猴头菌多糖的3-O-甲基-甲基戊糖的鉴定

目的:对猴头菌多糖中的3-O-甲基-甲基戊糖组分进行鉴定。方法:从猴头菌子实体中经过提取分离纯化得到纯品HEPF1,经三氟醋酸水解后用硼氢化钠还原,然后对其进行乙酰化,以单糖标准品做对照,用 GC-MS 进行分析,同时用^(13)CNMR 的 DEPT-135对 HEPF1中的3-O-甲基-甲基戊糖组分进行鉴定。结果:建立了毛细管气相色谱-质谱联用鉴定含有3-O-甲基-甲基戊糖的猴头菌多糖成分的方法。结论:HEPF1中含有3-O-甲基-甲基戊糖组分。

甲基戊糖的双波长紫外分光光度分析法

对一种甲基戊糖的分光光度法加以改进 ,采用正交设计法选择实验中试剂量的最佳组合 ,并分析了测定中相关参数的影响。该法简单、快速、精确、灵敏度高 ,检测线性范围为2～90mg/L ,测量鼠李糖的相对误差为2.6 %。文中还以实际发酵液作为分析对象 ,用高压液相色谱法验证了该检测技术的可靠性。

甲基戊糖梭菌膜整合焦磷酸酶提高转基因烟草的抗旱性

由焦磷酸(PPi)驱动的膜整合焦磷酸酶(PPase)在生物适应逆境方面可能起着重要作用,包括H^+-PPase、Na^+-PPase和Na^+,H^+-PPase三个亚家族。相比于H^+-PPase,其它两个亚家族PPase近年来才在原核生物(特别是动物肠道菌)中被发现,有关它们的应用研究更是匮乏。通过两轮巢式PCR从人肠道宏基因组中扩增得到甲基戊糖梭菌膜整合焦磷酸酶(CmPP)全长基因。序列分析表明该基因含有一个完整的ORF(长2 100 bp,编码一个699 aa的蛋白质,G+C含量为59.9%,碱基分布均衡)。膜拓扑学结构预测CmPP是一个由16个跨膜α螺旋组成的膜蛋白,与目前已鉴定过的膜PPase跨膜结构相符。序列比对分析推测CmPP属于K+依赖型Na^+,H^+-PPase亚家族成员。另外,通过农杆菌转化获得了CmPP转基因烟草。对其子一代植株的抗旱分析发现,在干旱胁迫条件下CmPP转基因株系的干物质含量、总叶绿素含量和根系活力均下降,而其叶片MDA含量和电解质渗透率均升高,但相同胁迫下的变化程度都显著低于野生型烟草。这些结果表明CmPP基因的导入能够有效提高烟草的抗旱能力。

微孔板法检测肺炎球菌多糖中甲基戊糖含量

目的微孔板法检测肺炎球菌多糖中甲基戊糖含量,并对该方法进行验证。方法将常规甲基戊糖测定法应用于微孔板,并优化盐酸半胱氨酸浓度。对建立的方法进行线性、精密度及准确度的验证。用建立的方法检测肺炎球菌多糖样品中甲基戊糖含量及多糖衍生物的分子量分布。结果最佳的盐酸半胱氨酸浓度为15 mg/ml。标准品L-鼠李糖在5~30μg/ml范围内,其浓度与（A396-A430）值呈良好的线性关系,R2〉0.999;批内及批间CV值分别为0.9%~1.1%及2.2%~3.2%;加入2.5、5、10μg/ml L-鼠李糖的6B型原糖及多糖衍生物中的甲基戊糖含量的回收率为91.73%~100.70%。微孔板法及常规方法测定的肺炎球菌多糖中甲基戊糖含量无明显差异（P〉0.05）,微孔板法测定多糖分子量分布与常规方法有较好的一致性。结论微孔板法可有效、准确、稳定地检测肺炎荚膜多糖及其衍生物中甲基戊糖含量,该方法灵敏度高,操作简便快捷,节约样品、试剂等材料,适用于疫苗生产过程中的质量控制。