甲基双加氧酶对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨甲基双加氧酶(TET2)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法通过在线数据库分析TET2与NSCLC患者预后的相关性;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测人正常支气管上皮细胞及非小细胞肺癌系中TET2的表达;瞬时转染si-TET2干扰序列,运用CCK8、克隆形成法检测细胞的增殖;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测上皮间质转化(EMT)标志物以及N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Cyclin D1蛋白水平。结果TET2高表达的患者总体生存率差,相比于人正常肺上皮细胞,TET2在NSCLC细胞株中高表达。敲低TET2可显著抑制A549、H1299细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.001),并将细胞周期阻滞于G 0/G 1期。Western blot结果显示,N-cadherin、Vimentin和Cyclin D1蛋白表达显著下调,E-cadherin表达显著上调(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论TET2可能通过影响细胞周期以及EMT的关键蛋白促进NSCLC的增殖、迁移和侵袭。

TET甲基胞嘧啶双加氧酶2在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)是中国人最主要的死亡原因。动脉粥样硬化、心肌细胞凋亡、心肌肥厚和纤维化是CVD主要的病理过程。基因的表观遗传修饰特别是DNA甲基化在CVD中起重要作用。研究表明,TET甲基胞嘧啶双加氧酶2(Ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 2,TET2)参与基因表观遗传调控,TET2在CVD的发病机制中起重要作用。TET2可以调节心脏发育、改善动脉粥样硬化过程中内皮细胞功能障碍、调节血管平滑肌细胞表型转换、抑制免疫炎症反应和心肌细胞凋亡、心肌肥厚和纤维化。本文就TET2在CVD发病机制中的研究进展进行综述。

TET2重塑CXCR4 DNA甲基化对急性心肌梗死小鼠心肌组织自噬、炎症反应及凋亡的影响

目的:探究急性心肌梗死(AMI)过程中内皮细胞tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对趋化因子受体4(CXCR4)DNA甲基化的影响以及对AMI小鼠心肌组织自噬、炎症反应及组织细胞凋亡的影响机制,为临床探究AMI发展的分子机制提供理论依据。方法:8周龄雄性C57/BL6小鼠50只,制备AMI模型,尾部注射TET2、CXCR4过表达质粒;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织TET2、CXCR4、微管相关蛋白3(LC3)、P62、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2表达;甲基化检测CXCR4 DNA甲基化水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织内炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组心肌组织细胞凋亡指数。结果:与假手术组比较,模型组心肌组织内TET2、CXCR4均表达上调,TET2、CXCR4均在心肌组织内过表达,TET2过表达促进CXCR4表达,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TET2 mimic组CXCR4启动子区域DNA甲基化程度降低,CXCR4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组小鼠心肌组织自噬蛋白LC3、抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达下调,炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平、自噬蛋白P62、促细胞凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase-3表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);TET2、CXCR4过表达进一步下调LC3、Bcl-2蛋白表达,上调炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平,P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达;TET2、CXCR4二者联合体现出最低LC3、Bcl-2蛋白表达,最高炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMI发展中,TET2通过降低CXCR4 DNA甲基化,促进CXCR4基因表达,进而抑制AMI小鼠心肌组织自噬,上调炎症反应及细胞凋亡程度,促进疾病发展。

1011易位甲基胞嘧啶双加氧酶-1的结构和去甲基化作用及生物学功能

1011易位甲基胞嘧啶双加氧酶(TET)-1是发挥DNA去甲基化作用重要的蛋白质之一,始见于急性髓系白血病相关的染色体易位t(10;11)(q22;q23)的白血病患者,其C端为双加氧酶区,是TET-1的主要催化功能结构域,可将5-甲基胞嘧啶(5-m C)氧化为5-羟甲基胞嘧啶,经主动或被动去甲基化实现DNA去甲基化。TET-1通过参与DNA去甲基化调节基因表达,在胚胎发育、体细胞重编程、肿瘤发生、神经细胞发生发育等过程发挥作用,在成体细胞中参与调控细胞分化与增殖。TET-1蛋白及其介导的5-m C羟甲基化过程深化了人们对DNA碱基修饰多样性及复杂性的认识,其在干细胞增殖与分化和肿瘤发生等过程中的功能研究,为诸多生理现象和疾病发生发展作了新的诠释。

DNMT3A与TET2双突变对急性髓系白血病患者预后的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)与甲基胞嘧啶双加氧酶-2(TET2)双突变对急性髓系白血病(AML)患者预后的影响。方法 回顾性选取2021年1月至2023年12月在南京江北医院治疗的DNMT3A与TET2双突变AML患者86例设为DNMT3A与TET2双突变组,同时选取DNMT3A单突变AML患者50例、TET2单突变AML患者80例作为对照,分别设为DNMT3A单突变组、TET2单突变组。比较各突变患者临床一般资料、红细胞计数(WBC)、血红蛋白、血小板计数(PLT)、初次诱导疗效及无进展生存时间差异。结果 DNMT3A与TET2双突变组患者年龄<60岁比例为93.02%,高于TET2单突变组(70.00%)、DNMT3A单突变组患者(62.00%),差异有统计学意义(P<0.05);各突变组患者WBC、血红蛋白及PLT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。DNMT3A与TET2双突变组患者初次诱导完全缓解率为31.40%,明显低于TET2单突变组患者(71.25%),差异有统计学意义(P<0.05),与DNMT3A单突变组患者比较,差异无统计学意义(P<0.05);DNMT3A与TET2双突变组患者中位无进展生存时间为11个月(95%CI:10.48~11.52),明显少于TET2单突变组患者的22个月(95%CI:20.99~23.01),差异有统计学意义(P<0.05),与DNMT3A单突变组患者的12月(95%CI:10.70~13.30)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 相比较TET2单突变患者,DNMT3A与TET2双突变AML患者初次诱导疗效及预后较差。

TET2对非小细胞肺癌细胞活性及运动能力的影响

目的观察甲基双加氧酶(ten-eleven translocation,TET2)表达量对非小细胞肺癌细胞增殖能力、凋亡率、细胞周期、迁移和侵袭的影响。方法通过RT-PCR和Western blot法检测不同非小细胞肺癌细胞TET2基因和蛋白的表达情况,对高表达TET2的细胞敲低其基因表达(shRNA1),对低表达TET2的细胞过表达其基因(OE-TET2)。通过CCK-8检测TET2表达量对细胞增殖的影响,通过流式细胞术观察TET2表达量对细胞凋亡和细胞周期的影响,通过迁移实验和侵袭实验观察TET2表达量对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果H1299细胞的TET2基因和蛋白表达量最高,A549的最低(P<0.05)。OE-TET2组细胞增殖能力显著低于正常A549,shRNA1组细胞增殖能力显著高于正常H1299细胞(P<0.05)。OE-TET2组细胞凋亡率显著高于正常A549,shRNA1组细胞凋亡率显著低于正常H1299细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。OE-TET2组细胞迁移和侵袭细胞数量显著低于正常A549,shRNA1组细胞迁移和侵袭细胞显著高于正常H1299细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TET2可降低非小细胞肺癌增殖能力,提高其凋亡率,减弱其迁移和侵袭能力。

胆囊癌患者癌组织及其血清CDO1基因启动子甲基化水平变化及与预后的关系研究

目的:研究胆囊癌患者癌组织及血清半胱氨酸双加氧酶-1(CDO1)基因启动子甲基化水平与预后的关系。方法:回顾性分析2016年1月至2017年1月内蒙古包钢医院收治的90例胆囊癌患者的临床资料,依据患者预后情况分为预后良好组(生存时间≥3年,n=40)与预后不良组(生存时间<3年,n=50)。比较两组临床资料(性别、年龄、淋巴结转移情况、组织学类型、TNM分期、肝脏侵犯及胆管侵犯情况)及癌组织和血清CDO1基因启动子甲基化情况,采用单因素及多因素Logistic回归分析法明确胆囊癌患者预后不良的危险因素,并对癌组织及血清CDO1基因启动子完全、部分、无甲基化患者3年生存率进行分析。结果:预后不良组女性、年龄>60岁、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、癌组织及血清CDO1基因启动子完全甲基化所占百分比均显著高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,上述因素均为胆囊癌患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。癌组织及血清CDO1基因启动子无甲基化患者3年生存率高于癌组织及血清CDO1基因启动子完全、部分甲基化患者。结论:CDO1基因启动子甲基化水平与胆囊癌预后有关,其可能作为预测胆囊癌患者预后的生物学指标。

miR-589-5p靶向调控TET2对人脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-589-5p靶向调控甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对人脑微血管内皮细胞(hBMVECs)增殖和凋亡的影响。方法体外培养hBMVECs,进行细胞转染和双萤光素酶检测;将细胞分为对照组、LPS组、miR-NC+LPS组和miR-589-5p inhibitor+LPS组,处理24 h后检测细胞增殖率和细胞凋亡率,同时检测细胞中miR-589-5p和TET2相关mRNA和蛋白表达水平。结果检索TargetScan数据库显示,miR-589-5p对TET2有潜在的结合位点。与对照组相比,其余各组细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)蛋白、半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-1蛋白、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白、Caspase-3蛋白水平均增加(P<0.05),细胞增殖率及TET2 mRNA、TET2蛋白水平均降低(P<0.05);与LPS组和miR-NC+LPS组相比,miR-589-5p inhibitor+LPS组细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白、IL-1β蛋白、Caspase-3蛋白水平均降低(P<0.05),细胞增殖率及TET2 mRNA、TET2蛋白水平均增加(P<0.05);LPS组和miR-NC+LPS组细胞增殖率、细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、TET2 mRNA、TET2蛋白、NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白、IL-1β蛋白、Caspase-3蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在LPS环境下,hBMVECs中的miR-589-5p表达增加,通过转染miR-589-5p inhibitor可以增加TET2表达,促进hBMVECs增殖,并抑制hBMVECs凋亡。

地西他滨与阿扎胞苷治疗骨髓增生异常综合征患者的临床疗效

目的探讨地西他滨与阿扎胞苷治疗骨髓增生异常综合征患者的临床疗效。方法选取2021年1月至2022年6月抚州市第一人民医院收治的60例骨髓增生异常综合征患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组30例。对照组给予静脉滴注地西他滨治疗,观察组给予皮下注射阿扎胞苷治疗。比较两组临床疗效、血常规指标(血红蛋白、血小板计数、骨髓有核细胞数量)、甲基胞嘧啶双加氧酶-2(TET2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平、生命质量及不良反应发生情况。结果观察组治疗总有效率为90.00%,高于对照组的66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血红蛋白水平、血小板计数、骨髓有核细胞数量均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组TET2水平均高于治疗前,VEGF水平均低于治疗前,且观察组TET2水平高于对照组,VEGF水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组躯体功能、角色功能、情绪功能、认知功能、社会功能、总健康状况评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地西他滨与阿扎胞苷均能一定程度上改善骨髓增生异常综合征患者的病情,但阿扎胞苷对骨髓增生异常综合征患者临床症状、血常规、TET2、VEGF水平的改善效果显著,可有效提升患者生命质量,且不良反应少,值得临床推广应用。

血清DNMT1与TET1表达水平在肺癌早期诊断中的临床价值

目的:检测不同类型肺癌患者与健康人血清中DNA甲基化酶1(DNA methylase 1,DNMT1)和甲基胞嘧啶双加氧酶(ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1,TET1)的表达水平,探讨2种酶对肺癌早期诊断的临床意义。方法:选取170例初诊为肺癌的患者血清与90例体检中心健康成年人血清,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测血清中DNMT1与TET1的表达水平。使用SPSS 26.0与Medcalc软件进行统计分析,比较健康成年人与肺癌患者血清中DNMT1与TET1表达水平的差异;比较血清DNMT1和TET1表达水平在不同临床分期、不同类型肺癌、不同性别、不同年龄段、不同吸烟史、不同癌症家族史之间的差异。结果:肺癌患者血清中的DNMT1显著高于健康成年人,而TET1的表达水平低于健康成年人,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两种酶在肺癌患者血清中的表达水平与肺癌患者的临床病理分期有关。此外,DNMT1与TET1表达水平与不同类型肺癌的分类有关。结论:DNMT1与TET1有作为肺癌早期诊断标志物的潜在价值。

甲基胞嘧啶双加氧酶1在肿瘤中的研究进展

甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)蛋白是一种5-甲基胞嘧啶(5-mC)羟化酶,属于人类α-酮戊二酸加氧酶TET蛋白家族。其功能是识别并结合到基因组5’-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)-3’二核苷酸密度高的区域如CpG岛,启动DNA去甲基化程序,维持DNA甲基化和去甲基化平衡,以保持基因组甲基化稳态,实现表观遗传调控。TET1表达和/或功能异常与肿瘤的发生和进展密切相关,在不同来源的肿瘤中可以表现为原癌基因或者抑癌基因属性。本文综述近年来TET1在肿瘤中的作用及机制的研究进展。

TET2:潜在的动脉粥样硬化表观遗传生物标记物和治疗靶点（英文）

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性的病理改变,是心血管疾病最主要的病因,寻找新的生物标记物对有效诊断和治疗动脉粥样硬化有非常重要的作用。最新研究发现在很多肿瘤疾病中出现了TET2的功能缺失或异常。甲基双加氧酶TET2为TET蛋白家族成员,主要功能为催化5甲基胞嘧啶(5mC)生成5羟甲基胞嘧啶(5hmC),参与DNA的去甲基化和修复及基因组的稳定。DNA甲基化模式的改变发生于动脉粥样硬化的发生发展过程中。最近的研究表明,TET2在造血干细胞的自我更新及分化过程中起着非常重要的作用,TET2突变及功能失调与多种疾病,特别是血液性疾病的发生、发展密切相关。基于TET2的生物学作用,我们推测TET2可能是动脉粥样硬化的理想的表观遗传学生物标记物以及防治的靶点。

芪莲益髓清毒颗粒对低危骨髓增生异常综合征的疗效及其对TET2和IDH1基因的作用

目的:观察芪莲益髓清毒颗粒对低危骨髓增生异常综合征(MDS)患者的疗效,及其对甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)和异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因表达及甲基化的影响。方法:选取2018年01月~2019年10月就诊于山东中医药大学附属医院血液病科的IPSS-R低危MDS患者60例,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组各30例。观察组患者给予芪莲益髓清毒颗粒及最佳的支持治疗,对照组患者仅给予最佳的支持治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效、中医证候积分、骨髓单个核细胞TET2和IDH1基因的表达水平及甲基化情况。采用液相色谱质谱联用技术筛选芪莲益髓清毒颗粒中相关化学组分。结果:治疗后观察组治疗的总有效率显著高于对照组。观察组中医证候积分的改善优于对照组(P<0.05)。观察组和对照组治疗前TET2和IDH1 mRNA的表达水平较正常对照组降低(P<0.05);观察组治疗后的TET2和IDH1 mRNA表达水平均显著高于治疗前(P<0.05)。对照组治疗后的TET2 mRNA显著高于治疗前(P<0.05),而IDH1 mRNA表达水平则与治疗前无显著差异。治疗后,观察组TET2基因甲基化阳性率由30%下降为6.7%,IDH1基因甲基化阳性率由16.7%下降为6.7%。芪莲益髓清毒颗粒中鉴定出了与甲基化相关的21种化合物成分。结论:芪莲益髓清毒颗粒可提高支持治疗对MDS的效果,其机制可能与调控TET2和IDH1基因有关,其中包括去甲基化作用。芪莲益髓清毒颗粒治疗MDS是有效的。

长链非编码RNA AC073046.25在系统性红斑狼疮易感基因TET3表达调节中的作用

目的·探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)AC073046.25在单核细胞中对Tet 甲基胞嘧啶双加氧酶3(Tet methylcytosine dioxygenase 3,TET3)表达的调控作用,分析其作为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)诊断的生物标志物的可行性。方法·通过表观遗传学修饰及胞浆胞核定位对AC073046.25的细胞特异性及功能进行预测。在U-937细胞中利用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对AC073046.25进行敲低(knock down),通过实时荧光定量PCR分析ASO敲低AC073046.25后对TET3表达水平的影响。收集健康志愿者(n=32)与SLE患者(n=46)的单核细胞,通过皮尔逊系数分析AC073046.25与TET3表达水平之间的相关性。将健康志愿者记为健康对照组,同时按系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分标准将SLE患者分为疾病稳定组和疾病活跃组,采用非配对双侧student's t检验比较AC073046.25与TET3在健康对照组及不同疾病活动组间的差异。结果·表观遗传学数据及胞浆胞核定位实验提示,AC073046.25可能在单核细胞中参与TET3的表达调控。在U-937细胞中,ASO敲低AC073046.25后,TET3表达水平降低(ASO组均P=0.002)。相关性分析显示,原代单核细胞中AC073046.25与TET3的表达呈正相关(r=0.650,P=0.000)。非配对双侧student's t检验结果显示,分别与健康对照组和疾病稳定组相比,AC073046.25在疾病活跃组中的表达水平降低(P=0.002,P=0.000)。结论·在单核细胞中AC073046.25能够调控TET3的表达,在疾病活动度较高的SLE患者单核细胞中其表达水平显著降低;继而提示,AC073046.25可作为活跃性SLE的生物标志物辅助疾病活动性诊断。

溃疡性结肠炎组织中TET2的表达水平与患者预后的关系

目的探究溃疡性结肠炎(UC)组织中DNA甲基胞嘧啶双加氧酶10-11易位2(TET2)的表达水平与患者预后的关系。方法选择2018年10月至2019年10月在遂宁市中心医院就诊的102例UC患者作为研究对象。采用蛋白质印迹法检测UC组织中TET2的表达水平,并分析其与UC患者预后的关系。结果102例UC患者中有41例(40.20%)预后不良。根据预后情况将患者分为预后良好组(n=61)和预后不良组(n=41)。预后良好组TET2的表达水平低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,改良Mayo评分、IL-1β、TET2和初次治疗应用糖皮质激素均是UC患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。模型B(由改良Mayo评分、IL-1β、TET2和初次治疗应用糖皮质激素组成)评估UC患者预后的效能高于模型A(由改良Mayo评分、IL-1β和初次治疗应用糖皮质激素组成),差异有统计学意义(P<0.05)。当阈值概率>10%时,模型B评估UC患者预后的净收益高于模型A。结论UC组织中TET2的表达水平与患者预后有关。基于TET2构建的模型对于评估UC患者的预后情况具有一定价值。

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果:与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P<0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P<0.05),TET2蛋白表达水平降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P<0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P<0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。

TET1过表达载体构建及其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞鉴定

目的构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定。方法从人宫颈癌组织中扩增出TET1目的片段并将其克隆到pLVX-MYRF载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证。选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1。与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达。

TET2突变相关不确定潜能的克隆性造血与卒中发生发展的研究进展

与年龄相关的不确定潜能的克隆性造血(clonal hematopoiesis of indeterminate potential,CHIP)能通过激活炎症促进动脉粥样硬化的发生、发展,从而增加心脑血管疾病风险。作为最常见的CHIP相关突变的表观遗传调控基因之一,甲基胞嘧啶双加氧酶2(ten-eleven translocation-2,TET2)基因突变可通过组蛋白去乙酰化作用增加巨噬细胞中IL-1β等促炎因子的转录,加速动脉粥样硬化斑块的形成,并与卒中风险增加及预后不良有关。未来通过靶向TET2基因及其相关机制通路可能有助于发现降低卒中风险或改善卒中预后的新途径。

母鼠孕期、哺乳期及子代持续高碘对子鼠甲状腺功能、记忆能力的影响

目的探讨大鼠孕期、哺乳期及其子代持续高碘摄入,对子代大鼠甲状腺功能和学习记忆的影响及可能机制。方法6~8周龄Wistar大鼠,体重为220~240 g,适应性喂养1周后,雌雄以1∶1交配。孕鼠分为正常碘摄入组(NI)、10倍高碘摄入组(10 HI)以及100倍高碘摄入组(100 HI),通过饮水及饲料摄碘,摄碘量分别为7.5、75.0、750.0μg/d,每组8只孕鼠,其子代断乳后继续给予不同倍数碘至180 d。利用Morris水迷宫测定子鼠空间学习记忆能力。子鼠颈总动脉取血,分离血清待测,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平;提取海马总RNA,实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)检测10-11易位甲基胞嘧啶双加氧酶(TET)1、2和3 mRNA表达;共聚焦免疫荧光共定位观察脑组织中甲状腺激素受体β1(TRβ1)和TET 3表达。结果与NI组[(4.95±0.53)、(12.62±1.81)pmol/L,(7.70±1.04)mU/L]相比,10 HI和100 HI组血清FT3、FT4水平[(4.60±0.49)、(4.62±0.54),(11.67±1.54)、(10.85±1.56)pmol/L]显著降低(P均<0.05),血清TSH水平[(9.62±0.93)、(9.77±1.28)mU/L]显著升高(P均<0.05)。与NI组相比,10 HI和100 HI组定位导航实验连续5 d平均逃避潜伏期显著增加(P均<0.05),第6天空间探索实验显示穿越平台次数显著减少(P均<0.05);且TET 3在海马组织中的mRNA表达显著下降(P均<0.05)。免疫荧光结果显示,TRβ1和TET 3在100 HI组子鼠脑血管壁内膜、脑室脉络丛、神经元共定位表达。结论母体孕期、哺乳期高碘摄入,子代继续高碘摄入至180 d时出现空间学习记忆能力下降,可能与甲状腺激素改变以及TET 3、TRβ1在脑中的相互作用有关。

血管疾病的表观遗传学研究进展

表观遗传学指独立于DNA核苷酸序列本身的基因表达的可遗传改变,其主要机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA等,这些机制共同作用调控基因的特异性表达。血管疾病是由环境因素和遗传因素相互作用引发的一种慢性疾病。近年来,越来越多的研究证实表观遗传调节在血管疾病的发生发展中具有重要的作用。本文对表观遗传学在血管疾病中的最新研究进展进行综述。