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酿酒酵母表达中华绒鳌蟹甲壳肽及其抗菌功能研究
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作者 杜婕 张容彬 +1 位作者 徐浩鹏 周广帅 《当代化工研究》 2021年第22期1-6,共6页
抗菌肽是宿主抵御外来病原入侵时在先天免疫中的重要效应因子。作为一种抗菌蛋白,甲壳动物中的甲壳肽是其先天免疫系统的组成成分。在本研究中,中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)甲壳肽Crustin(以下简称EsCrustin)在酵母真核系统中表达。... 抗菌肽是宿主抵御外来病原入侵时在先天免疫中的重要效应因子。作为一种抗菌蛋白,甲壳动物中的甲壳肽是其先天免疫系统的组成成分。在本研究中,中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)甲壳肽Crustin(以下简称EsCrustin)在酵母真核系统中表达。先将EsCrustin的ORF克隆到质粒载体pHAC181中,然后通过同源重组技术将重组质粒整合到酿酒酵母菌株GAL1-ScRCH1的GAL1启动子下游以启动表达。重组蛋白在其C末端含有3个HA标签,经Westernblot分析表明重组蛋白MrCrustin的分子量约为20kDa。重组蛋白的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)值分别为0.467-0.921μM和0.887-1.135μM。重组蛋白几乎可以凝集除铜绿假单胞菌外的多种革兰氏阴性及阳性细菌。此外,重组蛋白EsCrustin对嗜水气单胞菌有明显的抑制作用,在琼脂平板上出现较大抑菌圈。以上研究结果表明,本研究中酵母表达的重组蛋白对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均表现出抗菌活性。因此,重组蛋白EsCrustin是一种具有杀菌功能的抗菌肽,它在参与甲壳类先天免疫,抵抗病原细菌和病毒的入侵过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 酿酒酵母 真核表达 中华绒鳌蟹 甲壳肽 抗菌功能
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三疣梭子蟹心激肽基因克隆及在低盐适应中的功能验证 被引量:1
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作者 孙东方 吕建建 +3 位作者 高保全 环朋朋 蔡影 刘萍 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期261-270,共10页
采用RACE技术克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)心激肽(CCAP)基因。该基因全长606 bp, 5¢端非编码区72bp,3¢端非编码区108bp,开放阅读框426bp,编码141个氨基酸,预测分子量15.6kD,理论等电点9.55。同源性分析表明,三疣梭子... 采用RACE技术克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)心激肽(CCAP)基因。该基因全长606 bp, 5¢端非编码区72bp,3¢端非编码区108bp,开放阅读框426bp,编码141个氨基酸,预测分子量15.6kD,理论等电点9.55。同源性分析表明,三疣梭子蟹CCAP与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)和蓝蟹(Callinectes sapidus)的CCAP同源性较高,分别为85%和82%。系统进化树分析显示,三疣梭子蟹与蓝蟹首先聚为一支,之后再与拟穴青蟹相聚。组织表达分析发现, CCAP基因在胸神经节中的相对表达量最高,其次是脑和眼柄组织。通过分析CCAP基因在低盐胁迫过程中的表达规律发现,低盐可显著改变CCAP在胸神经节中的表达模式,在24 h, 48 h和72 h实验组的表达量显著高于对照组(P<0.05),分别为对照组的1.73, 2.16和2.19倍。体外注射CCAP多肽可降低三疣梭子蟹在低盐条件下的死亡率,并诱发钠钾ATP酶(Na^+/K^+-ATPase)和V型ATP酶(V-ATPase)酶活力显著提高。本实验结果暗示CCAP通过调控Na^+/K^+-ATPase和V-ATPase活力以达到盐度适应的作用。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 甲壳动物心激 基因克隆 盐度胁迫 注射
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Effects of dietary menadione on the activity of antioxidant enzymes in abalone, Haliotis discus hannai Ino 被引量:4
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作者 FU Jinghua XU Wei +3 位作者 MAI Kangsen ZHANG Wenbing FENG Xiuni LIUFU Zhiguo 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2012年第1期118-123,共6页
A 240-day growth experiment in a re-circulating water system was conducted to investigate the effects of dietary menadione on the growth and antioxidant responses of abalone Haliotis discus hannai Ino. Triplicate grou... A 240-day growth experiment in a re-circulating water system was conducted to investigate the effects of dietary menadione on the growth and antioxidant responses of abalone Haliotis discus hannai Ino. Triplicate groups of juvenile abalone (initial weight: 1.19 ± 0.01 g; shell length: 19.23 ± 0.01 mm) were fed to satiation with 3 semi-purified diets containing 0, 10, and 1 000 mg menadione sodium bisulfite (MSB)/kg, respectively. Results show that there were no significant differences in the rate of weight gain or in the daily increment in shell length of abalone among different treatments. Activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPX), glutathione S-transferase (GST) and glutathione reductase (GR) in viscera were significantly decreased with dietary menadione. However, activities of these enzymes except for GPX in muscle were increased. Therefore, antioxidant responses of abalone were increased in muscle and decreased in viscera by dietary menadione. 展开更多
关键词 MENADIONE antioxidant enzymes Haliotis discus hannai MOLLUSC
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