甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌细胞迁移侵袭抑制及SPG20基因甲基化调节作用观察

目的分析甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力的抑制作用及痉挛性截瘫-20(SPG20)基因甲基化水平的调节作用,以探讨甲基化转移酶抑制剂对肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法以不同浓度甲基化转移酶抑制剂SGI-1027作用于肺腺癌A549细胞,MTT法测算细胞增殖活力,筛选得到SGI-1027最佳作用浓度为7.5μmol/L,作为后续实验的作用浓度。将A549细胞分为SGI-1027组和二甲基亚砜(DMSO)组,SGI-1027组培养基中加入SGI-1027培养,对照组培养基中加入DMSO培养。两组培养48 h时,采用划痕愈合实验观察细胞迁移能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力;采用qRT-PCR法检测细胞DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)、SPG20 mRNA,焦磷酸测序法检测细胞SPG20基因甲基化水平,Western blotting法检测细胞DNMT3b、SPG20蛋白。结果培养48 h时,与DMSO组比较,SGI-1027组细胞迁移距离小、穿膜细胞数少(P均<0.05)。与DMSO组比较,SGI-1027组DNMT3b mRNA及蛋白相对表达量下降,SPG20 mRNA及蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。SGI-1027组SPG20基因甲基化率较DMSO组降低(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂SGI-1027可抑制肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力,降低细胞SPG20基因甲基化水平;SGI-1027可能通过下调细胞内SPG20基因甲基化水平进而抑制肺腺癌细胞的迁移、侵袭能力。

甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶及其抑制剂研究进展

甲基赤藓糖醇磷酸(methylerythritol phosphate,MEP)途径是生产萜类化合物前体异戊二烯基二磷酸(isopentenyl diphosphate,IPP)和二甲基烯丙基二磷酸(dimethylallyl diphosphate,DMAPP)必要的生化途径之一,该途径广泛存在于植物、细菌及病原体体内,而哺乳动物中不存在。MEP途径包含的7个关键酶都可以作为新型农药和医药的作用靶标。甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidyltransferase,IspD)是MEP途径的第三个关键酶,它的活性位点亲脂性低,但拥有独特的变构位点,近年来引起研究人员的广泛关注。利用IspD小分子抑制剂来阻断MEP通路,从而间接地抑制萜类化合物的生成,可以造成病菌和植物的死亡,达到杀菌或除草目的。本文对IspD结构、催化机理、IspD抑制剂及其作用机制等内容进行了综述,可为以IspD作为靶标的抑制剂的筛选以及新型农药和医药的开发提供指导。

组蛋白甲基转移酶2抑制剂BAY-598和阿霉素在骨肉瘤中的协同抗癌作用

目的探讨组蛋白的甲基转移酶2抑制剂BAY-598和阿霉素在骨肉瘤中的协同抗癌作用。方法通过细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成实验,评估两种药物单独或联合使用后对骨肉瘤细胞恶性特征的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况。结果组蛋白甲基转移酶2抑制剂和阿霉素联合治疗可协同抑制细胞的生长、迁移、侵袭,诱导细胞凋亡,导致OS细胞细胞周期阻滞。进一步的机制探索表明,JAK-STAT信号通路可能是协同作用的关键。结论组蛋白甲基转移酶2抑制剂和阿霉素对骨肉瘤具有协同抗癌作用,它们的联合使用可能是一种很有前途的骨肉瘤治疗策略。

甲基转移酶抑制剂对KG1a细胞系的增殖抑制作用

为探讨甲基转移酶抑制剂通过干扰DNA甲基化发挥抗白血病作用的可能性，采用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)和细胞分化剂CDAⅡ体外处理因高甲基化致p15基因表达失活的髓系白血病细胞系KG1a，经细胞形态学，甲基化特异性PCR（MSP）技术，^3H标记同位素微量分析法，限制性内切酶，流式细胞术及间接免疫荧光等技术对加药前后培养细胞的生物学特征进行观察分析。结果发现，两种药物对KG1a细胞均有时间和（或）浓度依赖性的增殖抑制作用，5-Aza-CdR和CDAⅡ对细胞分别表现了诱导凋亡和诱导分化的可能以及G2和G0/G1期阻滞，与此同时DNA甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度下降，p15蛋白表达部分恢复，结论：通过抑制甲基转移酶活性，干扰DNA甲基化以发挥抗白血病作用的途径是可能的，值得进一步探讨。

DNA甲基化转移酶抑制剂与胸苷酸合成酶抑制剂体外联合用药的抗肿瘤增效作用

通过在体外分别对DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza-C)和新型胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克(nolatrexeddihydrochloride,Nolatrexed)联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的相互作用性质的观察,探讨DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性.使用MTT法测定二者单独用药或联合用药的抗肿瘤活性,用抑制浓度的分数之和(sumoffractionalinhibitoryconcentration,SFIC)值及等效剂量分析方法(isobologram)评价联合用药的作用性质.结果显示,联合用药时其SFIC值均小于或等于1,由此得到的等效剂量曲线图形表现为凹形.可见,5-aza-C和Nolatrexed体外联合用药抗肿瘤相互作用性质为明显的增效作用,DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗肿瘤增效作用是可行的.

哌啶酮类法尼基转移酶抑制剂的设计、合成及初步抗肿瘤活性研究

利用计算机辅助药物设计软件Catalyst构建了哌啶酮类法尼基转移酶抑制剂的药效团模型,结合所构建的药效团模型,设计并合成出17个哌啶酮类化合物,其中16个目标化合物未见文献报道,其结构均经IR,MS及1HNMR等确证.利用MTT法得到其对于肿瘤细胞抑制的IC50值.初步生物活性测试表明,目标化合物均具有抑瘤活性,其中11个化合物的IC50值低于阳性对照5-Fu,并且实测值与所构建的药效团模型的预测值相关性较好.

DNA甲基转移酶抑制剂的研究进展

DNA甲基化是调控基因表达的一种重要的表观遗传学过程,在基因组稳定性和癌症发生方面起着重要作用。DNA甲基转移酶抑制剂可通过抑制DNA异常甲基化的发生,进而激活沉默的抑癌基因来防治癌症。本文从作用机制的角度,介绍DNA甲基转移酶抑制剂近年来的研究进展。

体外建立dsRNA结合甲基化转移酶抑制剂转染猪肾细胞的模型

猪病毒性疾病对现代养猪业造成了巨大的经济损失。猪RNA病毒基因组在复制过程中形成双链RNA(ds RNA)的复制型中间体,并诱导I型干扰素的产生,从而对病毒的增殖起抑制作用,这是宿主抗RNA病毒感染的重要天然防线。猪许多病毒的ds RNA对上皮细胞有明显的趋化作用,而DNA甲基化转移酶抑制剂Aza-Cd R可诱导感染细胞凋亡并发挥抗病毒作用。本实验结合荧光定量PCR,计算干扰素相关基因(TLR3、IRF、IFNA)的相对表达量。同时,通过设计剂量和时间依赖实验,利用CCK8实验方法,计算细胞生存比率,最终确定ds RNA模拟物Poly I:C体外转染PK15细胞后,Aza-Cd R处理的理想细胞转染模型。此模型能有效地在体外模拟活病毒感染细胞的效果,更便于在常规实验室使用,是研究猪宿主与病毒感染关系的理想细胞模型。

DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对SKM-1细胞P15^(INK4B)基因甲基化状态的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(DAC)对骨髓增生异常综合征(MDS)转白血病细胞株SKM-1 P15INK4B基因甲基化状态的影响。方法对数生长期的SKM-1细胞设4组,每组1×106个细胞,其中3组为DAC处理组,分别以1.5、3.0和6.0μmol/L DAC处理SKM-1细胞48 h,另1组未加DAC的SKM-1细胞培养48 h作为对照组。甲基化特异性PCR(MSP)检测各组细胞P15INK4B基因甲基化情况,实时荧光RT-PCR相对定量法检测P15INK4B基因mRNA表达情况,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)法检测细胞增殖抑制情况,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡情况。结果 1)对照组SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化,3个DAC处理组的甲基化条带逐渐变浅,非甲基化条带出现并逐步加深;2)P15INK4B基因mRNA表达水平:对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为1.00±0.12与0.91±0.13、0.51±0.06、0.43±0.04(P<0.05),3个DAC处理组之间差异甚微(P>0.05);3)CFSE平均荧光强度(MFI):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为51.67±1.61与55.33±2.28、56.33±2.50、55.71±2.87,仅3.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而各DAC处理组之间变化差异很小(P>0.05);4)G1期细胞比例(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为55.78±3.61与48.12±2.93、51.69±1.60、46.71±1.54,S期细胞比例(%):4个组分别为44.22±3.61与51.88±2.93、48.31±1.60、53.29±1.54,其中1.5、6.0μmol/L组较对照组变化较明显(P<0.05),而DAC各处理组中,6.0与3.0μmol/L组之间具明显差异(P<0.05);5)早期凋亡率(%):对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为2.91±0.26与7.77±0.22、12.45±0.28、13.86±0.27(P<0.05),DAC各处理组没有明显变化(P<0.05)。结论 DAC能逆转SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化状态,在一定程度上抑制SKM-1细胞的增殖,使细胞分化阻滞在S期,同时促进细胞凋亡,并随DAC浓度的增加而增强;尚未发现DAC逆转P15INK4B基因甲基化状态的同时使沉默的P15INK4B基因mRNA重新表达。

甲基转移酶抑制剂对Raji细胞系增殖抑制的实验研究

目的 探索不同浓度甲基转移酶抑制剂 (5 Aza CdR)对甲基化细胞系Raji细胞的生长抑制效应 ,为临床应用提供实验依据。方法 对 5 Aza CdR体外处理高甲基化致P15基因失活的淋巴肉瘤白血病细胞株Raji细胞 ,经流式细胞术、细胞生物学特征观察细胞的生长抑制效应。结果 在 (10 7～ 10 6)mol/L的范围内 ,随着药物浓度的升高 ,Raji细胞生长受到抑制 ,并表现出剂量时间依赖关系。 5 Aza CdR诱导细胞分化 ,阻滞于G0 /G1期。结论 甲基转移酶抑制剂抗DNA甲基化的白血病是可行的 ,值得进一步探索。

DNA甲基转移酶抑制剂对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的体外研究

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期LoVo细胞,实验组加入终浓度分别为0.1、1、5、10μmol/L SGI-1027的培养液,对照组用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基同步培养。MTT法检测SGI-1027作用于LoVo细胞24、48、72 h的增殖抑制率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;SGI-1027处理后每个浓度收集细胞1×10-6个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）双染或PI单染流式细胞术分别检测SGI-1027处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况;Western blotting检测SGI-1027对PI3K/Akt通路的影响。结果倒置相差显微镜观察显示,随SGI-1027浓度和作用时间的增加,LoVo细胞的凋亡形态学改变更为显著。除0.1μmol/L SGI-1027处理24 h后的LoVo细胞增殖抑制率与对照组无差异外,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,SGI-1027对LoVo细胞的增殖抑制作用不断增强。与对照组比较,SGI-1027（0.1-10μmol/L）处理LoVo细胞24、48h的凋亡率均升高,且各浓度间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组比较,1-10μmol/L SGI-1027处理后G0/G1期细胞比例及PTEN水平均高于对照组,S期和G2/M期细胞比例及Akt水平均低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论SGI-1027可抑制LoVo细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,可能与其抑制PI3K/Akt通路激活有关,且SGI-1027作用的时间和浓度均对LoVo细胞恶性行为有影响。

新型蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂的合成

为了研究蛋白质精氨酸甲基转移酶的抑制作用,设计并合成了标题化合物。此化合物的合成是通过卤化、取代、胍基化和脱保护基4步反应,其结构经1HNMR、13CNMR和MS表征。

DNA甲基化转移酶及DNA甲基化转移酶抑制剂在肿瘤研究中的新视角

表观遗传改变例如DNA甲基化涉及多种癌症的发生和进展。DNA甲基化包括可逆的甲基基团添加至CpG二核苷酸中5’位胞嘧啶上。而DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferases，DNMT）是负责甲基基团添加至CpG二核苷酸的酶，与组蛋白修饰一起，是发生于转录抑制所必须的起始事件。

DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对人肝细胞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨SGI-1027对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法给予不同浓度(0、5、10、15、20、25、30和35μmol/L)的SGI-1027处理Huh7细胞24 h后,MTS法检测SGI-1027对Huh7细胞增殖活性的影响。实验组Huh7细胞中加入SGI-102730μmol/L,对照组Huh7细胞中仅加入等量0.1%DMSO;碘化丙啶染色和流式细胞仪检测SGI-1027对Huh7细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞仪检测SGI-1027对Huh7细胞凋亡的影响;TUNEL染色观察SGI-1027处理后Huh7细胞形态变化。结果 SGI-1027在Huh7细胞中的IC_(50)为27.3μmol/L,SGI-1027能够抑制Huh7细胞增殖,并呈剂量依赖性。SGI-1027不影响Huh7细胞周期;SGI-1027能够诱导Huh7细胞凋亡,对照组和实验组的凋亡率分别为(3.242±0.204)%和(46.57±2.512)%(P<0.05)。TUNEL染色观察对照组细胞呈圆形,而实验组细胞呈典型凋亡表现,对照组和实验组凋亡细胞百分率分别为(1.077±0.407)%和(58.24±8.427)%(P<0.05)。结论 SGI-1027能够抑制Huh7细胞增殖,并且能够诱导其凋亡。

甲基化转移酶抑制剂对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响

目的观察甲基化转移酶抑制剂地西他滨对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响,探讨其可能机制。方法将20只2型糖尿病KKAy小鼠按随机数字表法分为两组,实验组10只使用地西他滨治疗,剂量为15 mg.m-2.d-1,对照组10只使用生理盐水治疗,记录两组治疗前后的血糖、体重。结果治疗结束后,对照组小鼠的血糖和体重均增加(P<0.05),实验组体重增加(P<0.05),而血糖治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后实验组血糖、体重及增加幅度均低于对照组(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂能缓解2型糖尿病小鼠血糖和肥胖的恶化,其机制可能与能量代谢通路和胰岛素信号的重要基因发生了去甲基化有关。

3—位含氮官能团取代的羊毛甾醇衍生物—甾醇24—甲基化转移酶抑制剂的合成

本文报道了羊毛甾醇3－酮，3－乙酰基羊毛甾醇，3－肟羊毛甾醇，3α－氨基羊毛甾醇和3β－氨基羊毛甾醇的合成方法，所合成的产物应用薄层色谱（Rf值），气相色谱（RRTc值）和光谱学（红外，质谱，核磁共振氢谱和碳谱）等方法鉴定了它们的结构。

“一步法”合成新型DNA甲基转移酶抑制剂

目的采用"一步法"合成DNA甲基转移酶抑制剂[2-(1,3-二氧-1,3-二氢-2氢-异吲哚)-3-(1氢-吲哚)丙酸]。方法以色氨酸和邻苯二甲酸酐作原料,丙酮作反应溶剂,三乙胺作催化剂,乙酸酐作脱水剂,回流反应3 h即得。结果产物产率为81.5%。结论该合成方法,工艺简单,后处理方便,生产成本低,更适于该类产物的规模化工业生产。

一种新型的儿茶酚-O位-甲基转移酶抑制剂对帕金森大鼠结肠动力及离子转运的影响

目的:研究一种新型的儿茶酚-O位-甲基转移酶抑制剂对帕金森病大鼠远端结肠平滑肌动力及上皮离子转运的影响,探讨其引起腹泻、便秘、腹痛等胃肠道副作用的可能机理。方法利用离体帕金森病模型大鼠结肠平滑肌和粘膜标本,采用胃肠道平滑肌动力记录技术、短路电流测定技术测定平滑肌的收缩舒张以及粘膜上皮的离子转运。结果发现新型抑制剂恩他卡朋对正常大鼠的平滑肌没有作用,但对帕金森病大鼠纵行肌的收缩具有抑制效应,并呈现剂量依赖性的特征,而对环形肌则没有明显的影响。在正常鼠和帕金森病模型大鼠结肠粘膜的基底侧加入恩他卡朋(250μM),引起的短路电流(ISC)分别为52.82±5.86μA/cm2和37.69±8.91μA/cm2,帕金森模型组和正常组相比,均值降低;在结肠粘膜的基底侧加入恩他卡朋(250μM),正常大鼠和模型大鼠的跨膜电阻分别为院46.29±3.949Ω·cm2和49.10±6.385Ω·cm2。模型大鼠和正常组相比,跨膜电阻均值略有增加,但无统计学差异。结论新型抑制剂恩他卡朋对帕金森病大鼠纵行肌的收缩呈现剂量依赖性的抑制效应,并且可以引起帕金森病大鼠远端结肠上皮跨膜短路电流的降低。这些变化可能是造成服用恩他卡朋的患者产生腹泻、便秘等胃肠道副作用的可能机理之一。

DNA甲基转移酶抑制剂对子宫内膜异位症异位灶的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷对子宫内膜异位症大鼠模型异位灶的影响。方法:根据大鼠自体移植方法构建大鼠子宫内膜异位症模型。4周后二次开腹判断造模是否成功,用游标卡尺测量记录异位灶体积后将大鼠随机分为实验组(n=12)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=12)和对照组(n=11),同时选取未造模的正常大鼠作为空白组(n=10)。实验组大鼠腹腔注射5-氮-2'-脱氧胞苷(2.5 mg/kg·d),PBS组注射等量PBS溶液对照组和空白组未用药。4周后取大鼠腹腔冲洗液及异位灶标本后处死大鼠,再次用游标卡尺测量备组异位灶体积大小。异位灶组织常规HE切片后显微镜下观察组织形态结构。应用免疫组织化学染色方法和Western Blot法检测备组异位灶内DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达情况。收集腹腔冲洗液用Elisa法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果:①50只大鼠根据大鼠子宫内膜自体移植方法成功35例,造模成功率为70%(35/50)。②实验组大鼠经药物处理后异位灶体积明显缩小(处理前后病灶体积分别为51.08±12.73 mm^3和5.56±3.68 mm^3),差异有统计学意义(P<0.01)。③免疫组化检测实验组、PBS组、对照组异位灶组织中DNMT1表达的组织学评分分别为2.30±0.97分、3.80±1.77分、4.07±1.92分;Western Blot法检测实验组、PBS组、对照组异位灶组织中DNMT1蛋白的相对表达量分别为0.17±0.39、0.29±0.17、0.3 1±0.41。实验组异位灶组织中DNMT1表达低于PBS组及对照组差异有统计学意义(P<0.05)。④实验组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α含量较PBS组及对照组降低,实验组、PBS组、对照组均较空白组均升高差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DNA甲基转移酶抑制剂能明显减少异位灶中DNMT1的表达及腹腔冲洗液中TNF-α含量,缩小异位灶体积,促进异位灶萎缩,为子宫内膜异位症的靶向治疗提供了依据。

抗帕金森病新药—儿茶酚-氧位-甲基转移酶抑制剂

原发性帕金森病是中、老年人常见的神经系统变性病之一.迄今,临床上尚无根治帕金森病的办法.但在20世纪60年代应用左旋多巴制剂治疗是一个重要的突破.至今,左旋多巴制剂仍是原发性帕金森病的最基本、最有效的治疗方法,被称为"金标准",这是因为帕金森病症状的产生,主要是由于多巴胺减少,因此用多巴胺补偿治疗有效.