高比活度〔甲基-~3H〕-胸腺嘧啶核苷的制备

以 (5 - F3 ) -胸腺嘧啶核苷 (Td R)为前体 ,采用 Pd O/ Ba SO4 为催化剂 ,在 2 .5 mo L/ L KOH水溶液中进行催化卤氚取代反应。获得的标记物比活度为 9.1TBq/ g,与目前所用方法制备的标记物比活度 3TBq/ g相比提高 2倍。标记物放化纯度 >95 % ,示踪灵敏度可提高 70

商陆总皂甙对肝脾组织~3H-胸腺嘧啶核苷参人的影响

商陆总皂甙可能是一种激活核苷酸还原酶的生物活性物质,拮抗了羟基脲在二磷酸化水平对核苷酸还原反应的抑制作用,能显著提高,~3H-TdR参入率,延长动物的耐冻时间。表明商陆总皂甙是一种具有扶正固本作用的有效成分。

3H—胸腺嘧啶核苷参入法测定甲亢病人T淋巴细胞功能及其临床意义的初步探讨

本文测定了正常人和四组甲亢病人(n=117)外周血T淋巴细胞(T 细胞)和血清中T_3T_4含量,结果显示:1、四组甲亢病人T淋巴细胞明显低于健康人;2、经抗甲状腺药物治疗后病情缓解、T_3T_4正常、T 细胞功能逐渐恢复;

胸腺嘧啶二醇脱氧核苷单分子糖苷键断裂的理论研究

采用理论计算方法对c is-(5S,6R)胸腺嘧啶二醇脱氧核苷(dTg)单分子糖苷键断裂的热力学和动力学性质进行了研究.在气相中,所有稳定点的几何构型都采用B3LYP/6-31+G(d,p)方法进行全优化,并利用导电极化连续模型对气相优化构型进行单点计算确定水的溶剂效应,作者主要考虑了直接断裂和抽氢断裂两条路径.计算结果表明:两条反应机理均涉及较高的活化能,从而说明单分子分解并不能促进糖苷键的断裂,该研究为生物体内这一重要反应提供了更多有用的信息.

立体构型对5-羟基-6-氢过氧基-5,6-二氢胸腺嘧啶脱氧核苷热分解速率的影响

采用B3LYP/6-31 1++G(2d,p)方法对5-羟基-6-氢过氧基-5,6-二氢胸腺嘧啶脱氧核苷(5-OH-6-OOH-DHT)的trans-(5R,6R)、trans-(5S,6S)和cis-(5S,6R)三种构型的热分解机理进行了理论研究.同时利用CPCM模型对气相中的优化构型进行单点计算以确定水的溶剂效应.结果表明:与6R对的顺、反构型(5S,6R,5R,6R)相比,6S对的顺、反构型(5R,6S,5S,6S)均表现出相对较高的分解速率;此外,不论是6S对,还是6R对,它们的顺、反构型的反应速率十分接近.常温下这四种空间异构体在水溶液中分解速率的顺序为:cis-(5R,6S)>trans-(5S,6S)>trans-(5R,6R)>cis-(5S,6R).

顺-[Pt(NH3)2Cl2]与核苷的作用

用分光光度法研究了37℃、pH=5.5、0.1M NaClO4介质中cis[Pt(NH_(3))_(2)Cl_(2)]和DNA组成物——鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、胞嘧啶核苷及胸腺嘧啶核苷的作用。发现顺-[PtⅡ(NH_(3))_(2)]与前三种核苷能生成组成为1:1、1:2二种络合物,与胸腺嘧啶核苷不作用。所测得一级和二级表观生成常数,以及作用初速分别有如下大小次序:Guo>Ado>Cyt>>Thy;Guo>Ado>Cyt>>Thy.在所得结果基础上讨论了顺-[Pt(NH_(3))_(2)Cl_(2)]和癌细胞中DNA作用的可能方式。

动脉灌注GE7系统介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶／羟甲基无环鸟苷对大鼠诱发性卵巢恶性肿瘤的作用

目的观察非病毒载体介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（HSVl-tk）／羟甲基无环鸟苷（GCV）基因治疗系统，经肿瘤供血动脉灌注，对大鼠诱发性卵巢癌的作用，并初步探讨其作用机制。方法构建GE7-polylysine／pCMV-HSVl-tk／polylysine-HA20四元复合物，取二甲基苯蒽（DMBA）诱发的大鼠卵巢肿瘤模型18只，随机分为3组，每组6只。分别经卵巢供血动脉注入四元复合物8“g／只（Atk组）、同体积的生理盐水（ANS组），经尾静脉注入四元复合物8μg／只（Vtk组）。72h后，3组大鼠均腹腔注射GCV，50mg·kg-1.d-1，连用10d。停药后3d处死大鼠，瘤体称重，计算抑瘤率。采用流式细胞仪检测各组大鼠卵巢肿瘤细胞的细胞周期变化和细胞凋亡情况。结果Atk组大鼠肿瘤瘤重为（4．774-2．31）g，明显低于ANS组[（14．66±6．26）g，P〈0．01]和Vtk组[（17．53±7．19）g，P〈0．01]。Atk组抑瘤率为67．5％Vtk组的抑瘤率为-19．6％。流式细胞检测结果显示，Atk组S期细胞占（54．32±9．65）％，高于ANS组[（27．434-9．22）％，P〈0．01]和Vtk组[（30．16±11．57）％，P〈0．01]。Ark组肿瘤细胞凋亡率为（39．15±12．16）％，高于ANS组[（11．864-5．28）％，P〈0．01]和Vtk组[（14．32±6．43）％，P〈0．01]。结论HSVl-tk在GE7导人系统介导下，经卵巢供血动脉导人大鼠卵巢肿瘤组织，给予GCV后，可使肿瘤细胞阻滞于S期，促进肿瘤细胞凋亡，从而发挥良好的抑瘤作用。

^(3)H─TdR体内滞留诱发生殖毒性研究

研究了摄入氚标记胸腺嘧啶核苷（^(３)Ｈ－ＴｄＲ）在机体滞留过程诱发的生殖毒性效应。拟合了^(３)Ｈ－ＴｄＲ在睾丸、肝、脾、肾、股骨和血活中的滞留方程通式为：Ｒ（ｔ）＝Ａｅ－λａｔ＋Ｂｅ－λβｔ。比较了在不同组织的快组份和慢组份的有效半减期，估算了在不同脏器部位的累积吸收剂量。^(３)Ｈ－ＴｄＲ可诱发雄性生殖细胞的生殖毒性，表现为显性致死突变和显性骨骼畸形。关于显性致死突变与摄入了^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度之间呈正相关。Ｙ＝８０ . ２０Ｉ＋７４．１３；而显性骨骼畸形享与摄入^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度间的关系式为：Ｂ＝０．０７９１＋０．１６。

微量全血^3H—TdR掺入试验对滋养细胞肿瘤治疗的指示意义

长期以来,临床工作者就注意到滋养细胞肿瘤病人的预后与其细胞免疫功能有关。利用微量全血氚—胸腺嘧啶核苷(~3H-thymidine deoxyriboside简称~3H-Tdr)掺入试验,测定T淋巴细胞功能,目前仍认为是比较客观、重复性强的试验。它是将胸腺嘧啶核苷进行氚标记,使~3H-TdR在T淋巴细胞受抗原刺激后DNA增殖时掺入DNA,掺入到DNA中~3H-TdR的量就代表了T淋巴细胞的功能,其掺入量以放射性同位素的脉冲数(cpm)来表示。本文是以微量全血进行体外~3H-TdR掺入试验,对治疗过程中的恶性葡萄胎(恶葡)、绒毛膜上皮癌(绒癌)进行动态观察,了解其变化规律,探索本试验对其治疗的指导意义。 对象和方法 一、对象:妊娠滋养细胞肿瘤病人32例(恶葡20例、绒癌12例)。其诊断以病理诊断为准,未取得标本者按宋鸿钊的临床诊断标准诊断。每例病人均在治疗前、化疗疗程结束后二周、治愈后抽静脉血试验。并以正常育龄女性25名作为正常对照。 二、方法:微量全血培养,在植物血凝素(PHA)刺激下测定T淋巴细胞的反应能力。方法如下。 (一)1.7ml RPMI1640培养液,加入0.1ml(50μg)PHA,混合后放入平底试管内,再加入抗凝全血0.1ml。置37℃培养箱内培养50小时后,加入~3H-TdR 0.1ml(比活5Ci/mM。

^3H—TdR在幼年和成年小鼠睾丸中的代谢差异及对睾丸的损伤效应

本文研究了氚标记胸腺嘧啶核苷(8H-TdR)静脉注射后在BALB/C 纯种幼年和成年小白鼠睾丸中的代谢差异及其对成年雄性生殖细胞的损伤效应。注入0.037MBq/g 体重~3H-TdR 后,氚在成年鼠睾丸中的初始负荷量大于幼年鼠,但幼年鼠氚滞留量随时间延长渐渐超过成年鼠。~3H-TdR 可引起成年雄性生殖细胞损伤,表现为显性致死和显性骨骼突变的发生率增高。显性致死的致突变指数Y 与注射~3H-TdR 放射性活度I 的关系为Y=74.13+80.20I;显性骨骼突变发生率B 与注入~3H-TdR 放射性活度I 的关系为B=0.16+7.95×10_(-2)I。

四种植物25S rRNA sarcin/ricin结构域甲基化核苷的分析

应用不同浓度的dNTP逆转录反应,分析了苦瓜、丝瓜、蓖麻和水稻的25S rRNA sarcin/ricin区域中的甲基化核苷,发现了这4种植物25S rRNA的第3 023、2 966和2 962位的腺嘌呤、胸腺嘧啶和腺嘌呤是2’-O-甲基化核苷;在丝瓜和苦瓜25S rRNA的第2 992、2 990位的胞嘧啶和鸟嘌呤是葫芦科植物所特有的两个2’-O-甲基化核苷;第2 944位点的尿嘧啶是苦瓜、丝瓜、蓖麻和水稻的一个碱基甲基化核苷;而且,植物25S rRNA第3 023位甲基化腺嘌呤核苷刚好位于sarcin/ricin结构域的茎环上,与核糖体失活蛋白切割位点相距仅5个核苷酸,而在哺乳动物和酵母的rRNA相同位点上没有甲基化修饰的存在,根据这一结果推测,RIPs来源植物核糖体RNA的自我保护可能与这一位点的修饰有关。

水环境中溴化1-烷基-3-甲基咪唑类离子液体与胸腺嘧啶相互作用体系的计算研究

溴化咪唑类离子液体的生物小分子作用机制亟待探索.本文采用M06-2X/6-311++G(2d, p)/PCM/water理论方法计算了研究胸腺嘧啶(T)与溴化1-烷基-3-甲基咪唑类离子液体([Cnmim]Br,n=2、 4、 6、 8、 10)相互作用形成的T-[Cnmim]+、T-Br-、 T-[Cnmim]Br和T-2[Cnmim]Br体系的结构和能量学特征.结果表明T与阴阳离子间形成典型构型的稳定顺序是:共面<垂直<堆积(T-[Cnmim]+), top <front (T-Br-), T-[Cnmim]+<T-Br-<T-[Cnmim]Br <T-2[Cnmim]Br. T与Br-之间的氢键作用与咪唑阳离子伴随弱氢键的堆积环境更有利,阳离子烷基链长影响不明显.在堆积构型中胸腺嘧啶与咪唑阳离子以π-π+色散吸引为主,并伴随C-H…O和C-H…π弱氢键作用,部分碱基电子转移至阳离子(π→π+),其NBO分析显示稳定化能主要来自π→π+*(∑Eπ→π+*2)轨道作用的贡献;T与Br-之间以静电吸引为主,溴离子向胸腺嘧啶转移电子,稳定化能源于lpBr→σ*N-H.

羟甲基无环鸟苷对携有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

据《中华妇产科杂志》1997年12月32卷第12期报道 上海医科大学妇产科医院徐丛剑等,为观察羟甲基无环鸟苷（GCV）对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（HSV1-tk）的人卵巢上皮癌AO细胞的体内杀伤效应。

不同时间深低温保存对胸骨组织活性的影响

目的观察不同时间深低温保存对胸骨组织活力的影响。方法切取SD大鼠胸骨后立即放入含有低钾右旋糖酐（LPD）冻存液的冻存管,在程序降温仪降至-80℃后投入液氮,分别保存1、15、30、60、120 d后对胸骨组织进行体外培养,加入3H-胸腺嘧啶核苷（TdR）以做标记,使用β液体闪烁计数器检测组织细胞吸收情况和培养上清中的碱性磷酸酶（ALP）活性。结果与冷冻前比较,低温保存1 d后胸骨组织培养上清中ALP活性开始降低,15 d降至最低,以后基本保持稳定。低温保存1 d后,3H-TdR掺入率降至90.02%。冷冻15 d以后3H-TdR掺入率降至73.9%,以后无明显变化。结论深低温保存后胸骨组织保留70%~80%的活力,损伤主要发生在冷冻早期,ALP活性检测和3H-TdR体外组织培养是测定胸骨组织活力的有效方法。

肝癌HSV-TK/GCV自杀基因治疗的研究进展

GCV是一种用于抗病毒感染的药物,HSV-TK基因表达的胸苷激酶能将GCV磷酸化成GCV-TP取代DNA合成过程中的鸟嘌呤-5′-三磷酸,成为DNA合成的竞争性抑制剂,抑制DNA链延长,通过诱导凋亡机制引起细胞死亡[1]。其诱导细胞凋亡的机制还与激活P53通路、线粒体损伤、细胞毒作用等相关。

肝细胞再生刺激物质长期使用对慢性肝损害肝细胞倍体影响

目的:探讨肝细胞再生刺激物质(HSS)长期使用,对正常机体及病变组织细胞有无致畸.致癌作用。方法:采用从新生小牛肝中研制的HSS,对慢性肝损历动物模型进行长期治疗,利用同位素~3H-TdR掺入和流式细胞换术测定肝细胞增殖周期和倍体改变。结果:HSS①体内、外均能刺激肝细胞DNA合成(P【0.01);②增生的肝细胞增殖周期以GO/1期为主,但S期明显活跃(P】0 05);③增生肝细胞DNA倍体以4、8倍体等整倍体细胞为主,未见异常非整倍体细胞。结论:HSS长期使用无明显致畸、致癌作用。

大亚湾细菌生产力研究

采用~3H-胸腺嘧啶核苷示踪法测定了大亚湾的细菌生产力,结果表明,该海区的细菌生产力(C)的变化范围为0.50×10^(-3)～30.2×10^(-3)mg/(dm^3·h),和其他海区的比较说明,在采样期间,大亚湾海域的细菌生产力是较高的,并对细菌生产力的空间分布以及相关生物、化学要素之间的相互关系进行了讨论。

体外研究银屑病患者T淋巴细胞对表皮通过时间的影响

目的 揭示T细胞在银屑病表皮动力学紊乱中的作用。方法 应用T细胞与皮肤组织体外共培养的方法检测银屑病T细胞对表皮通过时间产生的影响 ;采用3 H胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)标记体外培养的皮肤组织基底层有丝分裂S期细胞 ,放射自显影法追踪标记细胞从基底层到颗粒层的表皮通过时间。结果 未受T细胞作用的银屑病皮损表皮通过时间为 ( 4 .5± 2 .1)天 ,较正常人皮肤 ( 11.5± 3 .8)天显著缩短 (P <0 .0 1) ;银屑病外观正常皮肤 ( 8.7± 3 .2 )天与正常人皮肤比较差异无显著性 (P >0 .0 1)。银屑病外观正常皮肤及正常人皮肤分别与银屑病T细胞共培养后 ,表皮通过时间均显著缩短。结论 表皮通过时间缩短 ,表皮周转速率加快是银屑病皮损重要的表皮动力学改变 ,与银屑病皮损形态学改变密切相关 ;银屑病T细胞可以影响正常皮肤的表皮通过时间 ,表明T细胞在银屑病表皮动力学紊乱中发挥重要作用。

心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞胶原合成和增殖

采用心室成纤维细胞条件培养液培养心室成纤维细胞 ,通过测定 [3H] 脯氨酸 ([3H] proline)的掺入率来了解心室成纤维细胞总胶原合成速率 ,通过测定 [3H] 胸腺嘧啶核苷 ([3H] TdR)的掺入率以及c fos基因的表达丰度来了解心室成纤维细胞的增殖速率。结果显示 :心室成纤维细胞条件培养液 (FCGM)能明显增加细胞自身的[3H] proline的掺入率和 [3H] TdR的掺入率 ,并具有剂量依赖性 ;FCGM也能促进细胞自身c fos基因的表达 ,刺激后 1h达高峰。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断FCGM增加成纤维细胞胶原合成和增殖作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。结果提示 :心室成纤维细胞具有自分泌功能 ,能分泌内皮素等生物活性物质 。