急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

DNA甲基化转移酶1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的观察DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织、癌旁组织及正常肺组织中的表达,通过其表达水平的分析,探讨其与临床特征的关系。方法选取睢宁县人民医院胸外科手术切除的肺癌标本,分别取癌组织54例,癌旁组织48例,另取周边正常组织24例为对照组,行免疫组化检测,分析各组织中DNMT1表达差异及与临床各指标之间关系。结果 DNMT1在NSCLC的癌组织、癌旁组织、正常肺组织中阳性表达率分别39/54(72.2%)、30/48(62.5%)、0/24(0%),与正常肺组织比较差异有统计学意义(P<0.01)。DNMT1的表达与NSCLC组织的分化程度、TNM分期、患者的年龄、性别、吸烟、病理类型无相关性。结论 DNMT1在NSCLC癌组织、癌旁组织中出现高表达,在正常肺组织中表达缺失,提示DNMT1参与NSCLC发病机制,可以作为病理诊断NSCLC的标志物。DNMT1与NSCLC的临床特征之间无相关性,不能作为预后的指标。

DNA 甲基化转移酶1基因多态性与铅中毒易感性分析

目的：探讨DNA甲基化转移酶1（DNMT1）基因多态性与铅中毒易感性的关系。方法采用病例-对照研究方法，以78例职业性慢性铅中毒患者为铅中毒组，以同企业、同工种及年龄相近的78名未发生铅中毒的铅作业工人为对照组。采集2组人群清晨空腹肘静脉血，采用多重聚合酶链式反应-连接酶检测反应分型法检测DNMT1 rs2228611及rs10854076位点单核苷酸多态性（ SNP）。结果2组人群DNMT1 rs2228611及rs10854076位点等位基因频率分布均符合遗传学Hardy-Weinberg平衡定律（ P＞0.05）。2组人群rs2228611位点3种基因型AA、AG、GG总体分布不同（P＜0.05），等位基因A、G的基因频率分布不同（P＜0.05），纯合子AA基因型携带者铅中毒易感性增高[比值比为7.88，95％可信区间为（1.56～39.84），P＜0.05]。2组人群rs10854076位点3种基因型CC、CG、GG总体分布及等位基因C、G的基因频率分布分别比较，差异均无统计学意义（ P＞0.05）；该位点不同基因型与铅中毒易感性无关（P＞0.05）。结论 DNMT1 rs2228611位点SNP与铅中毒易感性相关，纯合子AA基因型为风险基因型，可增加铅中毒的易感性。

卵巢癌中miR-148a通过作用DNA甲基化转移酶1调控细胞黏附分子1基因甲基化的分子机制研究

目的探讨卵巢癌中细胞黏附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)基因启动子甲基化对基因转录和蛋白表达水平的影响,及miRNA-148a对CADM1甲基化水平的调控机制。方法选取2018年6月至2020年6月在杭州师范大学附属医院行手术治疗的86例卵巢癌患者,定量检测卵巢癌组织和癌旁组织CADM1基因CpG岛甲基化水平;使用定量实时聚合酶链反应检测CADM1基因mRNA和miRNA-148a表达量;采用western blot法检测CADM1基因和DNMT1蛋白水平。使用不同浓度甲基转移酶抑制剂(5-Azacytidine,5-Aza)处理人卵巢癌SKOV3细胞,72 h后检测其CADM1 mRNA表达量。将miR-335-5p类似物(analog)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染入卵巢癌细胞系SKOV3,然后检测转染后的miR-335-5p表达量和CADM1基因甲基化水平。结果卵巢癌组织的CADM1-1岛的甲基化水平为(2.89±0.82)%,显著高于癌旁正常组织的甲基化水平(1.86±0.68)%(t=4.936,P<0.001),卵巢癌组织的CADM1-2岛的甲基化水平为(3.12±0.93)%,显著高于癌旁正常组织的甲基化水平(2.27±0.69)%(t=5.114,P<0.001);Pearson相关分析表明卵巢癌组织CADM1-1岛和CADM1-2岛的甲基化水平与mRNA相对表达量间均呈显著负相关(r分别为-0.615和-0.582,P均<0.001),且与CADM1蛋白表达量间也均呈显著负相关(r分别为-0.521和-0.612,P均<0.001);卵巢癌组织中的miRNA-148a相对表达量为1.53±0.42,显著低于癌旁组织中的miRNA-148a相对表达量2.59±0.73(t=6.113,P<0.001);不同浓度5-Aza处理后,SKOV3细胞CADM1基因在低浓度组和高浓度组的mRNA表达水平均显著高于对照组(P均<0.05),且高浓度组的mRNA表达水平显著高于低浓度组(P<0.05);miRNA-148a对SKOV3细胞转染后,mimic组的miRNA-148a相对表达量显著升高,inhibitor组的表达量显著降低(P<0.001),而mimic组的DNMT1表达量和CADM1基因甲基化水平显著降低,inhibitor组的DNMT1表达量和CADM1基因甲基化水平显著升高(P<0.001)。结论在卵巢癌中,miRNA-148a可通过作用下游靶蛋白DNMT1,调控CADM1基因的DNA甲基化水平,从而影响CDM1基因的mRNA和蛋白表达水平,参与卵巢癌的发病机制。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

三氯乙酸对L-02细胞DNA甲基化转移酶1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨三氯乙酸(TCA)染毒对L-02细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)蛋白及mRNA表达的影响。方法取处于对数生长期的正常肝细胞(L-02细胞),分别加入含0(对照)、0.1、0.3、0.9 mmo/L TCA的培养液继续培养24、48、72 h,同时,设DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza-d C,5μmol/L)处理组,TCA-re组(0.9 mmol/L TCA处理后换正常培养基继续培养24 h)和人肝癌(HepG2)细胞组作为对照。检测细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平。结果与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组、TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,而HepG2细胞组DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,除0.1、0.9 mmol/L TCA染毒48 h外,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,除0.1 mmol/L TCA染毒24、48 h及0.3mmol/L TCA染毒24 h外,差异均有统计学意义(P<0.05);而TCA-re组L-02细胞和HepG2细胞组DNMT1蛋白的表达水平均无明显变化。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。除TCA染毒24 h时L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平随染毒浓度的升高而呈先升高后下降的趋势外,随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TCA体外染毒可能通过抑制DNMT1的表达维持或者促进细胞的DNA低甲基化状态。

人DNA甲基化转移酶3B1真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建人DNA甲基化转移酶3B1(DNMT3B1)真核表达载体pCMV-DNMT3B1。方法:根据Genebank中人DNMT3B1cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT3B1,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。结果:PCR扩增得到人DNMT3B1的cDNA片段大小为2.6kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到真核表达载体pCMV-DNMT3B1。结论:成功构建了人DNMT3B1真核表达载体,为进一步研究DNMT3B1提供了条件。

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和甲基化转移酶的影响

目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐他汀钙片(商品名:立普妥)(阳性对照组)、丹红注射液低剂量组和高剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周后。检测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。行HE染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块面积。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠血清基因组甲基化水平,采用ELISA法检测各组小鼠血清DNMTs水平。免疫组化染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块内DNMT1的表达。结果:与模型组相比,丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P<0.01)、丹红注射液高剂量组LDL-C水平明显降低(P<0.01),丹红注射液低剂量组HDL-C水平明显升高(P<0.05),丹红注射液高剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P<0.01)。丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清基因组甲基化和DNMTs水平显著降低(P<0.01)。丹红注射液与模型组相比,丹红注射液组As小鼠的校正后主动脉As斑块面积显著降低,以及斑块内DNMT1表达显著降低(P<0.01)。结论:丹红注射液可降低As小鼠血脂水平,减少As斑块面积,其机制可能与降低As小鼠血清基因组甲基化水平和整体DNMTs水平和抑制As小鼠主动脉斑块DNMT1表达有关。

DNA甲基转移酶1基因的克隆测序及其在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达

为了研究牦牛DNA甲基化转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)基因,并比较其在牦牛、犏牛睾丸组织中的mRNA水平,试验以成年麦洼牦牛睾丸组织cDNA为模板,利用RT-PCR扩增DNMT1基因,通过连接、转化等过程克隆出牦牛DNMT1基因CDS序列;并对其编码的蛋白质进行生物信息学分析、蛋白质相互作用网络预测分析;采用实时荧光定量PCR方法检测在牦牛(n=10)、犏牛(n=10)睾丸组织中DNMT1 mRNA的相对表达量。结果表明:牦牛DNMT1基因CDS全长为4836 bp,编码1610个氨基酸;牦牛DNMT1基因CDS序列与多胃反刍动物的同源性较高(>96%)。牦牛DNMT1蛋白分子质量为182.7 ku,无跨膜结构,无信号肽,为带正电荷的亲水性非分泌蛋白;DNMT1蛋白的二级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成;STRING相互作用网络显示其与DNMT3A、DNMT3B、组蛋白H3蛋白共表达;在犏牛睾丸组织中DNMT1 mRNA的表达极显著低于牦牛(P<0.01)。说明DNMT1基因可能会影响犏牛雄性不育。

子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA表达和E-cad甲基化检测

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cadherin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析宫颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性。结果:DNMT1 mRNA在正常宫颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05)。结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。

沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响。方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化。结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415±0.027),其差异具有统计学意义(P<0.01)。转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低。结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态。

非小细胞肺癌组织中DNMT1表达和hMLH1、hMSH2甲基化状态的变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)癌及癌旁组织中DNMT1表达和hMLH1、hMSH2基因甲基化状态的变化及意义。方法通过实时荧光定量PCR法检测52例肺癌及癌旁组织中DNMT1表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)法检测hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化状态。DNMT1表达与hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平相关性用Spearman相关分析。结果 52例NSCLC患者癌及癌旁组织中DNMT1 mRNA相对表达量分别为3.162 3±0.512 5、2.873 1±0.370 6,P<0.01;癌及癌旁组织中hMLH1基因启动子区甲基化阳性率分别为53.8%(28/52)、32.7%(17/52),差异有统计学意义(χ~2=4.740,P<0.05);癌及癌旁组织中hMSH2基因启动子区甲基化阳性率分别为57.7%(30/52)、34.6%(18/52),差异有统计学意义(χ~2=5.571,P<0.05)。hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理学类型、淋巴结转移、侵犯周围组织等无关(P均>0.05)。DNMT1表达与hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平呈显著正相关(r分别为0.479、0.528,P均<0.05)。结论 NSCLC癌组织中DNMT1呈高表达,DNMT1表达与hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化水平呈正相关性;三者表达与NSCLC患者临床病理特征无关。

AML和ALL患者骨髓DNMT1,SFRP1基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)基因甲基化及mRNA表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法根据FBA(French-American-British classification systems;法-美-英分型系统)标准选取2019年11月~2020年11月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70例,其中AML 50例和ALL 20例;另选取65例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP)检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1和SFRP1基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML和ALL患者临床参数之间的关系;用实时定量PCR检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA表达;Pearson相关分析明确DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1和SFRP1基因甲基化与预后的关系。结果AML和ALL患者中DNMT1基因甲基化发生率分别为26.0%和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ^(2)=47.683,P<0.001);SFRP1基因甲基化发生率分别为78.0%和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ^(2)=55.265,P<0.001),差异均有统计学意义。AML组DNMT1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=6.524,5.732,均P<0.001);SFRP1基因甲基化与WBC水平、BM水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=8.115,5.395,5.060,均P<0.05)。ALL组DNMT1基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ^(2)=4.802,P<0.05);SFRP1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=4.920,5.115,均P<0.05)。与对照组相比,AML和ALL患者化疗前DNMT1和β-catenin mRNA表达均显著升高(t=4.807~10.456,均P<0.05),SFRP1表达显著下降(t=24.791,12.069,均P<0.05)。与化疗前相比,AML和ALL患者化疗后DNMT1和β-catenin mRNA表达显著下降(t=3.461~6.374,均P<0.05),SFRP1表达显著上升(t=17.076,7.454,P<0.05)。两组患者DNMT1与SFRP1表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P<0.05);SFRP1与β-catenin表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P<0.05);两组患者DNMT1与β-catenin表达均无明显相关性。两组患者DNMT1基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ^(2)=3.862,3.679,均P<0.05);SFRP1基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ^(2)=2.927,3.155,均P<0.05)。结论DNMT1和SFRP1基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1和SFRP1基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

DNA甲基化调控p16表达在替格瑞洛改善血管内皮功能中的作用及机制

目的:探讨替格瑞洛对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导内皮损伤的影响及机制。方法:采用ELISA法检测人血清内皮素-1、一氧化氮含量,CCK-8法、EdU法、Transwell法检测细胞活力、增殖及迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR法、Western blot法检测DNA甲基化转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)、p16表达,慢病毒过表达载体构建p16的过表达系统,慢病毒敲除载体构建DNMT1和p16的敲除系统,甲基化特异性PCR法测定p16启动子区甲基化水平。结果:替格瑞洛促进ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical endothelial cell,HUVEC)活力、增殖及迁移能力,并显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡;替格瑞洛抑制ox-LDL诱导的HUVEC中p16表达,而过表达p16可逆转替格瑞洛对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护作用;DNMT1通过影响p16启动子区的甲基化水平抑制p16表达。结论:替格瑞洛可通过DNMT1介导的DNA甲基化调控p16表达,进而减轻ox-LDL诱导的HUVEC损伤,改善血管内皮功能。

RNAi沉默DNMT1基因对胰腺癌细胞ppENK甲基化状态的影响

目的观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNMT1基因的表达对胰腺癌Panc-1细胞的前脑啡肽原(preproen-kephalin,ppENK)基因甲基化状态的影响。方法采用针对DNMT1的Stealth核糖核苷酸干扰(siRNA)胰腺癌细胞,观察DN-MT1信使核糖核酸(mRNA)及DNMT1蛋白的表达;甲基化特异性PCR反应(MSP)检测不同处理组ppENK的甲基化状态。结果 Stealth RNAi转染到胰腺癌细胞Panc-1中48 h后,siRNA-3转染组的mRNA相对表达量和比率分别为0.116和32.9%,与空白对照组(0.352,100%)、脂质体对照组(0.346,98.2%)、RNAi阴性对照组(0.339,96.3%)相比差异有统计学意义(F=2.107 E4,P=0.000 1),转染组的mRNA相对抑制率为67.1%。siRNA-3转染组DNMT1蛋白相对表达量和比率分别为0.179和32.9%,与空白对照组(0.547,100%)、脂质体对照组(0.520,95%)、RNAi阴性对照组(0.535,97%)相比差异有统计学意义(F=2.195 E5,P=0.000 1)。于100 bp和96 bp处可见ppENK基因特异性条带,呈现部分去甲基化状态的特点。结论 DNMT1靶向的Stealth RNA瞬时转染到胰腺癌细胞Panc-1中可明显沉默DNMT1的基因和蛋白的表达,逆转抑癌基因ppENK的高甲基化状态,为胰腺癌的基因治疗提供相关的理论依据。

慢性乙型肝炎患者血清GR、FGF-21、DNMT1水平对肝纤维化程度的评估价值

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清谷胱甘肽还原酶(GR)、成纤维细胞生长因子21(FGF-21)、DNA甲基化转移酶1(DNMT1)水平对肝纤维化程度的评估价值。方法选取2021年5月至2023年5月于永煤集团总医院诊治的80例CHB患者为研究组,另选取同期健康体检者80例作为对照组。比较两组血清GR、FGF-21、DNMT1水平与HBV-DNA载量。依据肝纤维化程度将研究组患者分为无纤维化17例、轻度纤维化20例、中度纤维化25例、重度纤维化18例。分析血清GR、FGF-21、DNMT1水平与HBV-DNA载量、肝纤维化程度、Child-Pugh分级、炎症分级相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清GR、FGF-21、DNMT1对肝纤维化程度的评估价值。结果研究组血清GR、DNMT1水平高于对照组,FGF-21水平低于对照组(P<0.05);GR、DNMT1与HBV-DNA载量、肝纤维化程度、Child-Pugh分级、炎症分级呈正相关,而FGF-21与HBV-DNA载量、肝纤维化程度、Child-Pugh分级、炎症分级呈负相关(P<0.05);GR、FGF-21、DNMT1联合检测评估肝纤维化程度的AUC大于单项指标评估(P<0.05)。结论CHB患者血清GR、DNMT1水平升高,FGF-21水平降低,联合检测其水平对肝纤维化程度具有一定评估价值。

不明原因复发性流产患者绒毛组织中DNA低甲基化及机制

目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基化水平,实时定量PCR检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3a、DNMT3b、去甲基化酶10-11转位酶1(TET1)、TET2、TET3的mRNA水平,Western blot法检测DNMT1、DNMT2、DNMT3、TET1、TET2、TET3蛋白水平。免疫化学染色检测绒毛组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的表达和分布。结果与对照组相比,URSA组的全基因组甲基化水平显著降低,URSA组绒毛组织中DNMT1、DNMT3b的mRNA和蛋白水平显著降低,TET1、TET2的mRNA和蛋白水平显著增加。结论URSA妇女的流产绒毛组织呈现出低甲基化水平的状态,可能与DNMT1、DNMT3b上调,TET1、TET2下调有关。

非小细胞肺癌患者血清HDAC1和DNMT1浓度变化及临床意义

目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术前后血清中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的浓度变化情况与临床病理特征的关系。方法选取2018年1月至2020年1月在本院接受手术治疗的NSCLC患者117例为观察组,另选取同期在本院接受体检的健康体检者93例为对照组,比较两组患者血清中HDAC1和DNMT1浓度,分析手术前后观察组患者血清中HDAC1和DNMT1的浓度变化情况,比较不同临床病理特征下二者浓度,采用Spearman相关性分析法分析HDAC1、DNMT1浓度与患者临床分期的相关性。结果观察组患者的血清HDAC1和DNMT1浓度均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者中,术前Ⅲ~Ⅳ期患者的血清HDAC1、DNMT1浓度均高于Ⅰ~Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05),不同病理类型患者的血清HDAC1、DNMT1浓度比较差异均无统计学意义(P>0.05);术后不同病理类型和临床分期患者的血清HDAC1、DNMT1浓度均较术前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期患者的HDAC1、DNMT1浓度均高于Ⅰ~Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05),不同病理类型患者的血清HDAC1浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果显示,NSCLC患者临床分期与血清HDAC1、DNMT1浓度均呈明显正相关(P<0.05)。结论NSCLC患者血清中HDAC1和DNMT1浓度较高,手术后明显下降,且与患者临床分期存在相关性。

血清DNMT1在心力衰竭病人中的表达及其与预后的相关性

目的:探讨血清DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在心力衰竭病人中的表达情况及其与预后的相关性。方法:选取华北医疗健康集团邯矿总医院收治的128例心力衰竭病人作为观察组,另选取120名同期健康体检者为对照组,采用酶联免疫吸附法检测两组观察对象的血清DNMT1、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,用Pearson相关性分析血清DNMT1、hs-CRP与血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)的相关性,随访12个月,统计病人预后情况,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析DNMT1、hs-CRP对心力衰竭病人预后的预测价值,多因素Logistic回归分析心力衰竭病人预后的影响因素。结果:观察组血清DNMT1、hs-CRP水平高于对照组(P<0.05);预后不良组纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级Ⅲ级或Ⅳ级比例、DNMT1、hs-CRP、IL-1、IL-6、NT-proBNP、左室舒张末期内径(LVEDD)水平高于预后良好组,左室射血分数(LVEF)水平低于预后良好组(P<0.05);经Pearson相关性分析,血清DNMT1与IL-1、IL-6、NT-proBNP呈正相关(r值分别为0.351,0.527,0.326,P均<0.05),血清hs-CRP与血清IL-1、IL-6、NT-proBNP呈正相关(r值分别为0.453,0.324,0.443,P均<0.05);ROC曲线显示,血清DNMT1预测心力衰竭病人预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.780,最佳截断值为40.206μg/L;血清hs-CRP预测心力衰竭病人预后不良的AUC为0.840,最佳截断值为2.347 mg/L;血清DNMT1与hs-CRP联合预测心力衰竭病人预后不良的AUC为0.922,大于DNMT1、hs-CRP单独预测;多因素Logistic回归分析显示,DNMT1、hs-CRP、心功能分级、LVEF、LVEDD是心力衰竭病人预后不良的影响因素(P<0.05)。结论:DNMT1在心力衰竭病人血清中高表达,是心力衰竭病人预后的影响因素,其与hs-CRP联合检测对心力衰竭病人预后具有较高预测效能。

DNMT1、PDCD4在肝癌组织中的表达及临床意义

采用免疫组化法观察DNMT1、PDCD4在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达,并探讨其临床病理学意义。结果:DNMT1在癌、癌旁、正常肝组织中阳性表达率分别为77.78%、68.06%、32.26%,PDCD4阳性表达率分别为34.72%、45.83%、70.97%;PDCD4表达与肿瘤分期、分化程度相关。在用5-aza-CdR抑制DNMT1表达后,PDCD4 mRNA、蛋白在肝癌细胞株中的表达水平明显提高。认为DNMT1在肝癌组织中高表达,而PDCD4在肝癌组织中低表达;DNMT1可能通过甲基化机制负调控PDCD4的表达。