miR-140-3p靶向调控KMT5B对老年牙髓干细胞成牙本质分化的影响及机制

目的 分析微小RNA(miR)-140-3p靶向调控甲基转移酶(KMT)5B对老年牙髓干细胞成牙本质分化的影响及机制。方法 采用实时荧光定量法进行鉴定miR-140-3p、KMT5B表达量,通过倒置显微镜对矿化结节情况进行观察,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,通过Western印迹对成牙关键转录因子Runt相关转录因子(RUNX)2、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨桥蛋白(OPN)、P21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1相对表达量进行检测。结果 与未分化牙髓干细胞对比,分化牙髓干细胞miR-140-3p表达量显著升高,KMT5B表达量显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-miR-140-3p组miR-140-3p表达显著降低(P<0.05),表明干扰miR-140-3p的牙髓干细胞株构建成功,与si-NC组相比,si-miR-140-3p组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著降低,P21显著升高(P<0.05)。与KMT5B-NC组相比,KMT5B组KMT5B表达量升高(P<0.05),表明上调KMT5B的牙髓干细胞构建成功,与KMT5B-NC组相比,KMT5B组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著降低,P21显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,与KMT5B-NC组相比,KMT5B可使WT-miR-140-3p荧光素酶活性显著降低(P<0.05),对MUT-miR-140-3p荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与si-NC组相比,抑制miR-140-3p表达可使牙髓干细胞中KMT5B表达显著升高(P<0.05),与si-miR-140-3p+anti-KMT5B-NC组相比,si-miR-140-3p+anti-KMT5B组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著升高,P21显著降低(P<0.05)。结论 干扰miR-140-3p可通过靶向调控KMT5B表达,促进牙髓干细胞成牙本质分化及增殖。

KDM5B基因在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌耐药能力的影响

目的:检测组蛋白去甲基化转移酶KDM5B(JARID1B/PLU-1)在正常卵巢、卵巢癌组织及细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞株耐药能力的影响。方法:RT-q PCR法检测KDM5B在36例卵巢癌、15例正常卵巢、6例术后化疗耐药复发患者组织及卵巢上皮细胞株IOSE和5株卵巢癌细胞中的表达情况;构建p MSCVpuro-KDM5B过表达质粒和p GIPZ-sh1、p GIPZ-sh2干扰质粒,并筛选得到稳定过表达的SKOV3和稳定干扰的Caov3细胞株,RT-q PCR和Western blot法鉴定调控效果;用浓度梯度递增的顺铂处理SKOV3过表达和Caov3干扰细胞株,CCK-8法检测顺铂半抑制浓度(IC50)变化。结果:RTq PCR结果示,正常卵巢组织中KDM5B相对表达量(1.950±0.3003)低于卵巢癌组织(4.924±0.2989),差异有统计学意义(t=5.909,P<0.0001)。KDM5B表达量与卵巢癌患者的FIGO分期、病理分级、转移和耐药发生明显相关,与患者年龄、CA125水平不相关。6例复发患者中,5例KDM5B表达明显升高(P<0.001)。KDM5B的mRNA和蛋白水平在卵巢上皮性细胞株IOSE中最低,在卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910、ES-2、A2780、Caov3中表达逐渐增加。RT-q PCR结果示,SKOV3过表达组的KDM5B表达量为对照组的27.4倍,Caov3干扰sh1和sh2组分别为对照组的0.38和0.41倍,Western blot也显示过表达和干扰有效。用浓度梯度递增的顺铂处理Caov3细胞株,KDM5B表达量随顺铂浓度增加而逐渐升高;检测SKOV3细胞株KDM5B过表达组IC50为3.666(95%CI为3.067~4.382)μg/ml高于对照组[1.676(95%CI为1.553~1.810)μg/ml],Caov3细胞株干扰sh1组和sh2组分别为3.359(95%CI为2.875~3.925)μg/ml、2.881(95%CI为2.49~3.324)μg/ml,均低于对照组[6.972(95%CI为6.182~7.864)]。结论:组蛋白去甲基化转移酶KDM5B在卵巢癌中表达升高,并且具有促进卵巢癌细胞株耐药的作用。

KMT5B突变致常染色体显性遗传性智力障碍51型伴心跳呼吸骤停复苏后超级难治性癫痫持续状态1例及文献复习

癫痫持续状态(status epilepticus,SE)是儿童急重症,年均发病率17~23/10万[1],控制不佳易转变为难治性癫痫持续状态(refractory status epilepticus,RSE),其中通过全身麻醉治疗24h后发作仍未终止的RSE被称为超级难治性癫痫持续状态(super refractory status epilepticus,SRSE),SRSE是一种罕见的破坏性疾病,儿童SRSE的病死率可达13.3%[2],若未经及时救治,可导致机体内环境紊乱、多脏器功能障碍等,甚至危及生命,存活者往往存在不同程度的脑损伤。