甲基转移酶样蛋白14对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的 探讨过表达和敲低甲基转移酶样蛋白14(METTL14)对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用。方法 取人急性早幼粒白血病细胞NB4进行培养,分为过表达对照组、过表达组、干扰对照组、干扰组,过表达对照组及过表达组分别转染空白质粒和METTL14质粒,干扰对照组和干扰组分别转染si-NC和si-METTL14质粒。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Dot Blotting法检测细胞N-6甲基腺苷(m6A)修饰水平。结果 与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,NB4细胞m6A修饰水平提高(P均<0.05);与干扰对照组相比,干扰组细胞增殖率降低、细胞凋亡率增加、细胞迁移数、细胞侵袭数降低,NB4细胞m6A修饰水平降低(P均<0.05)。结论 METTL14可促进NB4细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与提高m6A修饰水平有关。

脂多糖诱导人和小鼠肠上皮细胞炎症并上调细胞甲基转移酶样蛋白3(METTL3)和METTL14表达

目的探讨N_(6)-甲基腺苷(m^(6)A)修饰在HIEC-6人肠上皮细胞与MODE-K小鼠肠上皮细胞炎性状态下的变化。方法采用不同剂量的脂多糖(LPS)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞10 h或相同剂量LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α分别刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞(0、3、6、12、24)h。实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达;实时定量PCR和Western blot法分别检测m^(6)A修饰相关分子甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、METTL14、METTL16、Wilms瘤1相关蛋白(WTAP)、烷基化修复同源蛋白5(ALKBH5)、脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTHDC2的mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,HIEC-6细胞与MODE-K细胞在LPS诱导的时间依赖与剂量依赖模型中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平增高,并同步上调METTL3和METTL14 mRNA与蛋白水平。结论LPS可以诱导肠上皮细胞出现炎症反应,并上调肠上皮细胞中METTL3和METTL14的表达。

甲基转移酶样蛋白3/14基因甲基化水平对汉族儿童乙肝疫苗应答水平的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白(METTL)3/14基因甲基化水平对汉族儿童乙肝疫苗低/无应答现象的影响。方法根据接种乙肝疫苗后的应答水平,将263名汉族儿童分为低/无应答组(乙肝疫苗低应答和无应答,HBsAb<100 mIU/mL)104例和高/正常应答组(乙肝疫苗正常应答和高应答,HBsAb≥100 mIU/mL)159例。检测两组儿童METTL3/14基因的甲基化水平,采用非条件Logistic回归模型分析METTL3/14基因的甲基化水平与汉族儿童接种乙肝疫苗后低/无应答现象的相关性。结果低/无应答组METTL3_3基因31位点和66位点的甲基化水平均高于高/正常应答组(均P<0.05);而两组的METTL3_1、METTL3_2和METTL14基因各CpG位点的甲基化水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。非条件Logistic回归分析结果显示,METTL3_1基因28位点,以及METTL3_3基因31、66、141位点的甲基化水平升高是汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的危险因素,METTL3_2基因200位点的甲基化水平升高是汉族儿童乙肝疫苗低/无应答的保护因素(均P<0.05)。结论METTL3_1基因28位点和METTL3_3基因31、66、141位点的甲基化水平升高可能增加汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的风险,而METTL3_2基因200位点的甲基化水平升高可能降低汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的风险。

METTL14在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的:通过检测RNA甲基转移酶样14(METTL14)在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达水平,探讨METTL14表达在初诊AML患者中的临床与预后意义。方法:收集100例初诊AML患者骨髓标本作为AML组,60例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓标本作为对照组,并收集AML患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测METTL14在两组患者骨髓中的表达水平,并分析AML患者的METTL14表达水平高低与其临床病理特征及预后的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析METTL14对AML患者总体生存时间(OS)的影响。通过Cox风险回归模型分析影响AML患者的预后因素。结果:与对照组相比,METTL14在AML患者中表达明显升高(P<0.05)。与低表达组比较,METTL14高表达组患者表现出高龄、高骨髓细胞数、疗效差及预后不良,差异具有统计学意义(P<0.05)。METTL14高表达组的OS较低表达组显著缩短(P<0.05)。METTL14高表达是影响AML预后的独立危险因素。结论:METTL14在AML患者中明显高表达,与较差的临床病理特征及不良预后相关,可作为判断AML患者预后的指标和潜在的治疗靶点。

甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过NF-κB信号通路促进小鼠巨噬细胞活化和炎症反应

目的研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m^6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激0、2、4、6 h,检测METTL3的表达情况。设计合成的针对小鼠METTL3的小干扰RNA(siRNA)敲低METTL3的表达,通过实时定量PCR和Western blot法检测干扰效率;利用siRNA下调METTL3表达48 h后,以1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞,采用实时定量PCR检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12、IL-1β的mRNA水平,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路中p65和磷酸化p65蛋白水平。结果LPS刺激后RAW264.7细胞METTL3的表达上调,设计合成的METTL3 siRNA能有效敲低METTL3的水平。敲低METTL3后,巨噬细胞LPS刺激诱导表达的IL-6、IL-12、TNF-α和IL-1β显著降低,同时伴有NF-κВ信号通路p65蛋白的磷酸化水平降低。结论METTL3通过激活NF-κВ信号通路促进LPS刺激的巨噬细胞活化和炎症反应。

METTL14介导ERα的m6A修饰调控子宫内膜癌转移的机制研究

背景与目的:甲基转移酶样因子14(methyltransferase-like factor 14,METTL14)失调引起的异常N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰在多种癌症的进展中发挥重要作用,目前尚不清楚其是否参与子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)的进展。本研究旨在探讨METTL14失调引起的异常m6A修饰在EC侵袭和转移中的作用。方法:收集96例2017—2021年在青海省人民医院接受治疗性手术的EC患者。从冷冻组织中分离RNA(70对)或蛋白质(10对),用于实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)或免疫印迹分析,以评估METTL14在EC中的表达。评估METTL14的表达及其与EC临床病理学特征的相关性。在体外和体内测定METTL14在EC中的生物学效应。将甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)与RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)相结合,并在m6A斑点印迹后,采用MeRIP-RTFQ-PCR、RIP-RTFQ-PCR或双荧光素酶报告基因分析来筛选和验证METTL14的候选靶标。结果:与匹配的相邻组织相比,EC中METTL14的mRNA表达和蛋白质水平显著下调。与METTL14高表达组相比,METTL14低表达组国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、浸入深度、淋巴管血管侵犯、淋巴结转移及肿瘤转移例数显著增加(P<0.05)。在功能上,METTL14在体外和体内抑制EC细胞的增殖和侵袭能力。从机制上讲,METTL14介导的m6A去甲基化导致雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)转录后抑制。此外,与METTL14相比,ERα诱导肿瘤的致癌行为。结论:METTL14通过m6A依赖性方式在EC细胞中减弱ERα的表达,进而抑制肿瘤转移和侵袭。

甲基转移酶样蛋白家族的分子作用机制及在胃癌中的研究进展

甲基转移酶样蛋白(methyltransferase-like proteins,METTL)是一个大蛋白家族的一部分,其特征是存在s-腺苷甲硫氨酸(s-adenosylmethionine,SAM)的结合域,SAM是甲基化反应的共同底物.尽管这个蛋白家族的成员被显示或预测为RNA、DNA或蛋白质的甲基转移酶,但大多数甲基转移酶的特征仍然很差,识别这些潜在酶起作用的复合物有助于了解它们的功能和底物特异性.METTL蛋白家族与胃癌(gastric cancer,GC)的发生发展有密切作用,明确其与GC的关系与GC的诊断治疗及预后有着十分重要的作用.本研究是对METTL蛋白家族的作用机制及与GC的关系一次系统和全面的综述,以期为进一步研究这些潜在的新型甲基转移酶和GC的诊治提供重要的资源.

Mettl14介导的m6A修饰对改善心肌梗死的分子机制

目的探索甲基转移酶样14(METTL14)介导的N6-甲基腺苷(m6A)修饰在心肌梗死(MI)中的生物学作用。方法将小鼠随机分为4组,每组10只:Sham+AAV9-NC组、Sham+AAV9-METTL14组、MI+AAV9-NC组和MI+AAV9-METTL14组。各组小鼠分别在MI诱导前1周将AAV9-METTL14或AAV9-NC通过尾静脉注射到小鼠体内。通过经胸超声心动图无创测量心脏功能,并采用免疫荧光测定小鼠微血管损伤和内皮线粒体功能障碍。从小鼠心肌组织中分离CMECs,对细胞进行去氧葡萄糖(OGD)处理。结果METTL14在MI小鼠心脏组织以及OGD处理的CMECs中下调。与Sham+AAV9-NC组小鼠相比,MI+AAV9-NC组小鼠中VE-cadherin表达显著下调(P<0.05),线粒体ROS水平显著增加(P<0.05)。MI+AAV9-METTL14抑制了这些变化,并增强了小鼠的心脏功能。与NC组相比,在OGD组CMECs细胞中观察到线粒体ROS水平显著增加(P<0.05)。CMECs细胞中METTL14敲低加剧了ROS水平(P<0.05),当加入USP48过表达质粒则逆转了这些变化(P<0.05)。结论METTL14在MI中低表达,并通过增加CMECs细胞USP48的m6A修饰水平以降低其稳定性,从而介导CMECs细胞线粒体功能障碍。

METTL14基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构和骨密度及氧化应激的影响

目的 研究人甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构、骨密度及氧化应激的影响。方法 12只野生型小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只。对照组小鼠切除卵巢附近脂肪组织;模型组小鼠切除双侧卵巢构建骨质疏松小鼠模型;另取6只切除双侧卵巢的METTL14基因敲除小鼠作为敲低组。术后8周,使用micro-CT扫描仪测量小鼠右股骨骨密度和骨微结构相关指标,使用ELISA检测小鼠血清中PINP、CTX、MDA和SOD水平。结果 模型组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,敲低组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于对照组,敲低组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 METTL14基因敲除可抑制骨质疏松小鼠骨密度,破坏骨微结构,并促进氧化应激。

METTL14通过促进N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移

目的 探究甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因对宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响及其可能的分子机制。方法使用基因表达数据集(GEO)数据库和宫颈癌组织芯片分析宫颈癌组织及癌旁组织的METTL14和Myc表达水平。采用RNA干扰技术(RNAi)沉默HeLa和SiHa宫颈癌细胞中METTL14的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)验证沉默效果。敲低METTL14后,CCK-8实验、集落形成实验、 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞增殖和集落形成能力,Transwell^(TM)实验检测细胞迁移能力。Western blot法测定敲低METTL14后METTL14和Myc的蛋白表达水平,甲基化RNA免疫共沉淀后实时定量PCR(MeRIP-qPCR)检测各组HeLa细胞中N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达水平。结果 GEO数据库和宫颈癌组织芯片染色结果显示,METTL14和Myc在宫颈癌组织中的表达显著高于宫颈癌癌旁组织,且METTL14高表达的宫颈癌患者生存期更短。沉默METTL14后能明显抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的细胞活力、增殖和迁移能力,其作用机制可能与METTL14促进m^(6)A Myc的表达有关。结论 METTL14通过促进m^(6)A Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移。

SARS-CoV-2非结构蛋白NSP14的生物信息学分析

目的:通过生物信息学手段预测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中非结构蛋白NSP14的性质特征。方法:以SARS-CoV-2的NSP14氨基酸序列为研究对象,通过Blastp与SARS-CoV的NSP14进行比对,并利用ProtParam、ProtScale、PredictProtein和SWISS-MODEL等生物信息学软件工具对NSP14的理化性质、结构和活性区域等进行预测。结果:SARS-CoV-2的NSP14由527个氨基酸残基构成,是一种可溶性亲水蛋白,与SARS-CoV中NSP14氨基酸序列的一致率达到95%。NSP14二级结构中无规则卷曲含量最高,该蛋白质包含了N-糖基化位点、cAMP或cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-豆蔻酰化位点等5个保守基序。NSP14同时具备N端核糖核酸外切酶和N7-甲基转移酶2个结构域,其活性区域的总面积和体积分别为1469.712?~2和1708.967?~3。结论:基于SARS-CoV-2中NSP14的氨基酸序列,运用生物信息学相关软件分析和预测了NSP14蛋白的性质和结构,为新型冠状病毒疫苗研制和药物筛选提供理论依据。

axin和METTL14在胃癌组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系

目的探讨轴抑制剂(axin)和甲基转移酶样蛋白14(METTL14)在胃癌组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系。方法选取79例胃癌患者的胃癌组织和正常胃黏膜组织,另选取31例胃癌癌前病变组织。采用免疫组织化学染色法检测3种组织中axin和METTL14蛋白的表达情况,分析axin与METTL14蛋白表达的相关性及不同临床特征胃癌患者胃癌组织中axin和METTL14蛋白的表达情况。结果正常胃黏膜组织中axin蛋白的阳性表达率为75.9%(60/79),高于胃癌组织的51.9%(41/79)和癌前病变组织的35.5%(11/31),差异均有统计学意义(P﹤0.05);胃癌组织和癌前病变组织中axin蛋白的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。正常胃黏膜组织中METTL14蛋白的阳性表达率为83.5%(66/79),高于胃癌组织的35.4%(28/79)和癌前病变组织的61.3%(19/31),差异均有统计学意义(P﹤0.05);胃癌组织中METTL14蛋白的阳性表达率低于癌前病变组织,差异有统计学意义(P﹤0.05)。临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、中+高分化的胃癌患者胃癌组织中axin和METTL14蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。79例胃癌组织中,METTL14与axin共阳性表达24例,共阴性表达14例,且METTL14和axin表达呈正相关(r=0.569,P﹤0.01)。31例癌前病变组织中,METTL14与axin共阳性表达9例,共阴性表达10例,且METTL14和axin表达呈正相关(r=0.372,P﹤0.01)。结论胃癌组织和癌前病变组织中axin和METTL14蛋白阳性表达率均低于正常胃黏膜组织,且两者的表达呈正相关,提示两者对胃癌的发生均具有抑制作用,联合检测可以作为胃癌诊断和治疗的依据。

甲基转移酶样蛋白14与肿瘤

N^(6)-甲基腺嘌呤(m6A)修饰是最常见的RNA表观遗传修饰,其在恶性肿瘤发生发展过程中扮演重要角色。甲基转移酶样蛋白14(METTL14)是催化m6A修饰的主要甲基化酶之一,参与调节RNA剪接、翻译及降解等生物学进程。最新研究表明METTL14不仅通过多种分子机制调控肿瘤生长、侵袭和转移,而且其表达水平与肿瘤患者预后及抗肿瘤治疗效果密切相关。深入了解METTL14在乳腺癌、消化系统肿瘤及泌尿系统肿瘤中的作用机制,有助于为基于m6A修饰的肿瘤防治提供新的临床标志物及药物治疗靶点。

甲基转移酶样蛋白14介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1对胆管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(METTL14)介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1(lnc EIF3J-AS1)异常表达对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法收集2017年9月至2018年12月间海军军医大学第一附属医院行手术切除并经病理学确诊的10例胆管癌组织及其相应癌旁正常组织,采用荧光定量PCR法检测胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1的表达,采用蛋白质免疫印迹法检测METTL14的蛋白表达。选取胆管癌细胞株HUCCT1和RBE,分为对照组和METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组,对照组分别转染相应的阴性对照的慢病毒,METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组分别转染干扰METTL14或lnc EIF3J-AS1表达的慢病毒。采用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白质免疫印迹法检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)和AKT蛋白表达。结果胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1表达量均显著高于癌旁正常组织(0.075±0.012比0.031±0.006,0.140±0.032比0.064±0.012),且METTL14 mRNA与lnc EIF3J-AS1表达水平呈正相关(r=0.883,P=0.0007)。胆管癌组织METTL14蛋白表达量高于癌旁正常组织(0.354±0.131比0.187±0.183)。与对照组相比,胆管癌细胞株HUCCT1和RBE METTL14敲减组lnc EIF3J-AS1表达水平明显下降(0.217±0.020比1.000±0.052,0.149±0.066比1.000±0.045)。HUCCT1细胞和RBE细胞lnc EIF3J-AS1敲减组迁移和侵袭能力明显下降(5.00±0.58比23.33±0.33,20.33±0.67比70.67±0.33;12.00±0.58比25.00±2.52,22.33±0.89比43.67±0.33),且EGFR与p-AKT/AKT蛋白表达水平也明显下降(0.109±0.015比1.000±0.018,0.226±0.036比1.000±0.051;0.118±0.052比1.000±0.069,0.132±0.098比1.000±0.023)。以上差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论METTL14介导胆管癌中lnc EIF3J-AS1异常表达可促进肿瘤细胞迁移和侵袭。

m6A甲基转移酶METTL3、METTL14在慢性乙型肝炎患者肝组织中表达及与病情的关系

目的检测N6-腺苷酸甲基化(m6A)甲基转移酶样因子3(METTL3)、甲基转移酶样因子14(METTL14)在慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中的表达情况,探讨METTL3、METTL14与CHB患者肝炎与肝纤维化的相关性。方法选择2018年7月-2020年8月在信阳市中心医院治疗并完成活检的101例CHB患者为CHB组,根据肝组织活检病理结果进行肝脏炎症分期(G0~1、G2、G3)和肝脏纤维化分期(S0~1、S2、S3、S4),选择同期35例因肝脾外伤的患者正常肝组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组肝脏组织中METTL3、METTL14表达水平,Spearman法分析CHB患者肝脏组织中METTL3、METTL14表达与CHB患者肝炎程度、肝纤维化程度的相关性。结果与对照组比较,CHB组患者肝组织METTL3、METTL14表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着肝纤维化程度加重,肝纤维化分级S0~1期、S2期、S3期、S4期患者肝组织中METTL3、METTL14表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着肝炎程度加重,肝炎G0~1期、G2期、G3期患者肝组织中METTL3、METTL14表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,CHB患者肝脏组织中METTL3、METTL14表达均与CHB患者肝炎程度、肝纤维化程度呈负相关(P<0.05)。结论在CHB患者肝组织中METTL3、METTL14低表达,二者表达与患者肝纤维化和肝炎程度有关,可能作为预测CHB患者病情严重程度的标志物。

基于METTL14/ERα信号探讨m6A调控子宫内膜癌转移的机制研究

目的探讨甲基转移酶样因子14(METTL14)失调引起的异常N6-甲基腺苷(m6A)修饰在子宫内膜癌(EC)侵袭和转移中的作用。方法收集96名2017—2021年在武汉科技大学附属孝感医院接受治疗性手术的EC患者。从冷冻组织中分离RNA(70对)或蛋白质(10对),用于定量实时PCR(qPCR)或免疫印迹分析,以评估METTL14在EC中的表达。评估METTL14的表达及其与EC临床病理学特征的相关性。在体外和体内测定了METTL14在EC中的生物学效应。将甲基化RNA免疫沉淀测序(MeRIP-seq)与RNA测序(RNA-seq)相结合,并在m6A斑点印迹之后,采用MeRIP-qPCR、RIP-qPCR或双荧光素酶报告基因分析来筛选和验证METTL14的候选靶标。结果与匹配的相邻组织相比,EC中METTL14的mRNA和蛋白质水平显著下调。与METTL14高表达组相比,METTL14低表达组FIGO分期、浸入深度、淋巴血管侵犯、淋巴结转移、肿瘤转移例数显著增加(P<0.05)。在功能上,METTL14在体外和体内抑制EC细胞的增殖和侵袭能力。从机制上讲,METTL14介导的m6A去甲基化导致含有雌激素受体α(ERα)的转录后抑制。此外,与METTL14相比,ERα诱导肿瘤的致癌行为。结论METTL14通过m6A依赖性方式在EC细胞中减弱ERα的表达,进而抑制肿瘤转移和侵袭。

N6-甲基腺苷RNA甲基化修饰在肾纤维化中的研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)是真核细胞最丰富的转录后修饰类型。多种类型的RNA,如信使RNA(mRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、微小RNA(miRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)等,均可发生m6A甲基化修饰。近期研究发现,异常m6A甲基化修饰是肾脏疾病中肾纤维化的“导火索”,可通过不同的靶点、信号通路等对肾间质纤维化产生促进或抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。本文对m6A甲基化修饰在肾纤维化中的研究进展进行综述,旨在为临床新药研发提供新思路。

mRNA N6⁃甲基腺苷甲基化在帕金森病患者血液中的变化

目的探究帕金森病(PD)患者血液中mRNAN6⁃甲基腺苷(m6A)甲基化水平以及相关的甲基转移酶[甲基转移酶样蛋白14(METTL14)]和去甲基化酶[脂肪与肥胖相关基因蛋白(FTO)、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)]的变化情况。方法连续性收集2020年1月至2021年6月在该院神经内科门诊及住院就诊的PD患者(PD组,50例)以及健康对照人群(对照组,50例)。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹(WB)、实时定量PCR(QPCR)、m6A甲基化定量等实验,检测两组血浆及外周单个核细胞(PBMC)的METTL14、FTO、ALKBH5及m6A水平。结果与对照组比较,血浆中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5蛋白水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,外周单个核细胞(PBMC)中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5蛋白条带灰度值较低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,PBMC的mRNA中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,PBMC的mRNA中PD组的m6A水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在PD患者血浆和PBMC中MET⁃TL14、FTO、ALKBH5和m6A甲基化水平均有不同程度的下降,表明mRNAm6A甲基化与PD的发生发展存在一定的联系。

METTL14调控CCNL2对乳腺癌细胞活性与侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase like 14,METTL14)通过m6A修饰的方式调控细胞周期蛋白L2(cyclin L2,CCNL2)对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞增殖与侵袭的影响。方法收集2018年8月至2020年2月烟台山医院乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)定量与qRT-PCR检测组织中m6A、METTL14、CCNL2的表达水平。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR、Western blot验证METTL14与CCNL2的调控关系。RIP实验验证YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)与CCNL2的调控关系。MTT法检测细胞活性,Transwell检测细胞侵袭能力。结果与正常细胞(0.24±0.02)及组织(0.18±0.02)相比,乳腺癌细胞MCF-7(0.47±0.03,t=11.05,P<0.001)和HS-578T细胞(0.41±0.03,t=8.17,P=0.001)及乳腺癌组织(0.39±0.02,t=12.86,P<0.001)中m6A水平升高。与正常组织(1.00±0.26)、(0.84±0.07)相比,乳腺癌组织中METTL14mRNA(1.57±0.28,t=13.50,P<0.001)与蛋白水平(1.66±0.11,t=10.89,P<0.001)显著升高。与对照组(100.00±10.11)、(1.00±0.12)相比,sh-METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(54.15±6.21,t=6.69,P=0.003)与活性(0.64±0.06,t=4.65,P=0.010)均减弱。与对照组(100.00±11.05)、(1.00±0.13)相比,过表达METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(175.31±13.45,t=7.49,P=0.002)与活性(2.16±0.16,t=9.75,P=0.001)均增强;m6A抑制剂处理后,METTL14对细胞侵袭(137.41±12.64,t=3.56,P=0.024)和活性(1.64±0.15,t=5.59,P=0.005)的作用均被部分反转。与正常组织相比,CCNL2在乳腺癌组织中表达下调,CCNL2与METTL14的相互作用关系被证实,与对照组(1.00±0.10)(0.64±0.05)相比,敲减METTL14可使CCNL2 mRNA(1.67±0.13,t=7.08,P=0.002)与蛋白(1.09±0.09,t=7.57,P=0.002)表达上调。METTL14敲除通过YTHDF2依赖的途径增强CCNL2 mRNA的稳定性,较sh-METTL14组(50.47±5.16)、(0.52±0.05)相比,sh-METTL14+sh-CCNL2组乳腺癌细胞侵袭能力(71.69±6.41,t=4.47,P=0.011)与活性(0.64±0.05,t=2.94,P=0.042)均有所提高。结论METTL14通过m6A修饰的方式抑制CCNL2的表达进而提高乳腺癌细胞侵袭与活性。

牦牛METTL14 CDS区克隆及表达谱分析

旨在克隆牦牛甲基转移酶样蛋白(methyltransferase-like protein 14,METTL14)基因的编码区(CDS)序列,探究其分子特征及时空表达规律。以大通牦牛脂肪组织cDNA为模板,通过克隆获得METTL14的完整CDS区序列,用生物学软件进行基因序列和蛋白质结构分析,利用qRT-PCR检测METTL14的时空表达规律。结果显示,大通牦牛METTL14的CDS区全长1371 bp,共编码456个氨基酸;METTL14亲缘关系与野牦牛最近,与鸡和小鼠最远;氨基酸等电点是5.89,不稳定系数(Ⅱ)为52.02,GRAVY=-0.878,METTL14总体表现出强的亲水性;METTL14有1个大小为177 aa的MT-A70酶保守结构域,无信号肽与跨膜结构域;亚细胞定位与核定位预测分析都显示METTL14位于细胞核(69.60%)。推测METTL14共有40个潜在的磷酸化位点。METTL14蛋白高级结构由无规则卷曲(51.10%)、α-螺旋(33.11%)、延伸链(11.84%)和β-转角(3.95%)相互连接而成。METTL14与甲基化修饰相关蛋白相互作用,主要参与RNA甲基化修饰过程。qRT-PCR结果显示,METTL14基因在牦牛7个组织中均有表达,相比脂肪组织中的表达,背最长肌中表达量最高(P<0.001);在牦牛生长发育的不同阶段,前体脂肪细胞中METTL14的表达量也有差异,30月龄>18月龄(P<0.05);进一步研究发现,在牦牛前体脂肪细胞分化过程中,METTL14表达量在0,4,8,12 d呈现上升的趋势,在4,8 d的表达量显著高于0 d(P<0.05),12 d的表达量极显著高于0 d(P<0.01)。结果表明,大通牦牛METTL14是一个具有MT-A70酶保守结构域的定位在细胞核上的酸性不稳定水溶性蛋白,在牦牛脂肪沉积过程中发挥着重要的作用。本试验进一步为METTL14在牦牛脂肪沉积中的调控机制研究奠定理论基础。