3′-甲氧基葛根素对大鼠脑缺血保护作用研究

目的:探讨中药葛根提取物3′-甲氧基葛根素(3′-methoxy-puerarin,3′-mo-pue)的脑保护作用,为扩大葛根的应用范围提供实验依据。方法:将动物随机分为假手术组、模型组、葛根素(puerarin,Pue)组和3′-mo-pue组,采用三氯化铁覆着大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO);采用大鼠双侧颈总动脉结扎造成脑缺血再灌模型;观察不同剂量(0.1,0.2,0.4g.kg-1)的3′-mo-pue对脑缺血的影响。结果:3′-mo-pue可不同程度的降低MCAO模型大鼠神经行为学评分、脑梗死范围和脑含水量;显著提高脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和皮层CAT活性;降低脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化脂质(LPO)和乳酸(LD)的含量。结论:3′-mo-pue具有脑保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。

天然产物3′-甲氧基葛根素溶液结构的二维NMR研究

3′ 甲氧基葛根素是从常用中药野生葛根中分离提取出来的一种具有很强生物活性的异黄酮类化合物.该化合物含季碳较多,有些13CNMR的谱峰不易归属.本文利用包括氢检测异核多量子相干谱(HMQC)和氢检测远程异核多量子相干谱(HMBC)等多种二维核磁共振技术对该天然产物的13C和1HNMR谱峰进行了全归属.这些工作有助于利用二维核磁共振技术研究和确定含季碳较多的异黄酮类新化合物的结构和利用扩散相关的核磁共振新技术研究葛根的生理活性成份与靶分子相互作用.

3′-甲氧基葛根素抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用

目的探讨3′-甲氧基葛根素(3-′MOP)在大鼠脑缺血再灌损伤中的神经保护作用。方法24只大鼠随机分为脑缺血再灌组(IR组)、IR+3-′MOP组和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测海马CA1区神经元阳性凋亡细胞数。结果IR+3-′MOP组海马CA1区神经元的损伤减轻,细胞存活数显著多于IR组,而凋亡细胞数显著少于IR组。结论3-′MOP可经抑制凋亡的发生,减轻海马CA1区神经元缺血再灌损伤。

HPLC-DAD同时测定鸢都感冒颗粒中绿原酸、葛根素、3′-甲氧基葛根素和牛蒡苷的含量

目的建立高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)同时测定鸢都感冒颗粒中绿原酸、葛根素、3′-甲氧基葛根素和牛蒡苷的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),0.05%磷酸-乙腈梯度洗脱,柱温40℃。结果绿原酸、葛根素、3′-甲氧基葛根素和牛蒡苷4个组分的进样质量范围分别在0.0039~0.2353μg(r=0.9999)、0.0651~3.9066μg(r=0.9997)、0.0190~1.1404μg(r=0.9998)、0.0522~3.1331μg(r=0.9998)与峰面积呈良好的线性关系;分离度良好;加样回收率分别为99.3%、98.6%,99.4%,99.9%,RSD分别为0.7%,1.3%,1.8%,0.9%。结论方法学验证结果表明本法准确,灵敏度高,重复性好,能为鸢都感冒颗粒全面的质量控制提供参考。

3'-甲氧基葛根素对缺血再灌注大鼠脑内氨基酸动态变化的实验研究

目的:研究脑缺血时3'-甲氧基葛根素对谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸的抑制作用,探讨脑缺血损伤再灌注过程中其对神经损伤的保护机制。方法:制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用脑微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液中的氨基酸类神经递质,并3'-甲氧基葛根素灌胃治疗;HPLC荧光检测用药前后4种氨基酸的含量变化。结果:3'-甲氧基葛根素可降低缺血时脑组织中兴奋性氨基酸Asp,Glu的浓度,同时使抑制性氨基酸Tau,GABA含量明显降低。结论:3'-甲氧基葛根素能降低缺血引起的脑内兴奋性氨基酸的毒性,调节脑内兴奋性氨基酸的含量。因此,该药改善脑内氨基酸的变化状态是改善和保护急性期脑梗死大鼠脑内神经保护作用机制之一。

3-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血及血液流变学的影响

目的:探讨葛根成分3'-甲氧基葛根素(3'-methoxy-puerarin,3'-mo-pue)对脑缺血及血流变的影响。方法:将动物随机分为对照组、模型组、葛根素(puerarin,Pue)组和3'-mo-pue组,采用三氯化铁覆盖大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),观察其对脑缺血的影响;采用皮下注射角叉菜胶10mg/kg造成体内血栓模型,进行血流变分析。结果:3'-mo-pue可显著降低MCAO模型大鼠脑梗死范围;明显降低体内血栓模型大鼠尾部血栓长度、全血粘度、血浆粘度、血小板聚集率,减少纤维蛋白含量。结论:3'-mo-pue具有脑保护作用,其机制可能与改善其血液流变学有关。

3′-甲氧基葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用研究

目的:观察3′-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积、自由基变化的影响,探讨3′-甲氧基葛根素对脑缺血损伤的保护作用。方法:采用线栓法诱导大鼠大脑中动脉栓塞建立局灶性脑缺血再灌注模型,分假手术组、模型组、3′-甲氧基葛根素2个剂量组(5,10 mg.kg-1.d-1)和尼莫地平组(5 mg.kg-1.d-1)。观察行为学的改变,脑梗死体积和测定超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果:3′-甲氧基葛根素具有显著减轻神经功能缺损症状,减少梗死体积,显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质SOD活力和降低MDA含量,其中10 mg.kg-1的3′-甲氧基葛根素作用尤为显著。结论:3′-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

高效液相法测定颐神达络方中葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷的含量

目的建立反相高效液相法测定颐神达络方中葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷含量的方法.方法采用ODS HYPERSIL 色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,乙腈-4‰磷酸水梯度洗脱,检测波长为240 nm,柱温：室温,对葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷的含量进行测定.结果葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷分别在0.152～0.912 μg、0.184～1.104 μg、0.240～1.200 μg、0.142～0.852 μg、0.204～1.224 μg的范围内呈现良好的线性关系,r=0.999 5、0.999 6、0.999 3、0.999 6、0.999 7（n=6）,平均加样回收率分别为100.09%、101.12%、100.69%、100.05%、99.19%,RSD分别为2.00%、2.97%、2.90%、2.95%、1.62%.结论本方法简便、准确、可靠,可以作为颐神达络方有效部位的质量控制方法.

高效液相色谱法测定葛根异黄酮中葛根素的含量

目的 :探讨用高效液相色谱法定量测定葛根素的含量。方法 :色谱柱 大连SpherisorbC18( 10 μm ,4 6mm× 2 50mm) ;流动相 水 (用冰醋酸调至pH3 0 ) 甲醇 ( 80∶2 0 ) ;二极管阵列检测器 ,检测波长 2 50nm。结果 :葛根素与 3' 甲氧基葛根素完全分离。浓度线性范围为 2 0～ 180 μg/ml(r =0 9999) ,平均加样回收率为10 1 7% ,RSD =0 4 3% (n =5)。结论 :本法简便、准确 ,重现性好 ,可用于葛根素的质量控制。

脑脉通有效部位中葛根异黄酮类成分的含量测定

目的:建立脑脉通有效部位中葛根异黄酮类成分的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,流动相为甲醇-水-冰醋酸,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm。结果:葛根素的平均加样回收率为100.89%,RSD=2.10%,芹糖基葛根素的平均加样回收率为100.23%,RSD=1.06%,3′-甲氧基葛根素的平均加样回收率为101.04%,RSD=1.92%,大豆苷的平均加样回收率为99.82%,RSD=2.02%,大豆苷元的平均加样回收率为102.06%,RSD=1.34%。结论:该方法操作简便、易行,可用于脑脉通中葛根异黄酮的含量测定。

葛根通过转录因子EB促进溶酶体生物发生抵抗病毒感染

目的研究葛根Pueraria lobata水提物的体内外抗病毒作用,基于溶酶体生物发生探究其抗病毒作用的细胞学机制。方法CCK-8检测葛根水提物对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响。利用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP)感染A549细胞,荧光显微镜和流式细胞术检测葛根水提物对GFP阳性细胞比例的影响;Western blotting检测葛根水提物对VSV病毒G蛋白表达的影响;qRT-PCR检测葛根水提物对甲型流感病毒(influenza A virus,H1N1)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)、单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)病毒复制的影响。葛根水提物(0.8、1.6 g/kg)治疗H1N1病毒滴鼻感染小鼠,观察记录其对小鼠的生存曲线、体质量变化和肺指数的影响,利用小动物CT、肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察药物治疗对肺组织病理变化的影响;qRT-PCR检测肺组织病毒载量、白细胞介素-6(interleukin-6,Il6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,Tnfα)的基因表达。葛根水提物处理MEF胚胎成纤维细胞并进行转录组测序分析,qRT-PCR检测溶酶体相关基因表达。流式细胞术检测葛根水提物在转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)敲除的鼠永生化骨髓源性巨噬细胞(Tfeb-/-iBMDM)中对GFP阳性细胞比例的影响。结果葛根水提物显著抑制细胞内VSV-GFP病毒复制和VSV病毒G蛋白表达(P<0.001),降低H1N1、EMCV和HSV-1病毒复制(P<0.001)。葛根水提物能够提升H1N1感染小鼠的存活率,降低肺部病毒载量,改善小鼠肺部病变情况。生物信息学分析表明葛根水提物上调溶酶体相关基因表达,并证明葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生抵抗VSV病毒感染(P<0.001)。结论葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生,从而在体内外抑制病毒感染。

HPLC梯度洗脱法同时测定舒心降脂片中8种成分的含量

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定舒心降脂片中羟基红花黄色素A、红花黄色素A、3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml·min^-1,柱温30℃,检测波长分别为:403 nm(检测羟基红花黄色素A和红花黄色素A)、250 nm(检测3'-羟基葛根素、葛根素和3'-甲氧基葛根素)和280 nm(检测隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA)。结果:羟基红花黄色素A、红花黄色素A、3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA分别在4.17~83.40μg·ml^-1,2.86~57.20μg·ml^-1,2.49~49.80μg·ml^-1,8.93~178.60μg·ml^-1,2.26~45.20μg·ml^-1,0.69~13.80μg·ml^-1,4.46~89.20μg·ml^-1和3.67~73.40μg·ml^-1范围内线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率分别为98.86%,99.01%,98.05%,100.05%,97.73%,96.97%,99.76%和98.35%,RSD分别为1.29%,1.13%,0.87%,0.97%,1.31%,1.26%,0.80%和1.44%(n=9)。结论:该方法操作简便、重复性好,可用于评价舒心降脂片的质量控制。

HPLC法同时测定降糖舒胶囊中6种成分

目的建立HPLC法同时测定降糖舒胶囊（刺五加、葛根、人参等）中6种成分的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;以甲醇（A）-0.1%甲酸（B）为流动相,梯度洗脱;体积流量0.9 m L/min;柱温25℃;进样量10μL。结果 3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、刺五加苷B、刺五加苷E、异嗪皮啶分别在9.66～193.20、15.94～318.80、12.32～246.40、3.36～67.20、3.15～63.00、2.18～43.60μg/m L范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率97.31%～99.60%,RSD（n=6）均小于2.0%。结论该方法可为降糖舒胶囊的质量评价提供科学依据。

通脉方中异黄酮类成分清除DPPH自由基的活性研究

目的:通脉方是由葛根、丹参和川芎3味药按质量1∶1∶1组成的复方。本文研究通脉方中3'-羟基葛根素、3'-甲氧基葛根素、3'-甲氧基大豆苷、3'-羟基泰国野葛根素等25种异黄酮类化合物清除DPPH(2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl)自由基的活性。方法:通过DPPH自由基清除实验,对25个异黄酮类化合物的体外抗氧化活性进行测定。结果:体外抗氧化研究表明,通脉方中的3'-羟基葛根素、3'-羟基泰国野葛根素、3'-甲氧基葛根素和3'-甲氧基大豆苷具有清除DPPH自由基的活性,呈浓度依赖性,它们的IC50值分别为(9.9±0.6)、(13.7±1.4)、(57.3±1.2)和(66.4±2.3)μmol·L-1。在同样条件下,阳性对照药丁羟甲苯和抗坏血酸的IC50值分别为(75.4±6.9)和(16.5±1.6)μmol·L-1。结论:本研究结果能够预测3'-羟基葛根素、3'-羟基泰国野葛根素、3'-甲氧基葛根素和3'-甲氧基大豆苷可能是通脉方生物活性物质基础的重要组成部分。

葛根素注射剂杂质研究

目的研究葛根素注射剂的杂质谱,并对杂质进行结构鉴定。方法建立高效液相梯度洗脱法,分析11个厂家共12批次葛根素注射剂杂质谱,利用半制备高效液相对注射剂中的杂质进行分离并结合核磁技术进行杂质结构确认。结果不同生产厂家及批次的葛根素注射剂杂质种类及含量差别明显,共分离并鉴定了注射剂中的5个杂质,分别为3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、染料木素-8-葡萄糖苷、新葛根素B、新葛根素A,均为葛根素异构体或其衍生物。结论采用此方法检出的杂质峰数目较现行方法多,且精密度高、重复性好。通过对葛根素注射剂杂质谱的研究,可以有目的地控制部分杂质,为质量控制研究提供参考。

不同产地粉葛四种异黄酮含量比较

目的：考察不同产地粉葛中葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量,为制定粉葛药材质量标准提供参考依据。方法：采用RP-HPLC法,色谱柱Hypersil C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：乙腈-0.2%磷酸,梯度洗脱;流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长250 nm。结果：葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的线性范围分别为12.4~620ng、1.52~76ng、2.4~120ng、3.28~164 ng,四种成分的平均加样回收率分别为101.1%、99.86%、101.78%、103.39%,RSD分别为1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。结论：该方法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分的含量测定。

芪明颗粒中8种成分的含量测定及聚类分析

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定芪明颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 ml·min-1,检测波长为330 nm(检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、250 nm(检测3’-羟基葛根素、葛根素和3’-甲氧基葛根素)和284 nm(检测决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C)。采用SPSS 26.0统计软件对含量测定结果进行聚类分析。结果:毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、决明子苷B2、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C分别在1.76~35.20μg·ml-1,0.64~12.80μg·ml-1,4.48~89.60μg·ml-1,13.59~271.80μg·ml-1,3.52~70.40μg·ml-1,2.18~43.60μg·ml-1,4.66~93.20μg·ml-1和1.29~25.80μg·ml-1范围内线性关系良好(r≥0.9991);平均加样回收率分别为99.24%,96.85%,99.69%,100.02%,98.89%,99.22%,98.11%和97.64%,RSD分别为0.95%,1.06%,0.81%,0.74%,1.45%,1.34%,1.17%和1.25%(n=9)。10批样品聚类分析为2类。结论:所建立的方法操作简便、重复性好,通过聚类分析提出了含量差异的影响因素,可用于芪明颗粒的质量控制。

葛根药材HPLC指纹图谱与6种成分含量测定研究

目的 建立葛根Pueraria lobate药材HPLC指纹图谱,并测定不同产地葛根中6种成分(3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷元)的含量,为葛根优质药材产地与质量控制提供参考。方法 采用HPLC法,葛根药材30%乙醇提取液的分析采用Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长250 nm;柱温25℃。建立32批葛根药材指纹图谱,并测定不同产地葛根药材6种成分的含量。结果 建立了葛根药材HPLC指纹图谱,共提取出10个共有峰,指认6个共有峰;建立了含量测定方法,并对不同产地来源的32批葛根药材中6种成分含量测定,不同产地葛根质量对比综合评分结果显示河南最高,其次为陕西。结论 建立了葛根HPLC指纹图谱方法,通过对比,各样品与对照图谱相似度均大于0.9,为葛根道地药材质量标准提供整体质量控制依据。结合产地调研信息,可将葛根优质原料药材产地优选为陕西、河南秦岭山脉。

一测多评法测定葛酮通络胶囊中5种成分的含量

目的:研究并建立葛酮通络胶囊中3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷含量的一测多评法。方法:以葛根素为内标物,计算3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷4种成分的相对校正因子,并将该方法的测定结果与传统外标曲线法测定的结果进行比较。结果:3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的相对校正因子分别为0.993、1.054、0.965、1.025;一测多评法与传统方法测定的结果比较,3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的含量无明显差异。结论:经方法学验证,该试验建立的一测多评法可用于葛酮通络胶囊中5种成分含量的同时测定。