甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的制备及其对脂质体的稳定作用

采用两步反应法制备脂质体空间稳定膜材料甲氧基聚乙二醇 -磷脂酰乙醇胺 (MPEG- EPE) ,并用以制备空间稳定脂质体 (SL s) ,同时制备不含 MPEG- EPE的传统脂质体 (CL s) ,比较两者放置过程中粒径变化、加乙醇后浊度变化、包封钙黄绿素后在冻干 -再水化过程中的荧光泄漏程度及其与人血浆蛋白的吸附指标 ,评价 MPEG2 0 0 0 - EPE对脂质体的稳定作用。结果表明 ,试验前后 SL s的粒径及浊度变化不大 ,荧光泄漏程度和人血浆蛋白吸附量也远小于 CL s,提示其对脂质体有良好的稳定作用。

甲氧基聚乙二醇2000-氢化大豆磷脂酰乙醇胺的制备及性能探究

本研究以大豆浓缩磷脂为原料,从生产中将卵磷脂(PC)副产物磷脂酰乙醇胺(PE)进行纯化,并在超临界CO_(2)条件下进行氢化,后与聚乙二醇单甲醚2000酰氯培化,得到稳定性高的甲氧基聚乙二醇2000-氢化大豆磷脂酰乙醇胺(MPEG2000-HSPE)。采用95%的乙醇,在料液比为1∶3,温度为-13℃的条件下去除副产物中的残余PC,再用90%的石油醚,在料液比为1∶4,温度为30℃的条件下进行萃取,去除肌醇等其他磷脂,使PE纯度达到91.28%,得率为86.83%。在总压力为11 MPa(CO_(2)分压7 MPa、氢气分压4 MPa),Pd/c催化剂用量为4%,氢化温度为60℃,氢化时间为120 min,搅拌速度为300 r/min时,碘值和反式脂肪酸含量显著降低。当氢化磷脂酰乙醇胺(HSPE)与聚乙二醇单甲醚2000酰氯比例为3.5∶1,三乙胺添加量为3 mL时,反应温度50℃,反应时间4 h,产物转化率为84.63%。通过红外光谱分析发现,发现原料中的—NH_(2)消失,产物中出现—NH基团,产物吸光度为0.631、碘值为23.27 gI/100 g、水-正己烷两相分开10 mL时间为392 s,所得产品分散性好、稳定性高。

甲氧基聚乙二醇-二-硬脂酰磷脂酰乙醇胺长循环脂质体的制备

本实验研究了聚乙二醇磷脂衍生物,-甲氧基聚乙二醇-二-硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG)的合成。同时以DSPE-PEG、卵磷脂和胆固醇为包材,采用薄膜分散-挤压法制备了长循环脂质体。研究了DSPE-PEG脂质体的粒径、载药性能、防止脂质体冻干、复溶过程的融合以及在血液中的半衰期。本实验结果证明DSPE-PEG长循环脂质体提高了药剂在血液中的存留时间,并对脂质体冻干制剂的质量有非常有利的影响。

大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚2000的制备及其性能研究

以聚乙二醇单甲醚2000为原料,先将其氧化为聚乙二醇单甲醚2000羧基衍生物,再制备成高活性的聚乙二醇单甲醚2000酰氯,与磷脂反应制备了大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚2000（MPEG2000-SPE）。产物结构经1HNMR和IR进行了表征。质量比为m（大豆粉末磷脂）∶m（羧基化聚乙二醇单甲醚）=3∶1,产物收率为85.2%;通过TEM观察了产物在水中形成胶束的大小,通过荧光探针技术研究了产物的临界胶束浓度用以表征产物的热力学稳定性,通过乳化力来表征产物的动力学稳定性,试验表明,产物在水溶液中形成的胶束粒径为30～80 nm,临界胶束浓度为2×10^-6mol/L,形成胶束的热力学稳定性优于小分子胶束,产物的动力学稳定性优于大豆粉末磷脂。

两性霉素B聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺胶束的制备与体外评价

目的制备两性霉素B（amphotericin B,AmB）聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺嵌段共聚物（polyethyleneglycol-phosphatidylethanolamine,PEG-PE）载药胶束,并进行体外评价。方法采用薄膜分散法制备AmB载药胶束,分别利用透射电镜、粒径仪和zeta电位分析仪对胶束的形态、粒径和表面电位进行表征。分别采用超速离心法、透析法和吸收光谱法考察载药胶束的载药量与包封率、体外释药行为及AmB在胶束内的聚集状态,并通过溶血试验和微量液基稀释法测定AmB胶束的溶血性及体外抗真菌活性。结果胶束粒子外观圆整且分散良好,粒径在48.28～62.02 nm内,载药量质量分数在16.7%～41.2%内,包封率质量分数在94.4%～99.8%内。胶束的体外释药具有明显缓释特征,释药速率随载药量增加而降低。载药量质量分数低于16.7%时,AmB主要以单体形式在胶束内存在;载药量质量分数高于16.7%时,AmB在胶束内的聚集程度随载药量的增加而增加。与AmB溶液剂相比,AmB胶束的溶血性明显降低,抗真菌活性略有提高。结论 AmB胶束粒径较小且分布较窄,体外缓释特征明显,并可显著降低AmB的溶血性,有望开发成为AmB的新剂型。

磷脂酰聚乙二醇单甲醚的合成及其自组装纳米胶束的研究

以甘油为起始原料,通过苄基保护、加氢还原以及酯化等环节得到一系列含有不同长度PEG、不同脂肪酸的磷脂酰聚乙二醇单甲醚。通过溶剂挥发法制备了mPEG-磷脂胶束,并通过荧光探针法、扫描电子显微镜、透射电子显微镜和粒度及电位分析仪等对其进行了表征。结果表明,制备的磷脂酰聚乙二醇单甲醚胶束,具有明显的核-壳球状结构,粒径分布在100～200 nm;文中报道的磷脂酰聚乙二醇单甲醚的临界胶束浓度都在10-6mol/L,与小分子的表面活性剂相比,CMC值较低,在水中的稳定性增强,其中该磷脂胶束受到环境盐浓度/糖浓度的影响时粒径有不同程度的增大。所合成的磷脂酰聚乙二醇单甲醚自组装纳米胶束结构稳定,对于药物而言是一种较好的纳米载体。

甲氧基聚乙二醇-1,2-二硬脂酰甘油磷酰乙醇胺的合成

以1,2-二硬脂酸甘油酯为原料,依次与三氯氧磷和乙醇胺反应,得到1,2-二硬脂酰甘油磷酰乙醇胺(DSPE),其在N,N’-羰基二咪唑作用下与甲氧基聚乙二醇(mPEG2000)反应,生成甲氧基聚乙二醇2000-1,2-二硬脂酰甘油磷酰乙醇胺(mPEG2000-DSPE)。产物结构经过红外光谱、质谱及核磁氢谱等表征确证。

胰高血糖素样肽-1在乙醇中的聚乙二醇修饰

以乙醇为溶剂,单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)为修饰剂,对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)进行了修饰反应条件的优化,同时对单修饰产物Mono-PEG-GLP-1进行分离纯化,并考察了其体外稳定性和体内活性.得到的优化反应条件为:GLP-1浓度1mg/mL,mPEG-SC与GLP-1摩尔比1:1,37℃下反应24h,该产物最高转化率达77%.采用冷冻离心方式对Mono-PEG-GLP-1进行初步分离和浓缩,然后经反相液相色谱进一步高效纯化,纯度可达97%以上.体外实验表明,Mono-PEG-GLP-1在血清中具有更好的稳定性及更强的抗胰蛋白酶消化能力.体内动物实验表明,Mono-PEG-GLP-1具有更好的降血糖作用.

维甲酸/聚乙二醇磷脂酰乙醇胺胶束的制备及优化

目的制备甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)两亲线型聚合物及其载全反式维甲酸(ATRA)的胶束,通过考察胶束的电位、粒径、包封率进行制备工艺的优化。方法选择多种制备方法及不同药物/聚合物比例制备ATRA胶束。用荧光探针技术测定临界胶束浓度(CMC),动态光散射(DLS)法测定其粒径及电位,紫外分光光度法对胶束的载药等性质进行表征,Sulforhodamine B(SRB)法考察载药聚合物胶束及游离ATRA对Balb/c脑内皮细胞的抑制作用。结果药物/聚合物比例对胶束粒径及包封率的影响显著,在药物/聚合物的比例为1∶20时,胶束的粒径约为100nm,包封率为17.47%。mPEG-DSPE聚合物载ATRA胶束可以明显增加ATRA在水中的溶解度,抑制细胞生长的能力约为游离ATRA的29倍。结论两亲性聚合物mPEG-DSPE的胶束对疏水药物ATRA有良好的装载能力,可以显著增加ATRA的溶解度,聚合物胶束能增强ATRA体外细胞毒作用。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定盐酸多柔比星脂质体注射液中聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺与氢化大豆磷脂酰胆碱的含量

目的本实验主要建立了采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定盐酸多柔比星脂质体注射液中聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(MPEG-DSPE)与氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)含量的分析方法 ,此外还对新型检测器-电喷雾检测器进行了研究和探讨。方法采用Waters Symmetry 300 C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm;孔径:300),以甲醇-四氢呋喃-0.17 mol·L-1乙酸铵(93∶6∶1)为流动相,流速为1.0 m L·min-1,柱温为25℃,进样量为10μL;Alltech 2000ES型ELSD检测器漂移管温度为110℃,载气流速为2.6 L·min-1。结果该法具有较好的专属性;聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺在0.03~0.48 mg·m L-1(r=0.999 8)内校正曲线(lg A^lg C)的线性关系良好,氢化大豆磷脂酰胆碱在0.1~1.0 mg·m L-1(r=0.999 8)内校正曲线(lg A^lg C)的线性关系良好;聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的平均回收率约为100.0%(n=3×3),氢化大豆磷脂酰胆碱的平均回收率约为101.0%(n=3×3);聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和氢化大豆磷脂酰胆碱的最低检出限分别为13和52 ng;聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺重复性和中间精密度分别为0.9%(n=5)和≤1.9%(n=3),氢化大豆磷脂酰胆碱重复性和中间精密度分别为1.1%(n=5)和≤1.3%(n=3)。结论该方法准确、可靠,重复性好,可用于盐酸多柔比星脂质体注射液中聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺与氢化大豆磷脂酰胆碱的含量测定。

聚乙二醇(PEG-5000)对胰激肽释放酶化学修饰的初步研究

以自制单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯对猪胰激肽释放酶进行化学修饰,修饰产物以super-dex G75凝胶色谱柱进行分离纯化。结果表明,修饰PPK分子质量增加,保留活性降低,对温度的耐受性加强,稳定性增加。

聚合物胶束联合给药系统的构建及体外释药研究

目的将化学键合在聚合物胶束聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的氟尿嘧啶(5-FU),与物理包裹于聚合物纳米胶束(PEG-PE)疏水核中的阿霉素(DOX)制备形成联合给药系统,并进行评价。方法以5-FU-PEG-PE聚合物胶束为载体,采用透析法制备阿霉素(DOX)胶束;通过透射电镜、纳米粒度分析仪、紫外分光光度计等测定其形态、粒径、载药量,并考察其体外释放特性。结果阿霉素(DOX)高聚物胶束载药量为1.08%,平均粒径为161.5 nm,聚合物胶束化学键合的5-FU释药速度稳定,无突释现象;物理包裹的DOX释放过程包括突释和缓释,表现出较好的缓释效果。结论 PEG-PE载药胶束是一种缓释性能良好、有应用前景的药物载体。

磷脂酰聚乙二醇单甲醚脂质体的制备及其载药性能

目的制备新型磷脂酰聚乙二醇单甲醚脂质体，并初步考察其载药性能和对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤效果。方法化学合成一系列磷脂酰聚乙二醇单甲醚，应用超声薄膜法制备脂质体和载药脂质体，测定它们的药物包封率和粒径；采用MTT法考察磷脂酰聚乙二醇单甲醚脂质体和载药磷脂酰聚乙二醇单甲醚脂质体对A549细胞增殖的影响；采用共聚焦显微镜观察脂质体在细胞中的定位。结果载紫杉醇脂质体的药物包封率约为83％；粒径范围在100～200nm；MTT实验显示载紫杉醇脂质体能显著抑制A549细胞的增殖并有长循环效果，而脂质体本身并无抑制作用。结论载药磷脂酰聚乙二醇单甲醚脂质体有缓释作用，可以开发成为新型的抗肿瘤药物载体。

HPLC-电雾式检测器(CAD)检测法测定脂质体中磷脂含量

目的建立HPLC-电雾式检测器(Charged Aerosol Detection,CAD)检测脂质体磷脂含量及降解产物的方法。方法选用几种类脂材料制备成空白脂质体注射剂及冻干粉针剂,利用HPLC-CAD测定脂质体磷脂膜中各种类脂的含量,采用反相C8色谱柱,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速1 mL.min-1。结果4种类脂材料的平均回收率分别为99.2%,98.7%,99.5%,99.1%;RSD分别为1.1%,1.5%,0.8%,1.3%。结论实验充分证明了HPLC-电雾式检测器联合应用,可以快速、高效、准确地检测脂质体中的磷脂含量及杂质。

改性大豆磷脂在脂质体制备中的应用研究

以大豆磷脂和聚乙二醇单甲醚2000为原料,制备了大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚2000(SPE-MPEG2000),产物结构经1H NMR和IR进行了表征。采用薄膜分散法制备了含SPEMPEG2000的空间稳定脂质体(SSL),同时制备不含SPE-MPEG2000的普通脂质体(CLs)。通过TEM考察了两种脂质体的形态及粒度分布,测定了粒径及Zeta电位变化,采用紫外分光光度法测定了脂质体加乙醇后的吸光度变化及包封钙黄绿素后的包封率。结果表明:SSL粒子呈类球形,粒径分布较CLs均一且分散性较好;放置前后SSL的粒径及吸光度变化较小,包封率高于CLs,从而说明SPE-MPEG2000对脂质体有良好的稳定作用。

DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体制备及其体内药动学研究

目的制备二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)修饰荷叶碱脂质体,并考察其体内药动学。方法薄膜超声法制备脂质体。以磷脂酰胆碱与胆固醇比例、脂药比、DSPE-mPEG2000用量、水化温度、超声时间为影响因素,单因素试验优化处方,测定包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位、体外释药。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予荷叶碱原料药、不含DSPE-mPEG2000荷叶碱脂质体、DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体的0.5%CMC-Na混悬液(20 mg/kg),于0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h采血,HPLC-MS/MS法测定荷叶碱血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳处方为荷叶碱用量20 mg,磷脂酰胆碱与胆固醇比例5∶1,脂药比12∶1,DSPE-mPEG2000用量30 mg,水化温度40℃,超声时间15 min,平均包封率为71.69%,载药量为4.59%,粒径为161.84 nm,PDI为0.163,Zeta电位为-7.17 mV。DSPE-mPEG2000修饰后,荷叶碱在人工胃液、人工肠液中48 h内累积释放度分别为66.17%、53.90%。与原料药比较,脂质体t_(max)、t_(1/2)延长(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度增加至6.14倍。结论DSPE-mPEG2000修饰脂质体可促进荷叶碱口服吸收。

聚乙二醇琥珀酰亚胺酯修饰牛血红蛋白作为红细胞代用品的条件研究

以单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯(Succinimidyl carbonate methoxy polyethylene glycol,SC-mPEG)为修饰剂对牛血红蛋白(Bovine hemoglobin,BHB)进行了修饰,考察了不同条件下,SC-mPEG与牛血红蛋白反应的产率,并且建立了SC-mPEG-BHB混合物的分析方法。根据不同反应因素对SC-mPEG修饰血红蛋白反应的影响确定了SC-mPEG与牛血红蛋白反应的最佳条件,即SC-mPEG与牛血红蛋白最佳配比为60∶1,在4℃,pH9的缓冲溶液体系反应2h。

聚乙二醇磷脂包裹的聚乳酸羟基乙酸微球防止肺泡巨噬细胞吞噬

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic acid-glycolic acid,PLGA)微球体系在肺部缓控释递药系统中具有独特优势。然而,肺巨噬细胞的吞噬清除极大地限制了药物在肺深部的长期滞留。为规避肺巨噬细胞清除作用,本文设计了一种经聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(polyethylene glycol-distearoyl-glycero-phosphoethanolamine,PEG-DSPE)包裹的PLGA微球,并探究了PEG-DSPE链长及比例对巨噬细胞摄取的影响。以香豆素-6为荧光探针,经膜乳化联合溶剂挥发法制备了各PLGA微球制剂,粒径控制为3~5μm、包封产率大于90%。在细胞液中孵育48 h后,荧光素体外泄漏量低于1.5%,排除了游离荧光素对细胞摄取的干扰。选用鼠源性巨噬细胞RAW264.7进行体外细胞实验。细胞毒性实验表明各制剂对细胞均无毒性。细胞摄取实验结果显示,与未包裹制剂相比,高低比例(PEG-DSPE/PLGA 1∶1、0.25∶1) PEG5000-DSPE、PEG10000-DSPE包裹均可显著减弱巨噬细胞对粒子的吞噬作用。对于PEG2000-DSPE包裹微球,可通过增加PEG在粒子表面的比例达到逃逸巨噬细胞吞噬的效果。综上,PEG-DSPE链长及比例是影响巨噬细胞摄取的关键因素,在肺部缓控释递药系统中,可通过选用高分子量PEG-DSPE (PEG5000-DSPE、PEG10000-DSPE)或高比例(PEG-DSPE/PLGA 1∶1)的PEG2000-DSPE包裹微球,达到逃逸肺巨噬细胞吞噬、延长药物肺内滞留的效果。

mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体的制备及其药动学研究

目的采用甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)修饰紫杉醇脂质体,并考察其在大鼠体内的药动学行为。方法合成两亲线型聚合物mPEG-DSPE;采用薄膜分散法制备mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体;并用HPLC测定紫杉醇在大鼠体内的血药浓度。结果得到的紫杉醇脂质体粒径为(411.8±31.9)nm,包封率为(82.47±2.15)%。紫杉醇注射液和修饰后脂质体的t1/2β分别为1.48和10.48h,后者AUC约为前者的3.13倍。结论mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体具有显著的长循环特性,并可提高其体内的利用度。

去甲斑蝥素纳米胶束的制备及抑瘤作用研究

目的:制备去甲斑蝥素纳米胶束,并研究其抑瘤作用。方法:采用三嵌段共聚物二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺在水中自组装形成去甲斑蝥素纳米胶束。观察所制纳米胶束形态,考察其载药率、包封率、粒径和Zeta电位。通过MTT法考察阴性对照组(磷酸盐缓冲液)、载体组(空白纳米胶束)、阳性对照组(去甲斑蝥素原料药,5~320μg/m L)和去甲斑蝥素纳米胶束组(以去甲斑蝥素计,5~320μg/m L)人肺癌A549细胞在作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞生存率。将荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、去甲斑蝥素注射液组(1 mg/kg)和去甲斑蝥素纳米胶束低、高剂量组(0.5、1 mg/kg),每组6只,每天尾iv相应药物1次,连续8周;每周测量肿瘤的大小,给药结束后第2天检测瘤质量。结果:去甲斑蝥素纳米胶束呈圆球状,载药率为(2.82±0.05)%,包封率为(83.67±1.78)%,粒径为(138.6±45.8)nm,Zeta电位为-(12.75±0.34)m V(n=6);载体组A549细胞生存率无明显变化,阳性对照组和去甲斑蝥素纳米胶束组A549细胞生存率明显降低,与浓度和时间呈正相关,且去甲斑蝥素纳米胶束组细胞生存率降低程度较阳性对照组更明显(P<0.01)。与空白对照组比较,3个给药组裸鼠的瘤质量均减小(P<0.05),其中去甲斑蝥素纳米胶束高剂量组减小程度较去甲斑蝥素注射液组更明显(P<0.05)。结论:成功制得去甲斑蝥素纳米胶束,其对A549细胞具有较好的体内外抑瘤作用。