甲基-苯基四氢吡啶对脑不对称小鼠纹状体内多巴胺和白介素含量的影响

为探讨甲基-苯基四氢吡啶(MPTP) 注射后脑不对称小鼠纹状体内多巴胺降低程度,及纹状体内细胞因子水平变化,C57BL/6J小鼠经过伸爪取食试验,筛选为反映脑不对称的左利鼠和右利鼠,并接受25 mg/kg MPTP腹腔注射连续5天,检测注射后的第1天,第3天和第14天纹状体内多巴胺及代谢物含量和细胞因子IL-1茁、IL-6的动态水平. 结果表明,无论在左利鼠还是右利鼠,纹状体内多巴胺含量在MPTP注射后每个检测时间点都显著降低,纹状体内IL-1茁水平在第1天显著降低,纹状体内IL-6水平在MPTP注射后每个检测时间点也显著降低. 实验结果同时表明,左利鼠和右利鼠IL-1茁和IL-6的基础水平有显著不同. MPTP注射后,与右利小鼠相比,左利小鼠有较高的多巴胺翻转降低和较低的细胞因子表达,而且,纹状体内多巴胺水平与纹状体内IL-6水平呈正相关. 这些结果提示,MPTP诱导多巴胺丢失伴随着黑质纹状体系统内细胞因子水平的改变,而且,脑不对称有可能通过影响纹状体内细胞因子水平而进一步影响MPTP诱导的多巴胺降低的程度.

绿茶对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶致帕金森病小鼠模型神经行为学的防治作用

目的观察绿茶对1-甲基-4-苯基^(-1),2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠的防治作用。方法 C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP 30 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续4 d,制备PD模型,并随机分为5组:模型组、绿茶多酚组(GTP)、绿茶低(L)、中(M)、高(H)剂量组,另取正常组作对照。GTP组灌胃GTP 0.625 g·kg^(-1)·d^(-1),绿茶L、M、H剂量组灌胃0.312、0.625、1.250 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组灌胃生理盐水10 ml·kg^(-1)·d^(-1),连续14 d。于灌胃第8天起,GTP组、绿茶各剂量组和模型组小鼠腹腔注射MPTP 30 mg/kg,连续4 d。模型组、GTP组和绿茶L、M、H剂量组于第11天腹腔注射MPTP后,进行震颤麻痹评分实验,各组于第15天进行小鼠肢体运动功能(爬杆、游泳)检测。结果绿茶对小鼠肢体运动功能的减退有不同程度的调节和改善作用。结论绿茶L、M、H剂量组对改善PD小鼠行为学异常均有一定的效果,效果等同于甚至优于GTP,且绿茶H组(1.250 g·kg^(-1)·d^(-1))效果最好。可推算出体重60 kg的普通居民每日通过饮用3.03、6.08和12.15 g绿茶对防治PD有一定效果。

1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的帕金森病小鼠模型多巴胺能神经元的缺失方式

目的:观察1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyritine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠急性模型与亚急性模型多巴胺能神经元的缺失方式。方法:实验于2004-11/2005-02在华北煤炭医学院解剖教研室实验室完成。①C57bl小鼠30只,随机分为3组:对照组、急性模型组、亚急性模型组,每组10只。②给予模型组小鼠腹腔注射MPTP,其中亚急性组30mg/(kg·d),连用5d;急性组一天内给药4次,每次20mg/kg,间隔时间一两个小时;对照组给予等量生理盐水。③最后一次注射后24h内取脑,制备石蜡切片。应用原位末端标记法、酪氨酸羟化酶、原癌基因蛋白Bcl-2和细胞色素C蛋白免疫组化染色观察多巴胺能神经元凋亡和改变。结果:30只小鼠均进入结果分析。经免疫组化法发现酪氨酸羟化酶、原癌基因蛋白Bcl-2、细胞色素C蛋白染色阳性细胞数在急性模型组与亚急性模型组之间差别具有显著意义[(22.40±2.06),(68.20±3.61)个/切片;(20.60±2.41),(66.80±2.12)个/切片;(93.0±2.24),(23.2±2.58)个/切片,P<0.001]。④应用原位末端标记法在急性模型组未发现凋亡,而亚急性模型组存在凋亡现象。结论:MPTP诱导的帕金森病小鼠急性模型多巴胺能神经元的缺失可能通过坏死实现,而亚急性模型则是通过凋亡来实现的。

乌鸡黑色素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶致亚急性帕金森病模型小鼠的神经保护作用研究

目的探讨乌鸡黑色素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)模型小鼠的神经保护作用及其机制。方法 2013年3月—2014年5月,按照随机数字表法将60只雄性C57/B6小鼠分为对照组(n=10)、MPTP模型组(n=12)和乌鸡黑色素治疗组(n=38);乌鸡黑色素治疗组又进一步分为10 mg/kg治疗组(n=13)、30 mg/kg治疗组(n=13)和100 mg/kg治疗组(n=12)。对照组小鼠采用0.9%氯化钠溶液灌胃。MPTP模型组和乌鸡黑色素治疗组小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg,1次/d,共7 d),同时乌鸡黑色素治疗组小鼠分别灌胃给予不同剂量的乌鸡黑色素(10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg,1次/d,共7 d)。剔除建模不成功小鼠,最后实际入组小鼠分别为对照组10只、MPTP模型组10只、10 mg/kg治疗组10只、30 mg/kg治疗组9只、100 mg/kg治疗组9只。比较各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性纤维的表达变化、黑质致密部TH免疫阳性神经元数及纹状体TH水平。结果对照组可见大量呈束状、密集、排列规则有序TH免疫阳性神经纤维;MPTP模型组TH免疫阳性神经纤维稀疏、断裂且排列零散无序;乌鸡黑色素治疗组与模型组染色结果相比,仍可见呈束状、较密集、排列较有序的TH免疫阳性神经纤维,尤其以30 mg/kg治疗组最为明显。MPTP模型组、10 mg/kg治疗组、30 mg/kg治疗组、100mg/kg治疗组黑质致密部TH免疫阳性神经元数低于对照组(P<0.05);30 mg/kg治疗组黑质致密部TH免疫阳性神经元数高于MPTP模型组(P<0.05)。MPTP模型组、10 mg/kg治疗组、30 mg/kg治疗组、100 mg/kg治疗组纹状体TH水平低于对照组(P<0.05);30 mg/kg治疗组、100 mg/kg治疗组纹状体TH水平高于MPTP模型组(P<0.05)。结论乌鸡黑色素灌胃给药能减缓MPTP诱导的亚急性PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的死亡和纹状体TH免疫阳性神经纤维的丢失,提示口服乌鸡黑色素对于PD模型小鼠有潜在的神经保护作用。

阻断Notch信号通路降低1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的多巴胺能神经元损伤

目的探讨Notch信号通路的缺失对1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤的影响。方法选用5月龄TH-Cre Rbpj基因敲除小鼠及野生型小鼠共48只,腹腔注射MPTP建立帕金森病(PD)模型,通过行为学、免疫组织化学和Western blotting等方法研究阻断Notch信号通路对MPTP诱导的中脑黑质多巴胺能神经元损伤的影响。结果 MPTP处理的Rbpj CKO小鼠运动能力强于MPTP处理的野生型小鼠;Rbpj CKO小鼠黑质致密部神经元数目较野生型小鼠减少;MPTP处理后,野生型小鼠多巴胺能神经元数目明显下降,而Rbpj CKO小鼠多巴胺能神经元数目无明显改变;Western blotting结果显示,MPTP处理后Rbpj CKO小鼠和野生型小鼠Notch-1胞内结构域(NICD-1)的表达均明显增加,且Rbpj CKO小鼠表达量增加更为显著。结论Notch信号通路缺失导致多巴胺能神经元数量减少,阻断Notch信号通路可以降低MPTP诱导的多巴胺能神经元损伤。

1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶对食蟹猴嗅球多巴胺能神经元的影响

目的建立食蟹猴1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病系统性模型,探讨嗅球中多巴胺(DA)及多巴胺/cAMP调节磷蛋白(DARPP32)的表达情况。方法 3只成年健康食蟹猴,静脉注射MPTP,建立帕金森病系统性模型,取出嗅球,切片,免疫组织化学染色DA和DARPP32,摄片并观察DA和DARPP32在食蟹猴嗅球中的分布及表达情况,采用Image Pro-Plus软件,半定量分析模型组和正常组之间DA和DARPP32的表达差异。结果食蟹猴嗅球中DA和DARPP32神经元集中分布于突触小球层,DA神经纤维分布于突触小球层,而DARPP32神经纤维分布于嗅球各层,以突触小球层(GL)和外网状层(EPL)最为密集。MPTP损伤后,与正常对照组比较,DA和DARPP32神经元及神经纤维均减少,以DA神经元及神经纤维减少明显。结论食蟹猴嗅球中DA神经元和神经纤维分布于突触小球层。食蟹猴MPTP帕金森病系统性模型的嗅球DA能神经元和纤维明显减少,可能与帕金森病嗅觉障碍有关。

止颤颗粒联合美多芭对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶引起亚急性帕金森病模型小鼠的药效学研究

目的联合应用止颤颗粒和美多芭,观察止颤颗粒是否具有增强美多芭治疗帕金森病(PD)的作用。方法采用经典的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发小鼠亚急性PD模型,105只小鼠,随机分为7组,每组15只,分别为对照组、模型组、止颤颗粒低剂量(3.5 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒中剂量(9.0 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒高剂量(22 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒(22 g/kg)组、美多芭(50 mg/kg)组。采用转棍法和爬杆法检测各组小鼠的行为学指标,采用HPLC法测定纹状体中多巴胺(DA)水平、免疫组化法检测黑质多巴胺神经元数量。结果止颤颗粒低剂量+美多芭组与美多芭组相比,纹状体内DA的水平、TH阳性神经元数目均明显提高,而且PD模型小鼠行为学障碍改善作用较明显。与模型组相比,止颤颗粒组小鼠的行为学障碍改善作用较明显。结论止颤颗粒可增强美多芭的疗效,具有一定的神经保护作用,止颤颗粒低剂量与美多芭合用可适当减少美多芭的用量。

米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导C57BL/6小鼠行为学损伤的抑制作用研究

目的探讨米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL/6小鼠的行为学损伤的保护作用及其机制。方法通过MPTP腹腔注射C57BL/6小鼠建立帕金森病亚急性模型。40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照(control)组,模型(MPTP)组,治疗(MPTP+Mino)组和米诺环素阴性对照(Mino)组,每组10只。分别采用游泳、爬杆和自主活动计数实验检测小鼠的运动行为能力。并采用HPLC测定中脑多巴胺(DA)、二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果治疗组游泳评分,爬杆评分和自主活动能力明显高于模型组(P<0.01)。且治疗组的中脑DA、DOPAC和HVA的含量明显高于模型组(P<0.01)。结论米诺环素对MPTP所致的小鼠运动功能损伤具有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制MPTP所致的小鼠多巴胺神经元的损伤而起作用。

茶多酚对1-甲基-4-苯基-1-2-3-6-四氢吡啶帕金森病小鼠模型细胞因子的影响

目的:观察和探讨茶多酚对1-甲基-4-苯基-1-2-3-6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病(PD)小鼠模型的细胞因子分泌的影响及茶多酚对PD神经元保护的作用机制。方法:采用C57BL小鼠腹腔注射MPTP复制PD模型,观察茶多酚对PD模型多巴胺神经元的保护作用。结果:PD模型组与茶多酚保护组比较PD模型小鼠爬杆时间明显缩短,黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞显著增多,纹状体内IL-6含量增高,TNF-α因子变化不明显。结论:茶多酚对MPTP-PD模型小鼠的多巴胺神经元具有保护作用,其保护作用机制可能与影响IL-6的分泌有关。

UPLC-MS/MS方法测定盐酸哌替啶原料及注射液中的神经毒性杂质1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶

目的:建立UPLC-MS/MS方法,定量分析盐酸哌替啶原料及注射液中的神经毒性杂质——1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)。方法:采用ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl(2.1 mm×100 mm,1.7 m)色谱柱进行色谱分离,流动相位0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;以三重四极杆作为检测器,采用多反应监测(MRM)扫描方式,选择母离子(m/z 174)→子离子(m/z 44)作为MRM定量离子对。用该方法检测盐酸哌替啶原料药及其注射液中MPTP,MPTP的含量按峰面积以外标法计算。结果:MPTP质量浓度在0.25～201.4 ng·m L^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 6);平均加样回收率(n=9)为102.5%,RSD为1.5%;供试品溶液在24 h内的稳定性良好(RSD=1.6%);MPTP的定量限1.93×10^(-2) ng·mL^(-1),检出限为0.58×10-2 ng·m L^(-1);3批原料药中MPTP含量为175～185 ng·g^(-1),10批注射液中MPTP含量为6.3～33.2ng·mL^(-1)。结论:本方法适用于盐酸哌替啶原料药及注射液中MPTP的含量测定。

1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶诱导小鼠嗅觉障碍的实验研究

目的探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森(PD)病小鼠嗅觉障碍的机制研究。方法应用MPTP制备PD小鼠急性模型,腹腔注射MPTP(15 mg/kg),每2 h注射1次,共4次,对照组注射同等剂量的生理盐水。MPTP注射后5 d,进行嗅觉功能检测,检测双侧嗅球的重量,采用Western Blot检测嗅球炎性因子环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果注射后5 d,两组左侧和右侧嗅球重量比较,差异无统计学意义(P>0.05);MPTP组嗅闻旧垫料时间短于对照组,嗅闻新垫料时间长于对照组[(143.80±9.56)s vs(167.30±9.98)s]、[(156.20±9.56)s vs(131.10±10.97)s],差异有统计学意义(P<0.05);MPTP组嗅球COX-2、iNOS蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MPTP诱导的PD小鼠急性模型能够导致小鼠嗅觉功能障碍,此作用机制可能与炎症反应有关。

皮下和肌内注射MPTP诱导树鼩帕金森病模型的比较研究

【目的】通过运动症状表现和脑组织病理变化指标评价皮下和肌内注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)构建的树鼩帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型,为PD研究提供理想的树鼩模型。【方法】通过皮下和肌内注射MPTP药液2 mg/kg诱导树鼩PD模型,参考非人灵长类和PD患者运动症状量化评估标准,从震颤、姿势、运动、步态及平衡5个方面建立树鼩PD模型行为评分表,观察树鼩PD运动症状;通过酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)免疫组织化学染色观察树鼩中脑形态学的变化;通过qPCR检测分析树鼩PD模型脑组织中TH和α-syn的mRNA表达。【结果】2种注射方法均在第3次注射后出现典型的PD运动症状,第4次注射后PD运动症状最明显,第7次注射后PD运动症状明显减弱,第15次注射时基本消失;TH和α-syn免疫组织化学染色检测发现:皮下和肌内注射模型组黑质均有TH阳性神经纤维数量减少、α-syn异常增加的现象,均能模拟典型的PD病理学表现。皮下和肌内注射模型组脑组织TH mRNA表达量极显著降低,α-syn mRNA表达量极显著升高。【结论】重复皮下和肌内注射2 mg/kg MPTP药液均能诱导树鼩产生较一致的PD典型运动症状和病理变化,均是较好的树鼩PD模型造模方法。

MPTP慢性帕金森病模型小鼠步态的改变

目的 探究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)模型小鼠步态改变。方法 模型组8周龄雄性C57BL/6小鼠给予腹腔注射MPTP(30 mg/kg体质量,每周2次,共4周),对照组注射等量的生理盐水,每组10只。采用动物步态分析系统(CatWalk)分别检测两组注射后1、2、3和4周小鼠步态相关指标。结果 步态分析结果显示,与对照组小鼠相比,模型组的运动持续时间、站立时间、脚步周期显著增加,平均速度、身体速度显著降低,差异均有统计学意义(t=2.209~5.176,P<0.05)。提示小鼠的步态发生改变。结论 MPTP慢性模型可以引起小鼠步态变化。

PD模型小鼠外侧苍白球胶质细胞激活和铁沉积变化

目的 探究慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠黑质(SN)和外侧苍白球(GPe)脑区星形胶质细胞、小胶质细胞数目及铁沉积的变化。方法 将健康雄性8周龄C57BL/6小鼠随机分成对照组和MPTP组,MPTP组小鼠腹腔注射MPTP(18 mg/kg体质量),对照组给予等体积生理盐水,每周2次,持续5周。通过爬杆实验检测小鼠运动功能,组织免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶(TH)神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞数目,普鲁士蓝铁染色(Perl’s-DAB)检测铁沉积。结果 与对照组相比,MPTP组小鼠爬杆转头时间明显增加,差异有统计学意义(t=2.42,P<0.05);SN中TH神经元数目减少,星形胶质细胞和小胶质细胞数目增加,铁阳性细胞数增加,差异均有统计学意义(t=3.82~4.83,P<0.05);GPe中小胶质细胞数目显著增多(t=2.54,P<0.05),星形胶质细胞和铁阳性细胞数目无变化。结论 MPTP诱导的PD小鼠模型建模成功。模型鼠SN胶质细胞激活和铁沉积均增多,而GPe中仅有小胶质细胞激活增多。

MPTP诱导的帕金森病模型小鼠血浆IL-1、IL-6水平的变化及其与脑不对称的关系

目的:建立甲基苯基四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠,检测血浆IL-6和IL-1的水平,并探讨其与脑不对称的关系。方法:利用区分行为不对称的伸爪取食试验,将C57BL/6J小鼠区分为反映脑不对称的左利小鼠和右利小鼠。给小鼠腹腔注射MPTP25mg/kg,每日1次,连续5日,建立小鼠帕金森病模型,对照组注射等体积的生理盐水。最后1次注射MPTP后1、3、14d杀鼠取血,采用ELISA检测各时间点小鼠血浆IL-6和IL-1的水平。结果:正常对照组血浆IL-6水平很低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后14d,血浆IL-6的水平显著升高(P<0.01)。而且第14天右利小鼠血浆IL6的水平高于左利小鼠IL-6水平(P<0.05)。正常对照组小鼠血浆IL-1的水平也较低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后3d,血浆IL-1的水平显著升高(P<0.05),而且左利小鼠的水平明显高于右利小鼠(P<0.01)。结论:IL-6和IL-1可能参与了MPTP诱导的C57BL/6J小鼠帕金森病的发生发展,并与脑不对称有关。

银杏叶提取物对帕金森小鼠海马神经元树突棘的保护作用

目的观察帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠海马角1(hippocampal cornu ammonis 1,CA1)区锥体神经元树突棘密度的变化,同时探讨银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGb)对PD小鼠行为学、中脑黑质多巴胺神经元损伤的保护作用及对海马CA1区锥体神经元树突棘密度的改善作用,以揭示PD学习、记忆等非运动症状的病理机制,同时为EGb等天然药物的神经保护作用和临床应用提供实验依据。方法取雄性C57BL/6小鼠12只,随机分为生理盐水对照组(NC组,n=4)、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)模型组(MPTP组,n=4)和EGb+MPTP组(EGb组,n=4)。采用MPTP腹腔注射建立PD模型,EGb组小鼠在造模的基础上同时施加EGb给药处理。通过游泳实验和悬挂实验观察小鼠行为学改变,免疫组织化学实验分析中脑黑质多巴胺神经元损伤情况,以此验证PD模型是否成功建立。采用高尔基染色方法观察海马CA1区锥体神经元树突棘密度变化,并进行统计分析。结果第1天,NC组游泳实验测试中的得分为(3.000±0)分,悬挂实验测试中的得分为(2.917±0.083)分;MPTP组游泳实验测试中的得分为(1.375±0.226)分,悬挂实验实验测试中的得分为(0.958±0.361)分;在第1天MPTP即造成小鼠行为学障碍,差异有统计学意义(P<0.05)。EGb组游泳实验测试中的得分为(2.500±0.522)分,悬挂实验实验测试中的得分为(2.250±0.305)分,与MPTP组比较,EGb逆转了行为损伤,差异有统计学意义(P<0.05)。MPTP组酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的平均光密度(average optical density,AOD)为(0.486±0.011),NC组为(0.690±0.015),EGb组为(0.596±0.029);MPTP组CA1区神经元树突棘密度为(10.850±1.488)/10µm,NC组为(15.330±0.742)/10µm,MPTP组为(15.750±0.978)/10µm;MPTP还导致中脑黑质多巴胺神经元损伤和海马CA1区锥体神经元树突棘密度降低,差异有统计学意义(P<0.05),而EGb能够改善MPTP造成的DA神经元损伤和树突棘密度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGb对MPTP模型小鼠行为学、中脑黑质多巴胺神经元及海马CA1区锥体神经元树突棘损伤具有保护作用。

帕金森病模型小鼠皮质神经元树突棘变化观察

目的观察帕金森病(PD)小鼠模型初级运动皮质锥体神经元树突棘变化情况并探索其可能机制。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD小鼠模型,行为学实验和免疫组化检测黑质多巴胺神经元损伤情况进行模型鉴定,高尔基染色法观察锥体神经元树突和树突棘变化,免疫组化分析血清诱导激酶(SNK)和树突棘相关的Rap特异性GTPase活化蛋白(SPAR)的变化情况。结果MPTP组小鼠行为学得分、多巴胺阳性神经元平均光密度和树突棘密度低于正常对照组,MPTP组小鼠锥体神经元树突棘长度高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的神经元树突复杂度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MPTP模型小鼠皮质神经元树突棘受损,树突棘的改变可能与SNK和SPAR表达变化有关。

帕金森病体外实验细胞模型的建立

目的:探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子(MPP+)对小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元的毒性作用及其机制。在体外建立帕金森病(PD)实验研究的细胞模型。方法:采用小鼠胚胎(孕14d)中脑进行原代细胞培养,实验分为对照组和不同浓度(0.1、1、10和15μmol.L-1)MPP+药物实验组,应用酪氨酸羟化酶(TH)免疫化学细胞染色方法和Hoechst33342荧光染色对多巴胺能神经元的损伤及凋亡进行测定。结果:对照组中多巴胺能神经元的数量为(875±23)个/孔。在0.1、1、10和15μmol.L-1MPP+实验组,多巴胺能神经元的数量分别为(612±25)、(586±32)、(459±16)和(435±19)个/孔,与对照组比较,MPP+实验组多巴胺能神经元数量均明显降低(P<0.05),多巴胺能神经元突起的数目和长度明显减少。Hoechst33342染色发现,对照组中凋亡细胞数占总细胞数的(5.45±0.29)%,10μmol.L-1MPP+药物治疗组细胞凋亡率为(26.97±1.36)%,显著高于对照组水平(P<0.05)。结论:0.1、1、10和15μmol.L-1MPP+均引起多巴胺能神经元的数量显著减少,随着药物浓度的增加,多巴胺能神经元减少的程度越显著。MPP+引起的多巴胺能神经元的变性死亡可能通过凋亡途径所诱导。

帕金森病MPTP处理小鼠下丘脑和海马IL-1β和IL-6水平变化

目的 探讨MPTP (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahydropyridine,甲基 苯基四氢吡啶 )对小鼠下丘脑和海马内前炎症细胞因子IL 1β和IL 6水平的影响。方法 雄性 8周龄C5 7BL/ 6J小鼠每日接受 2 5mg/kgMPTP腹腔注射连续 5d ,最后一次MPTP注射后第 1天 ,第 3天和第 14天 ,断头杀鼠并迅速取出海马和下丘脑 ,对照组为生理盐水注射组。然后用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测海马和下丘脑内细胞因子IL 1β和IL 6的动态水平 ,结果统计使用方差分析。 结果 MPTP注射诱导了海马和下丘脑IL 6水平的变化以及海马IL 1β的变化 ,下丘脑IL 1β水平未受到MPTP影响。具体表现在海马和下丘脑IL 6在第 1天升高 ,而海马IL 1β水平在MPTP注射后第 3天显著降低。结论 MPTP诱导了下丘脑和海马IL 1β和IL 6等前炎症细胞因子的水平变化 ,提示下丘脑和海马参与了MPTP诱导的脑内炎症反应。

MPTP对小鼠空间学习记忆和脑内强啡肽免疫反应的影响

为了观察1 -甲基- 4 -苯基- 1, 2, 3, 6 四氢吡啶(MPTP)对C57BL/6小鼠空间学习记忆能力和脑内强啡肽(DYN)表达强度的影响,本研究给予小鼠皮下注射MPTP20mg/kg,连续8d,制备Parkinson病(PD)模型。与对照组相比,MPTP处理小鼠爬竿(P<0. 01)和游泳(P<0. 01)分数明显降低。Morris水迷宫实验结果显示:MPTP处理小鼠寻找平台潜伏期明显延长(P<0.01),在目标及对侧象限游泳时间所占百分比分别明显降低(P<0. 01)和增加(P<0. 01)。免疫细胞化学结果表明中脑黑质致密部的酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元数目明显减少(P<0. 01)。同时在前额叶皮层(P<0. 01 )、背侧海马的CA1区(P<0. 05)和齿状回苔状纤维通路(P<0. 05)、背侧尾核(P<0. 01)的DYN免疫反应活性明显增强。本实验结果表明:用MPTP处理诱发的PD小鼠模型伴有空间学习和记忆能力的下降;并提示前额叶皮层、背侧海马的CA1区、齿状回苔状纤维通路和背侧尾核内DYN表达的增多可能与MPTP小鼠空间学习和记忆能力下降有关。