲基化与心血管疾病的研究成为热点,DNA甲基化结合蛋白在DNA甲基化介导的基因沉默中起桥梁作用,DNA甲基化结合蛋白与心血管疾病的关系逐渐揭开面纱。本文就DNA甲基化结合蛋白在心血管疾病中的作用展开讨论。

泛发性脓疱型银屑病患者外周血单个核细胞甲基化酶及甲基化CpG结合蛋白mRNA的表达水平

目的观察泛发性脓疱型银屑病(generalized pustular psoriasis,GPP)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNA甲基转移酶及甲基化CpG结合蛋白(methyl-CpG binding protein,MeCP)mRNA的表达情况,初步探讨DNA甲基化在GPP中可能的作用机制。方法回顾性收集2015年12月至2016年12月在北京协和医院皮肤科门诊或住院治疗的9例GPP患者临床资料;随机选取10例同期在医院接受健康体检的健康人做为对照,年龄和性别与GPP患者相匹配。分别留取10 ml肘正中静脉血,采用密度梯度离心法分离PBMC,应用Trizol法提取PBMC总RNA,采用实时PCR法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4及MeCP2的mRNA表达水平,并分析年龄及病情严重程度与mRNA表达水平的相关性。结果GPP患者PBMC中DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD4的mRNA表达水平较健康对照组升高[DNMT3a:0.000 17(0.000 06,0.001 15)比0.000 03(0.000 02,0.000 04);DNMT3b:0.000 04±0.000 02比0.000 02±0.000 01;MBD1:为0.001 01±0.000 45比0.000 46±0.000 15;MBD2:0.002 61±0.000 39比0.001 85±0.000 52;MBD4:0.004 29±0.001 60比0.001 57±0.000 55,P均<0.05],年龄及疾病严重度与上述因子mRNA的相对表达水平无相关性(P均>0.05)。结论GPP患者体内甲基化相关调控基因表达异常,但与年龄和疾病严重程度不相关。

甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白。方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白。表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力。结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达。亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白。SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA。结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达。

甲基化CpG结合域蛋白1和VIMENTIN在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨甲基化CpG结合域蛋白1(MBD1)和VIMENTIN蛋白在胰腺癌组织中的表达情况及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测40例经手术切除的胰腺癌组织和10例良性肿瘤患者的正常胰腺组织中MBD1和VIMENTIN蛋白的表达。结果在40例胰腺癌标本中有28例(70.0%)MBD1呈阳性表达,16例(40.0%)VIMENTIN蛋白呈阳性表达,显著高于正常胰腺组织标本的1例(1/10)和0例(P值均<0.05)。MBD1与VIMENTIN蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.423,P=0.012)。在有淋巴结转移的胰腺癌中的MBD1表达阳性率显著高于无淋巴结转移的胰腺癌(P=0.023)。在病理分化较差和有淋巴结转移的胰腺癌中的VIMENTIN表达阳性率显著高于病理分化较好及无淋巴结转移的胰腺癌(P值分别=0.027、0.003)。结论胰腺癌组织中存在MBD1和VIMENTIN的过表达,并与病理分级和淋巴结转移有关,MBD1可能通过调控甲基化过程,干预VIMENTIN的表达,在胰腺癌的发生、发展中起到重要作用。