用甲基噻唑蓝筛选抗铜绿假单胞菌药物方法的建立

目的:建立适合铜绿假单胞菌的定量、快速、体外高通量药物筛选方法。方法:优化甲基噻唑蓝法检测活细菌数量的实验条件,用MIC方法与MTT法比较2种已知抗生素的抗菌作用。结果:微量培养对细菌生长无影响,最佳MTT浓度和反应时间分别为5 mg·mL-1和1 h。在同一培养时间,菌浓度在1×107～1×1010CFU·mL-1范围内,甲臜的吸收度与菌浓度呈线性相关。用2种抗生素比较MIC方法与MTT法药敏测定的结果一致。结论:MTT微量法进行抗铜绿假单胞菌新药筛选操作简便,省时省力,成本较低,结果稳定,具有可重复性,适宜体外高通量药物筛选。

膜联蛋白A5重组质粒的构建及其过表达对SiHa细胞增殖的影响

目的构建膜联蛋白．A5（ANXA5）重组质粒并探讨过表达ANXA5对宫颈癌SiHa细胞的增殖产生的影响。方法将ANXA5基因克隆入含His标签的pcDNA3．1质粒载体，构建pcDNA3．1-ANXA5重组质粒；用磷酸钙共沉淀法将重组质粒和pcDNA3．1空质粒分别转染宫颈癌细胞系SiHa细胞，G418加压培养，免疫印迹法筛选过表达ANXA5的细胞克隆，免疫组织化学筛选已转染pcDNA3．1空质粒的细胞克隆；将过表达ANXA5蛋白的细胞、载有pcDNA3．1空质粒的细胞以及未处理的SiHa细胞分别进行四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）实验和CCK．8实验检测细胞增殖情况。结果成功构建了pcDNA3．1-ANXA5重组质粒，测序证实ANXA5基因序列正确；普通未处理的SiHa细胞和转染了pcDNA3．1空质粒的SiHa细胞生长速度较快，两组间无显著性差异（P〉0．05）；过表达ANXA5的SiHa细胞其增殖速度比前两组显著降低（P〈0．05）。结论膜联蛋白A5可能对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖具有抑制作用。

葡多酚对骨髓细胞辐射损伤的保护作用

目的研究葡多酚(GPC)对辐射诱发的小鼠骨髓细胞增殖活性损伤的保护作用。方法体外实验:给予不同剂量GPC的小鼠骨髓细胞用60Coγ射线进行一次性照射,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性。体内实验:将经口灌胃给予不同剂量GPC的小鼠用60Coγ射线进行全身性亚急性照射,取骨髓细胞用MTT法检测各组增殖活性,用流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡率,用免疫组织化学方法检测各组Bcl-2表达。结果体外实验:辐射对照组放高GPC剂量组细胞增殖活性和Bcl-2表达水平升高,G0/G1期细胞比例下降,S、G2+M期细胞比例有不同程度升高,凋亡率明显降低,2组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论GPC对辐射损伤引发的骨髓细胞增殖活性改变和凋亡具有明显保护作用。