甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法:采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响,并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5SrRNA)。结果:0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后,RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01);MTA 0.5mmol/L作用4、8h后,RKO细胞tRNAs、5SrRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035,0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。

5—甲基硫代腺苷对培养鼠脑星形胶质细胞反应性胶质化的抑制

观察5—甲基硫代腺苷（5—MTA），作为碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）受体的酪氨酸激酶抑制剂，对反应性星形胶质化的影响。原代培养大鼠星形胶质细胞（AS）行机械刮伤后，应用免疫组织化学及原位杂交法检测增生细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP)及其mRNA表达。结果：与对照组相比，损伤后1～2d，实验组AS胞体瘦小。突起短少，增生减弱（PCNA阳性细胞数减少，P＜001），GFAP-mRNA和GFAP表达减弱（P＜O01）。然而损伤后3d，两组的上述指标测定无明显差异。结论：5一MTA对反应性胶质化有可逆抑制作用。

TFⅢB亚单位Bdp1在甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中作用的研究

目的探讨TFⅢB亚单位Bdp1在5-甲基硫代腺苷(methylthioadenosine,MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的抑制过程中的作用。方法采用Realtime PCR方法分析TFⅢB亚单位Bdp1基因mRNA水平的变化的转录水平;采用Western Blot方法分析TFⅢB亚单位Bdp1蛋白水平的变化;采用转染及荧光素酶报告基因的检测方法检测Bdp1基因荧光素酶活性。结果 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1在mRNA水平(0.441±0.03,P=0.001)和蛋白水平出现了明显的下调,同时报告基因Bdp1基因荧光素酶活性也出现了明显的下调(0.460±0.08,P=0.001)。结论 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1蛋白的下调可能起到重要作用。

甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及其相关机制。方法采用Hoechst33258染色技术检测甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响,并采用RT-PCR方法在mRNA水平研究cFLIP基因在甲基硫代腺苷诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中的作用。结果甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞具有明显促进凋亡作用。在这一过程中,cFLIP基因在mRNA水平上出现明显下调情况。结论甲基硫代腺苷对HCT116细胞具有明显凋亡诱导作用,cFLIP基因的下调可能起到了重要作用。

5-甲基硫代腺苷对结肠癌Hct116细胞增殖的影响

目的研究5-甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌Hct116细胞增殖的影响及其相关机制。方法采用MTT比色法及软琼脂克隆形成试验分析MTA对结肠癌Hct116细胞增殖的影响,采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)及TFⅢB亚单位TBP、Bdp1和Brf1基因mRNA水平的变化,并采用Western Blot的方法分析了TFⅢB亚单位Bdp1蛋白水平的变化。结果 MTA对结肠癌Hct116细胞具有明显的增殖抑制作用,在这一过程中,RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)的mRNA水平明显下调;同时TFⅢB亚单位Bdp1在mRNA水平和蛋白水平也出现了明显下调。结论 MTA对结肠癌Hct116细胞具有明显增殖抑制作用;RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调、TFⅢB亚单位Bdp1蛋白的下调可能在这一抗肿瘤过程中起到重要作用。

C-FLIP基因在甲基硫代腺苷诱导结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞凋亡的作用及其相关机制的研究.方法:采用Hoechst33258染色技术检测MTA对结肠癌RKO细胞凋亡的影响,并采用Realtime PCR和Western Blot的方法在mRNA和蛋白水平研究cFLIP基因在MTA诱导的结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用.结果:MTA对结肠癌RKO细胞具有明显促进凋亡的作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA和蛋白水平上均出现明显下调情况.结论:MTA对RKO细胞具有明显凋亡诱导作用,cFLIP基因的下调可能起到了重要的作用.

甲基硫代腺苷对正常结肠NCM460细胞和结肠癌HCT116细胞增殖的影响及其机制

目的探讨甲基硫代腺苷（MTA）对正常结肠NCM460细胞和结肠癌HCTll6细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用噻唑蓝（MTr）比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和HCTll6细胞增殖和凋亡的影响．Westrenblot检测MTA对HCTll6细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）、bcl-2同源拮抗剂（bak）、bcl-xL等表达的影响。结果（1）对增殖的影响：MTA0．5、1．0、2．0、3．0mmolfL作用16h后，NCM460细胞存活率分另0为（98．9±3．3）％、（94．5±2．8）％、（88．4±2．5）％、（81．3±2．1）％。MTA0．5、1．0、2．0、3．0mmol／L作用16h后，HCTll6细胞存活率分别为（84．1±4．5）％、（69．4±5．2）％、（55．3±3．8）％、（40．9±3．5）％，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）对凋亡的影响：MTA0、0．5、1．0、2．0、3．0mmol／L作用16h后，NCM460细胞凋亡率分别为（3．5±0．3）％、（4．6±0．6）％、（7．2±1．1）％、（9．8±1．6）％、（12．4±1．2）％。MTA0、0．5、1．0、2．0、3．0mmol／L作用16h后，HCT116细胞凋亡率分别为HCT116细胞凋亡率分别为（3．3±0．7）％、（11．04-1．4）％、（20．3±3．0）％、（30．1±4．1）％、（39．3±4．4）％，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）MTA处理的NCM460细胞生长密集，光泽度好，未见明显凋亡。MTA处理HCT116细胞，尤其是2d处理组，出现明显细胞凋亡。（4）Westernblot：MTA作用HCT116细胞中MTA受体MTAIAR的表达上调，与NCM460细胞的MTAlAR表达比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）MTA作用于HCT116后，抑制凋亡的bcl-2和bcl-xL的表达明显下降，而促进凋亡的bax、bak等表达，与凋亡密切相关的指标bcl-2／bax比值明显下降。结论MTA对HCT116细胞有明显的抗肿瘤活性，对NCM460细胞的毒性较低。MTA发挥作用与其受体蛋白MTAlAR的上调有关，并且凋亡相关蛋白的表达发生变化。提示MTA通过促进细胞凋亡来抑制细胞增殖。

MTA对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的作用.方法:采用MTT比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和RKO细胞增殖和凋亡的影响.结果:MTA对结肠癌RKO细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡的作用,该作用强于对结肠正常上皮细胞NCM460细胞的增殖和凋亡的影响.结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,对NCM460细胞的毒性较低.