甲基转移酶样蛋白14对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的 探讨过表达和敲低甲基转移酶样蛋白14(METTL14)对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用。方法 取人急性早幼粒白血病细胞NB4进行培养,分为过表达对照组、过表达组、干扰对照组、干扰组,过表达对照组及过表达组分别转染空白质粒和METTL14质粒,干扰对照组和干扰组分别转染si-NC和si-METTL14质粒。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Dot Blotting法检测细胞N-6甲基腺苷(m6A)修饰水平。结果 与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,NB4细胞m6A修饰水平提高(P均<0.05);与干扰对照组相比,干扰组细胞增殖率降低、细胞凋亡率增加、细胞迁移数、细胞侵袭数降低,NB4细胞m6A修饰水平降低(P均<0.05)。结论 METTL14可促进NB4细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与提高m6A修饰水平有关。

m^(6)A甲基转移酶样蛋白14在抑郁样小鼠海马中的表达

目的研究m^(6)A甲基转移酶样蛋白14(METTL14)在抑郁样小鼠海马中的表达变化和作用。方法1)将C57BL/6J小鼠分为对照组和抑郁模型组。单笼单只饲养并加以不定期慢性不可预知刺激(CUMS),制备抑郁模型时间为4个月。2)用强迫游泳实验(FST)、蔗糖偏好实验(SPT)、悬尾实验(TST)测试模型小鼠的抑郁样行为。3)行为学检测完成后,取两组小鼠的海马组织,用qRT-PCR、Western blot、Dot blot、免疫组化及免疫荧光等技术检测小鼠海马组织m^(6)A修饰及甲基化转移酶样蛋白METTL14的表达。结果1)模型组小鼠出现明显的抑郁样行为;2)模型组小鼠海马组织中METTL14表达量在mRNA水平升高并伴随m^(6)A修饰水平升高;3)模型组小鼠海马CA1、CA3及DG区METTL14蛋白表达量升高且存在神经元损伤现象。结论抑郁样小鼠海马区m^(6)A甲基化功能活跃。

甲基转移酶样蛋白14在恶性肿瘤中作用及机制的研究进展

RNA修饰在许多生物学功能中起重要作用。其中,N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)是最丰富的RNA修饰。m^(6)A在许多物种中高度保守,调节RNA代谢、细胞分化、细胞昼夜节律和细胞周期,并与肿瘤进展有关。甲基转移酶样蛋白(METTL)14是m^(6)A甲基转移酶复合物中的关键成分,主要作为RNA结合支架以提高METTL3的催化能力。目前,METTL14在各种恶性肿瘤中的分子机制尚未得到充分研究。因此,METTL14作为癌症诊断新生物标志物具有潜在临床应用前景。深入研究METTL14在恶性肿瘤肿瘤中的生物学功能,可为恶性肿瘤的靶向治疗以及改善患者预后提供新思路。

甲基转移酶样蛋白3/14基因甲基化水平对汉族儿童乙肝疫苗应答水平的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白(METTL)3/14基因甲基化水平对汉族儿童乙肝疫苗低/无应答现象的影响。方法根据接种乙肝疫苗后的应答水平,将263名汉族儿童分为低/无应答组(乙肝疫苗低应答和无应答,HBsAb<100 mIU/mL)104例和高/正常应答组(乙肝疫苗正常应答和高应答,HBsAb≥100 mIU/mL)159例。检测两组儿童METTL3/14基因的甲基化水平,采用非条件Logistic回归模型分析METTL3/14基因的甲基化水平与汉族儿童接种乙肝疫苗后低/无应答现象的相关性。结果低/无应答组METTL3_3基因31位点和66位点的甲基化水平均高于高/正常应答组(均P<0.05);而两组的METTL3_1、METTL3_2和METTL14基因各CpG位点的甲基化水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。非条件Logistic回归分析结果显示,METTL3_1基因28位点,以及METTL3_3基因31、66、141位点的甲基化水平升高是汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的危险因素,METTL3_2基因200位点的甲基化水平升高是汉族儿童乙肝疫苗低/无应答的保护因素(均P<0.05)。结论METTL3_1基因28位点和METTL3_3基因31、66、141位点的甲基化水平升高可能增加汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的风险,而METTL3_2基因200位点的甲基化水平升高可能降低汉族儿童发生乙肝疫苗低/无应答的风险。

METTL14在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的:通过检测RNA甲基转移酶样14(METTL14)在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达水平,探讨METTL14表达在初诊AML患者中的临床与预后意义。方法:收集100例初诊AML患者骨髓标本作为AML组,60例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓标本作为对照组,并收集AML患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测METTL14在两组患者骨髓中的表达水平,并分析AML患者的METTL14表达水平高低与其临床病理特征及预后的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析METTL14对AML患者总体生存时间(OS)的影响。通过Cox风险回归模型分析影响AML患者的预后因素。结果:与对照组相比,METTL14在AML患者中表达明显升高(P<0.05)。与低表达组比较,METTL14高表达组患者表现出高龄、高骨髓细胞数、疗效差及预后不良,差异具有统计学意义(P<0.05)。METTL14高表达组的OS较低表达组显著缩短(P<0.05)。METTL14高表达是影响AML预后的独立危险因素。结论:METTL14在AML患者中明显高表达,与较差的临床病理特征及不良预后相关,可作为判断AML患者预后的指标和潜在的治疗靶点。

宫颈癌组织中LRRC8A、METTL14的表达及临床预后价值

目的分析宫颈癌(CC)组织中富含亮氨酸重复蛋白8A(LRRC8A)、甲基转移酶样蛋白14(METTL14)的表达,探讨两者的临床意义。方法回顾性选取2019年2月—2021年3月榆林市第一医院妇产科诊治CC术后患者138例的临床资料和病理组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测CC组织中LRRC8A、METTL14 mRNA及蛋白表达;绘制K-M生存曲线,用Log-Rank检验比较曲线的差异;Cox回归模型筛选CC预后影响因素。结果CC癌组织中LRRC8A、METTL14 mRNA表达量高于癌旁组织(t/P=44.520/<0.001,42.352/<0.001),癌组织LRRC8A、METTL14蛋白阳性率高于癌旁组织(χ^(2)/P=124.062/<0.001,107.574/<0.001);FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、淋巴结转移患者癌组织LRRC8A、METTL14蛋白阳性率明显高于ⅠA~ⅠB1期及无淋巴结转移患者(LRRC8A:χ^(2)/P=6.338/0.012、4.886/0.027;METTL14:χ^(2)/P=7.547/0.006、10.294/0.001);LRRC8A阳性和阴性组3年总生存率分别为71.43%(70/98)、90.00%(36/40);METTL14阳性和阴性组3年总生存率分别为70.65%(65/92)、89.13%(41/46)。Log-Rank检验结果显示,LRRC8A阳性组、METTL14阳性组3年总生存率分别低于LRRC8A阴性组、METTL14阴性组(Log-Rankχ^(2)=5.065、7.690,P=0.023、0.006);Cox回归分析结果表明,LRRC8A阳性、METTL14阳性、FIGO分期ⅠB2~ⅡA期是影响CC患者生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.679(1.301~2.166),1.429(1.156~1.766),1.713(1.187~2.471)]。结论CC组织中LRRC8A、METTL14表达升高,与CC患者FIGO分期、淋巴结转移有关,是评估CC患者不良生存预后的标志物。

METTL14介导ERα的m6A修饰调控子宫内膜癌转移的机制研究

背景与目的:甲基转移酶样因子14(methyltransferase-like factor 14,METTL14)失调引起的异常N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰在多种癌症的进展中发挥重要作用,目前尚不清楚其是否参与子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)的进展。本研究旨在探讨METTL14失调引起的异常m6A修饰在EC侵袭和转移中的作用。方法:收集96例2017—2021年在青海省人民医院接受治疗性手术的EC患者。从冷冻组织中分离RNA(70对)或蛋白质(10对),用于实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)或免疫印迹分析,以评估METTL14在EC中的表达。评估METTL14的表达及其与EC临床病理学特征的相关性。在体外和体内测定METTL14在EC中的生物学效应。将甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)与RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)相结合,并在m6A斑点印迹后,采用MeRIP-RTFQ-PCR、RIP-RTFQ-PCR或双荧光素酶报告基因分析来筛选和验证METTL14的候选靶标。结果:与匹配的相邻组织相比,EC中METTL14的mRNA表达和蛋白质水平显著下调。与METTL14高表达组相比,METTL14低表达组国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、浸入深度、淋巴管血管侵犯、淋巴结转移及肿瘤转移例数显著增加(P<0.05)。在功能上,METTL14在体外和体内抑制EC细胞的增殖和侵袭能力。从机制上讲,METTL14介导的m6A去甲基化导致雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)转录后抑制。此外,与METTL14相比,ERα诱导肿瘤的致癌行为。结论:METTL14通过m6A依赖性方式在EC细胞中减弱ERα的表达,进而抑制肿瘤转移和侵袭。

Mettl14介导的m6A修饰对改善心肌梗死的分子机制

目的探索甲基转移酶样14(METTL14)介导的N6-甲基腺苷(m6A)修饰在心肌梗死(MI)中的生物学作用。方法将小鼠随机分为4组,每组10只:Sham+AAV9-NC组、Sham+AAV9-METTL14组、MI+AAV9-NC组和MI+AAV9-METTL14组。各组小鼠分别在MI诱导前1周将AAV9-METTL14或AAV9-NC通过尾静脉注射到小鼠体内。通过经胸超声心动图无创测量心脏功能,并采用免疫荧光测定小鼠微血管损伤和内皮线粒体功能障碍。从小鼠心肌组织中分离CMECs,对细胞进行去氧葡萄糖(OGD)处理。结果METTL14在MI小鼠心脏组织以及OGD处理的CMECs中下调。与Sham+AAV9-NC组小鼠相比,MI+AAV9-NC组小鼠中VE-cadherin表达显著下调(P<0.05),线粒体ROS水平显著增加(P<0.05)。MI+AAV9-METTL14抑制了这些变化,并增强了小鼠的心脏功能。与NC组相比,在OGD组CMECs细胞中观察到线粒体ROS水平显著增加(P<0.05)。CMECs细胞中METTL14敲低加剧了ROS水平(P<0.05),当加入USP48过表达质粒则逆转了这些变化(P<0.05)。结论METTL14在MI中低表达,并通过增加CMECs细胞USP48的m6A修饰水平以降低其稳定性,从而介导CMECs细胞线粒体功能障碍。

N6-甲基腺苷RNA甲基化修饰在肾纤维化中的研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)是真核细胞最丰富的转录后修饰类型。多种类型的RNA,如信使RNA(mRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、微小RNA(miRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)等,均可发生m6A甲基化修饰。近期研究发现,异常m6A甲基化修饰是肾脏疾病中肾纤维化的“导火索”,可通过不同的靶点、信号通路等对肾间质纤维化产生促进或抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。本文对m6A甲基化修饰在肾纤维化中的研究进展进行综述,旨在为临床新药研发提供新思路。

METTL14通过促进N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移

目的 探究甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因对宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响及其可能的分子机制。方法使用基因表达数据集(GEO)数据库和宫颈癌组织芯片分析宫颈癌组织及癌旁组织的METTL14和Myc表达水平。采用RNA干扰技术(RNAi)沉默HeLa和SiHa宫颈癌细胞中METTL14的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)验证沉默效果。敲低METTL14后,CCK-8实验、集落形成实验、 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞增殖和集落形成能力,Transwell^(TM)实验检测细胞迁移能力。Western blot法测定敲低METTL14后METTL14和Myc的蛋白表达水平,甲基化RNA免疫共沉淀后实时定量PCR(MeRIP-qPCR)检测各组HeLa细胞中N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达水平。结果 GEO数据库和宫颈癌组织芯片染色结果显示,METTL14和Myc在宫颈癌组织中的表达显著高于宫颈癌癌旁组织,且METTL14高表达的宫颈癌患者生存期更短。沉默METTL14后能明显抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的细胞活力、增殖和迁移能力,其作用机制可能与METTL14促进m^(6)A Myc的表达有关。结论 METTL14通过促进m^(6)A Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移。

METTL14基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构和骨密度及氧化应激的影响

目的 研究人甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构、骨密度及氧化应激的影响。方法 12只野生型小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只。对照组小鼠切除卵巢附近脂肪组织;模型组小鼠切除双侧卵巢构建骨质疏松小鼠模型;另取6只切除双侧卵巢的METTL14基因敲除小鼠作为敲低组。术后8周,使用micro-CT扫描仪测量小鼠右股骨骨密度和骨微结构相关指标,使用ELISA检测小鼠血清中PINP、CTX、MDA和SOD水平。结果 模型组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,敲低组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于对照组,敲低组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 METTL14基因敲除可抑制骨质疏松小鼠骨密度,破坏骨微结构,并促进氧化应激。

甲基转移酶样蛋白14与肿瘤

N^(6)-甲基腺嘌呤(m6A)修饰是最常见的RNA表观遗传修饰,其在恶性肿瘤发生发展过程中扮演重要角色。甲基转移酶样蛋白14(METTL14)是催化m6A修饰的主要甲基化酶之一,参与调节RNA剪接、翻译及降解等生物学进程。最新研究表明METTL14不仅通过多种分子机制调控肿瘤生长、侵袭和转移,而且其表达水平与肿瘤患者预后及抗肿瘤治疗效果密切相关。深入了解METTL14在乳腺癌、消化系统肿瘤及泌尿系统肿瘤中的作用机制,有助于为基于m6A修饰的肿瘤防治提供新的临床标志物及药物治疗靶点。

甲基转移酶样蛋白14介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1对胆管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(METTL14)介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1(lnc EIF3J-AS1)异常表达对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法收集2017年9月至2018年12月间海军军医大学第一附属医院行手术切除并经病理学确诊的10例胆管癌组织及其相应癌旁正常组织,采用荧光定量PCR法检测胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1的表达,采用蛋白质免疫印迹法检测METTL14的蛋白表达。选取胆管癌细胞株HUCCT1和RBE,分为对照组和METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组,对照组分别转染相应的阴性对照的慢病毒,METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组分别转染干扰METTL14或lnc EIF3J-AS1表达的慢病毒。采用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白质免疫印迹法检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)和AKT蛋白表达。结果胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1表达量均显著高于癌旁正常组织(0.075±0.012比0.031±0.006,0.140±0.032比0.064±0.012),且METTL14 mRNA与lnc EIF3J-AS1表达水平呈正相关(r=0.883,P=0.0007)。胆管癌组织METTL14蛋白表达量高于癌旁正常组织(0.354±0.131比0.187±0.183)。与对照组相比,胆管癌细胞株HUCCT1和RBE METTL14敲减组lnc EIF3J-AS1表达水平明显下降(0.217±0.020比1.000±0.052,0.149±0.066比1.000±0.045)。HUCCT1细胞和RBE细胞lnc EIF3J-AS1敲减组迁移和侵袭能力明显下降(5.00±0.58比23.33±0.33,20.33±0.67比70.67±0.33;12.00±0.58比25.00±2.52,22.33±0.89比43.67±0.33),且EGFR与p-AKT/AKT蛋白表达水平也明显下降(0.109±0.015比1.000±0.018,0.226±0.036比1.000±0.051;0.118±0.052比1.000±0.069,0.132±0.098比1.000±0.023)。以上差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论METTL14介导胆管癌中lnc EIF3J-AS1异常表达可促进肿瘤细胞迁移和侵袭。

m6A甲基转移酶METTL3、METTL14在慢性乙型肝炎患者肝组织中表达及与病情的关系

目的检测N6-腺苷酸甲基化(m6A)甲基转移酶样因子3(METTL3)、甲基转移酶样因子14(METTL14)在慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中的表达情况,探讨METTL3、METTL14与CHB患者肝炎与肝纤维化的相关性。方法选择2018年7月-2020年8月在信阳市中心医院治疗并完成活检的101例CHB患者为CHB组,根据肝组织活检病理结果进行肝脏炎症分期(G0~1、G2、G3)和肝脏纤维化分期(S0~1、S2、S3、S4),选择同期35例因肝脾外伤的患者正常肝组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组肝脏组织中METTL3、METTL14表达水平,Spearman法分析CHB患者肝脏组织中METTL3、METTL14表达与CHB患者肝炎程度、肝纤维化程度的相关性。结果与对照组比较,CHB组患者肝组织METTL3、METTL14表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着肝纤维化程度加重,肝纤维化分级S0~1期、S2期、S3期、S4期患者肝组织中METTL3、METTL14表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着肝炎程度加重,肝炎G0~1期、G2期、G3期患者肝组织中METTL3、METTL14表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,CHB患者肝脏组织中METTL3、METTL14表达均与CHB患者肝炎程度、肝纤维化程度呈负相关(P<0.05)。结论在CHB患者肝组织中METTL3、METTL14低表达,二者表达与患者肝纤维化和肝炎程度有关,可能作为预测CHB患者病情严重程度的标志物。

axin和METTL14在胃癌组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系

目的探讨轴抑制剂(axin)和甲基转移酶样蛋白14(METTL14)在胃癌组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系。方法选取79例胃癌患者的胃癌组织和正常胃黏膜组织,另选取31例胃癌癌前病变组织。采用免疫组织化学染色法检测3种组织中axin和METTL14蛋白的表达情况,分析axin与METTL14蛋白表达的相关性及不同临床特征胃癌患者胃癌组织中axin和METTL14蛋白的表达情况。结果正常胃黏膜组织中axin蛋白的阳性表达率为75.9%(60/79),高于胃癌组织的51.9%(41/79)和癌前病变组织的35.5%(11/31),差异均有统计学意义(P﹤0.05);胃癌组织和癌前病变组织中axin蛋白的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。正常胃黏膜组织中METTL14蛋白的阳性表达率为83.5%(66/79),高于胃癌组织的35.4%(28/79)和癌前病变组织的61.3%(19/31),差异均有统计学意义(P﹤0.05);胃癌组织中METTL14蛋白的阳性表达率低于癌前病变组织,差异有统计学意义(P﹤0.05)。临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、中+高分化的胃癌患者胃癌组织中axin和METTL14蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。79例胃癌组织中,METTL14与axin共阳性表达24例,共阴性表达14例,且METTL14和axin表达呈正相关(r=0.569,P﹤0.01)。31例癌前病变组织中,METTL14与axin共阳性表达9例,共阴性表达10例,且METTL14和axin表达呈正相关(r=0.372,P﹤0.01)。结论胃癌组织和癌前病变组织中axin和METTL14蛋白阳性表达率均低于正常胃黏膜组织,且两者的表达呈正相关,提示两者对胃癌的发生均具有抑制作用,联合检测可以作为胃癌诊断和治疗的依据。

基于METTL14/ERα信号探讨m6A调控子宫内膜癌转移的机制研究

目的探讨甲基转移酶样因子14(METTL14)失调引起的异常N6-甲基腺苷(m6A)修饰在子宫内膜癌(EC)侵袭和转移中的作用。方法收集96名2017—2021年在武汉科技大学附属孝感医院接受治疗性手术的EC患者。从冷冻组织中分离RNA(70对)或蛋白质(10对),用于定量实时PCR(qPCR)或免疫印迹分析,以评估METTL14在EC中的表达。评估METTL14的表达及其与EC临床病理学特征的相关性。在体外和体内测定了METTL14在EC中的生物学效应。将甲基化RNA免疫沉淀测序(MeRIP-seq)与RNA测序(RNA-seq)相结合,并在m6A斑点印迹之后,采用MeRIP-qPCR、RIP-qPCR或双荧光素酶报告基因分析来筛选和验证METTL14的候选靶标。结果与匹配的相邻组织相比,EC中METTL14的mRNA和蛋白质水平显著下调。与METTL14高表达组相比,METTL14低表达组FIGO分期、浸入深度、淋巴血管侵犯、淋巴结转移、肿瘤转移例数显著增加(P<0.05)。在功能上,METTL14在体外和体内抑制EC细胞的增殖和侵袭能力。从机制上讲,METTL14介导的m6A去甲基化导致含有雌激素受体α(ERα)的转录后抑制。此外,与METTL14相比,ERα诱导肿瘤的致癌行为。结论METTL14通过m6A依赖性方式在EC细胞中减弱ERα的表达,进而抑制肿瘤转移和侵袭。

METTL14调控CCNL2对乳腺癌细胞活性与侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase like 14,METTL14)通过m6A修饰的方式调控细胞周期蛋白L2(cyclin L2,CCNL2)对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞增殖与侵袭的影响。方法收集2018年8月至2020年2月烟台山医院乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)定量与qRT-PCR检测组织中m6A、METTL14、CCNL2的表达水平。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR、Western blot验证METTL14与CCNL2的调控关系。RIP实验验证YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)与CCNL2的调控关系。MTT法检测细胞活性,Transwell检测细胞侵袭能力。结果与正常细胞(0.24±0.02)及组织(0.18±0.02)相比,乳腺癌细胞MCF-7(0.47±0.03,t=11.05,P<0.001)和HS-578T细胞(0.41±0.03,t=8.17,P=0.001)及乳腺癌组织(0.39±0.02,t=12.86,P<0.001)中m6A水平升高。与正常组织(1.00±0.26)、(0.84±0.07)相比,乳腺癌组织中METTL14mRNA(1.57±0.28,t=13.50,P<0.001)与蛋白水平(1.66±0.11,t=10.89,P<0.001)显著升高。与对照组(100.00±10.11)、(1.00±0.12)相比,sh-METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(54.15±6.21,t=6.69,P=0.003)与活性(0.64±0.06,t=4.65,P=0.010)均减弱。与对照组(100.00±11.05)、(1.00±0.13)相比,过表达METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力(175.31±13.45,t=7.49,P=0.002)与活性(2.16±0.16,t=9.75,P=0.001)均增强;m6A抑制剂处理后,METTL14对细胞侵袭(137.41±12.64,t=3.56,P=0.024)和活性(1.64±0.15,t=5.59,P=0.005)的作用均被部分反转。与正常组织相比,CCNL2在乳腺癌组织中表达下调,CCNL2与METTL14的相互作用关系被证实,与对照组(1.00±0.10)(0.64±0.05)相比,敲减METTL14可使CCNL2 mRNA(1.67±0.13,t=7.08,P=0.002)与蛋白(1.09±0.09,t=7.57,P=0.002)表达上调。METTL14敲除通过YTHDF2依赖的途径增强CCNL2 mRNA的稳定性,较sh-METTL14组(50.47±5.16)、(0.52±0.05)相比,sh-METTL14+sh-CCNL2组乳腺癌细胞侵袭能力(71.69±6.41,t=4.47,P=0.011)与活性(0.64±0.05,t=2.94,P=0.042)均有所提高。结论METTL14通过m6A修饰的方式抑制CCNL2的表达进而提高乳腺癌细胞侵袭与活性。

牦牛METTL14 CDS区克隆及表达谱分析

旨在克隆牦牛甲基转移酶样蛋白(methyltransferase-like protein 14,METTL14)基因的编码区(CDS)序列,探究其分子特征及时空表达规律。以大通牦牛脂肪组织cDNA为模板,通过克隆获得METTL14的完整CDS区序列,用生物学软件进行基因序列和蛋白质结构分析,利用qRT-PCR检测METTL14的时空表达规律。结果显示,大通牦牛METTL14的CDS区全长1371 bp,共编码456个氨基酸;METTL14亲缘关系与野牦牛最近,与鸡和小鼠最远;氨基酸等电点是5.89,不稳定系数(Ⅱ)为52.02,GRAVY=-0.878,METTL14总体表现出强的亲水性;METTL14有1个大小为177 aa的MT-A70酶保守结构域,无信号肽与跨膜结构域;亚细胞定位与核定位预测分析都显示METTL14位于细胞核(69.60%)。推测METTL14共有40个潜在的磷酸化位点。METTL14蛋白高级结构由无规则卷曲(51.10%)、α-螺旋(33.11%)、延伸链(11.84%)和β-转角(3.95%)相互连接而成。METTL14与甲基化修饰相关蛋白相互作用,主要参与RNA甲基化修饰过程。qRT-PCR结果显示,METTL14基因在牦牛7个组织中均有表达,相比脂肪组织中的表达,背最长肌中表达量最高(P<0.001);在牦牛生长发育的不同阶段,前体脂肪细胞中METTL14的表达量也有差异,30月龄>18月龄(P<0.05);进一步研究发现,在牦牛前体脂肪细胞分化过程中,METTL14表达量在0,4,8,12 d呈现上升的趋势,在4,8 d的表达量显著高于0 d(P<0.05),12 d的表达量极显著高于0 d(P<0.01)。结果表明,大通牦牛METTL14是一个具有MT-A70酶保守结构域的定位在细胞核上的酸性不稳定水溶性蛋白,在牦牛脂肪沉积过程中发挥着重要的作用。本试验进一步为METTL14在牦牛脂肪沉积中的调控机制研究奠定理论基础。

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞m6A水平的影响及其机制

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌中m6A水平的影响及机制。方法将胃癌细胞株MGC-803分别与幽门螺杆菌标准菌株NCTC 11637、NCTC 26695、PM SS1在MOI=100的条件下共培养8 h,用dot-blot和ELISA方法检测细胞总体m6A水平。用qRT-PCR和Western blotting检测METTL3和METTL14的表达。下载GEO数据库中的原始数据,分析m6A甲基化转移酶与临床病理参数之间的关系。运用GEPIA分析TCGA和GTEx数据库中m6A甲基化转移酶METTL14在胃癌和正常组织中的表达差异。结果幽门螺杆菌可导致胃癌细胞m6A水平上调;幽门螺杆菌感染诱导了胃癌细胞中METTL14表达;METTL14表达与胃癌组织LAUREN分型相关,且在肠型胃癌组织中表达更高;胃癌组织中METTL14的表达高于癌旁正常组织。结论幽门螺杆菌感染诱导胃癌细胞总体m6A水平上调,其机制与m6A甲基化转移酶METTL14表达上调有关。