2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法运用四唑蓝（MTT）法和彗星电泳法检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制及促凋亡作用；应用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达。结果（1）2-甲氧雌二醇在10～50μM浓度范围内作用72h以及30μM2-甲氧雌二醇在作用24、48、72h后对HL60白血病细胞有增殖抑制作用，这种作用呈时间-剂量依赖关系。（2）2-甲氧雌二醇在作用浓度为10、30、50μM时，HL60白血病细胞凋亡率分别为8．20％、28．20％、45．30％，与阴性对照组（1．00％）差异有统计学意义；30μM2-甲氧雌二醇在作用24、48、72h后，HL60白血病细胞凋亡率分别为3．71％、17．72％、43．58％，48、72h作用时间组与阴性对照组（1．00％）差异有统计学意义。（3）30μM2-甲氧雌二醇作用72h后的细胞，Bcl-2蛋白的表达较对照组显著减少。结论2-甲氧雌二醇具有对HL60白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用，Bcl-2蛋白表达下调在此过程中可能发挥着重要的作用。

2-甲氧雌二醇在早发型子痫前期患者中的表达及临床意义

目的:研究2-甲氧雌二醇(2-ME)在早发型子痫前期患者血清中的表达及其临床意义。方法:选取孕周大于28周并且小于34周、单胎的子痫前期(PE)孕妇。其中早发型轻度PE(轻度组)25例,早发型重度PE(重度组)25例;随机选取同期单胎孕周<34周早产的健康孕妇(对照组)25例作为正常对照组。收集各组临床资料:年龄、孕周、孕产次、收缩压、舒张压、血脂、24h尿蛋白、肾功能、乳酸脱氢酶、D-二聚体等,以及期待治疗时间、新生儿出生体重及Apgar评分等,并加以统计学分析。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组孕妇血清2-ME、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、胎盘生长因子(PIGF)、内皮素-1(ET-1)水平变化;采用硝酸还原酶法测定各组孕妇血清一氧化氮(NO)含量。分析重度组血清2-ME与临床指标及sFlt-1、PIGF、ET-1、NO水平的相关性。结果:重度组孕妇血清2-ME水平(525.3±172.6)pg/ml低于对照组(705.9±157.4)pg/ml;重度组孕妇血清sFlt-1水平(5199.2±584.0)pg/ml高于轻度组(3413.4±619.7)pg/ml和对照组(2940.0±465.4)pg/ml,sFlt-1随病情加重增高明显;轻度组血清PIGF水平(81.5±17.0)pg/ml和重度组(77.4±23.5)pg/ml均低于对照组(110.2±45.0)pg/ml(P<0.01);重度组孕妇血清ET-1水平(67.6±11.2)pg/ml高于轻度组(49.7±11.0)pg/ml和对照组(32.5±7.2)pg/ml。重度组孕妇血清NO水平(48.1±9.3)μmol/L显著低于对照组(74.7±21.9)μmol/L。重度组2-ME水平与收缩压、低密度脂蛋白、甘油三脂、血浆肌酐、尿素氮和24h蛋白尿是呈负相关;与期待治疗时间呈正相关;相关系数r值分别为-0.648(P<0.01),-0.620(P<0.01),-0.649(P<0.01),-0.615(P<0.01),-0.524(P<0.01),-0.587,0.694(P<0.01)。重度组2-ME水平与sFlt-1水平呈负相关,与PIGF、NO水平呈正相关,相关系数r值分别为-0.645(P<0.01),0.511(P<0.01),0.853(P<0.01)。结论:早发型重度子痫前期组孕妇血清中2-ME水平较正常对照组降低;早发型重度子痫前期组孕妇血清中2-ME降低的水平与病情严重程度有关。

2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究

目的:研究2-甲氧雌二醇对子宫蜕膜化基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用醋酸甲基孕酮及双丁酰环磷酸腺苷诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化。诱导成功后,分别加入3个浓度的2-甲氧雌二醇,给药48 h后收集细胞上清液,采用ELISA法测定VEGF分泌情况;同时抽提细胞RNA,Real-Time RT-PCR检测VEGF mRNA水平;免疫细胞化学法测定细胞雌激素受体(ER)的表达。结果:ELISA检测表明1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L浓度的2-ME2均可降低蜕膜化基质细胞分泌VEGF的水平;Real-Time RT-PCR同样支持上述结果;免疫细胞化学结果表明,2-ME2对蜕膜化基质细胞ER表达无影响。结论:2-甲氧雌二醇可降低蜕膜化基质细胞VEGF的表达,但与ER表达不相关。

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法:用MTT法和流式细胞术检测2-ME对HL60的增殖抑制及促凋亡作用,用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达。结果:随着2-ME浓度升高及作用时间延长,HL60细胞增殖明显受抑制(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),当2-ME浓度为50μmol/L时,细胞凋亡率达65.8%;2-ME(30μmol/L)作用72h后,Bcl-2的表达较对照组显著减少(P<0.05)。结论:2-ME对HL60细胞增殖有抑制及促凋亡作用,Bcl-2表达下调在此过程中可能发挥重要作用。

2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响。方法采用流式细胞计数检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制作用。结果随着2-甲氧雌二醇的浓度增高,HL60白血病细胞的增殖受到抑制,对照组凋亡率为(1.2±0.3)%,实验组2-ME210μmol/L为(9.7±2.1)%,2-ME230μmol/L为(11.6±3.0)%,2-ME250μmol/L为(15.8±2.9)%。白血病细胞凋亡明显增加。结论 2-ME对IK60细胞增殖有抑制及促凋亡作用。

2-甲氧雌二醇对人子宫内膜癌细胞凋亡作用的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡作用的影响。方法:将体外培养的人子宫内膜癌细胞株KLE细胞分为实验组和对照组,其中实验组培养液中加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME。通过流式细胞仪(FCM)观察KLE细胞的凋亡率及凋亡基因p53和Bcl-2在诱导细胞凋亡中的作用。结果:实验组2-ME浓度为5．0μM-20．0μM时,出现细胞凋亡率升高,与对照组相比有显著性差异(P<0．05),实验组2-ME浓度达2．0μM以上时p53和Bcl-2阳性表达率与对照组相比明显下降(P<0．05)。结论:2-ME对体外培养的人子宫内膜癌KLE细胞株有促进凋亡作用。

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡以及bcl-2表达的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法运用MTT法和流式细胞术检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制及促凋亡作用，应用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达。结果随着2-ME浓度的升高，各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义（P〈0．01）；HL60细胞增殖明显受到抑制；细胞凋亡率明显增加，且当2-ME浓度为50μmol／L时，细胞凋亡率达65．8％；30μM2-甲氧雌二醇作用72h后的细胞，bcl-2蛋白的表达较对照组显著减少。结论2-甲氧雌二醇具有对HL60白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用，bel-2蛋白表达下调在此过程中可能发挥着重要的作用．

2-甲氧雌二醇对人肺癌细胞的放射增敏作用

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对肺癌细胞A549和GLC-82的放射增敏作用及其对细胞周期的影响,并从分子角度初步探讨2-ME可能的增敏机制。方法:将体外培养的人肺癌细胞A549和GLC-82分为实验组和对照组,其中实验组加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME。通过MTT法定量检测2-ME对2株细胞增殖的抑制作用,集落形成实验测定2-ME对这2株细胞的放射增敏作用,流式细胞术检测细胞周期分布的变化,通过免疫沉淀法检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)活性的改变。结果:分别以2-ME对人肺癌细胞GLC-82和A549的最小有效浓度(0.15625×10-6mol/L和1.25×10-6mol/L)作为放射增敏浓度,均可增加细胞对X线的敏感性,2株细胞存活曲线均见2-ME增敏组比单纯照射组整体下移,D0、Dq值均降低,增敏比:GLC-82细胞为1.98;A549细胞为2.06。细胞周期的检测表明2-ME使细胞周期阻滞于G2/M期,并呈剂量依赖性。2-ME作用后2株细胞CDK2活性均无明显改变。结论:2-ME可通过对细胞周期的调节增加非小细胞肺癌(NSCLC)细胞GLC-82和A549对射线的敏感性。

二甲氧雌二醇对白血病细胞K562增殖、凋亡的作用及其机制

目的:研究二甲氧雌二醇(2-ME)对人白血病细胞K562细胞的增殖、凋亡的作用及其机制。方法:分别以不同浓度的2-ME处理白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用Annexin V和PI双染的流式细胞术检测K562细胞凋亡率,应用凝胶蛋白电泳迁移率分析法EMSA检测K562细胞核内NF-KB蛋白的结合活性变化情况。结果:随着2-ME浓度的升高,各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义(P<0.01);K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当2-ME浓度为8μmol·L^(-1)时,细胞凋亡率达64.3%;同时K562细胞核内NF-kappa B的DNA结合活性明显降低。结论:2-ME可显著抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其凋亡;2-ME诱导K562细胞凋亡的机制与NF-kappa B蛋白信号通路有关。

晚发型子痫前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盘COMT蛋白表达及意义

目的探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)、儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)蛋白在晚发型子痫前期(PE)发病中的作用。方法选取孕周>34周的晚发型PE患者25例(观察组),同期正常单胎妊娠孕妇35例(对照组)。采用全自动酶标仪检测血清及尿液2-ME水平,Western blotting法检测胎盘组织COMT蛋白相对表达量。结果观察组血清、尿液2-ME分别为(595.3±21.8)、(407.8±16.3)pg/m L,对照组分别为(407.8±23.9)、(298.4±18.1)pg/m L;两组比较,P均<0.05。观察组胎盘COMT蛋白相对表达量为1.48±0.66,对照组为1.39±0.58;两组比较,P>0.05。结论晚发型PE患者血清、尿液2-ME水平升高,胎盘COMT蛋白表达无明显变化;2-ME可能是其发病过程中的一种代偿性保护因子,而COMT蛋白可能与晚发型PE的发生关系不大。

2-甲氧雌二醇对胎儿生长受限胎盘血管内皮功能的影响

目的 探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对胎儿生长受限(FGR)胎盘血管内皮功能的影响。方法 选择2019年5月至2020年12月期间南通大学附属妇幼保健院收治的胎儿生长受限(FGR)孕妇66例及健康正常孕检孕妇50例为研究对象,将其分为研究组和健康组。收集并测定研究组与健康组孕妇外周血和脐血2-ME及胎盘组织儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)水平,分析外周血2-ME与脐血2-ME、胎盘组织COMT水平的相关性。将应用不同浓度2-ME(5、10、15μmol/L)处理人胎盘微血管内皮细胞(hPMEC)作为2-ME处理组,处理2d后分别应用CCK-8、Transwell细胞小室及Matrigel胶模型测定细胞增殖、迁移、小管形成,空白对照组则采用等量培养基处理,对测定结果进行统计分析。结果 研究组外周血2-ME水平显著低于健康组(t=11.911,P<0.05),研究组与健康组脐血2-ME水平比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组胎盘组织中COMT水平显著低于健康组(t=10.416,P<0.05)。经Pearson相关性分析显示,外周血2-ME与脐血2-ME、胎盘组织COMT均呈正相关(r分别为0.313、0.628,P<0.05),脐血2-ME与胎盘组织COMT呈正相关(r=0.415,P<0.05)。不同浓度2-ME处理组(5、10、15μmol/L)的hPMEC在24h和48h的细胞抑制率均显著低于空白对照组(F值分别为18.907、18.593,P<0.05),且随着2-ME处理浓度的增加,24h和48h的细胞抑制率均逐渐下降(t=3.166~10.075,P<0.05);不同浓度2-ME处理组(5、10、15μmol/L)的hPMEC迁移细胞数目和血管内皮细胞小管形成度均显著高于空白对照组(F值分别为25.751、42.215,P<0.05),且随着2-ME处理浓度的增加,迁移细胞数目和血管内皮细胞小管形成度均逐渐增加(t=3.607~15.066,P<0.05)。结论 FGR孕妇的2-ME、COMT水平表达异常,且2-ME可以促进胎盘血管内皮细胞增殖、迁移,介导血管形成。

2-甲氧雌二醇对低氧条件下皮肤成纤维细胞自噬水平及纤维化的影响

目的研究2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对低氧条件下人皮肤成纤维细胞自噬水平及纤维化的影响。方法原代培养健康人皮肤成纤维细胞并传代,取第3~6代细胞,在低氧(1%O2)条件下培养。使用2-ME(0、5、10、25μmol/L)和自噬抑制剂Bafilomycin A1(0、5、10、50 nmol/L)干预,采用Western blot法检测I型胶原(collagen typeⅠ)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1alpha,HIF-1α)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62的水平,采用免疫荧光法检测LC3的水平。结果成纤维细胞低氧培养24 h后,HIF-1α、Ⅰ型胶原、CTGF和LC3Ⅱ蛋白质水平显著升高,P62蛋白质水平降低,LC3免疫荧光信号显著增强。Bafilomycin A1干预组成纤维细胞I型胶原和CTGF水平降低,HIF-1α、LC3Ⅱ和P62水平升高,LC3免疫荧光信号增强,该效应呈浓度依赖性。2-ME干预组成纤维细胞HIF-1α、Ⅰ型胶原、CTGF和LC3Ⅱ蛋白质水平降低、P62蛋白质水平升高,LC3免疫荧光信号减弱,该效应呈浓度依赖性。结论低氧条件下2-ME通过下调细胞自噬抑制皮肤成纤维细胞纤维化。

2-甲氧雌二醇对食管癌细胞系的数目、形态、细胞周期以及诱导凋亡方面的作用

2-甲氧雌二醇（2-ME）是体内雌二醇的正常代谢产物之一，大量研究表明2-ME在各种肿瘤和非肿瘤细胞中能够抑制细胞增殖并诱导凋亡，是一种细胞分裂拮抗剂和微管蛋白毒素。因此，这种内源性的雌二醇代谢物有可能是一种潜在的抗癌药物。由于2-ME的作用机制是多方面的，并且随细胞种类的不同而不同，因此本研究的目的是通过检测2-ME对细胞数目、形态、细胞周期以及凋亡诱导等方面的影响来探讨它对食管癌细胞系（WHC03）的作用机制。

2-甲氧雌二醇对鼻咽癌干细胞增殖、迁移及放疗抵抗性的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇(2-ME2)对鼻咽癌干细胞增殖、迁移及放疗抵抗性的影响。方法选取鼻咽癌CNE-2细胞构建鼻咽干细胞模型,采用随机数字表法分为0μmol/L组、4μmol/L组和8μmol/L组。采用CCK-8细胞增殖实验检测各组细胞增殖情况,采用Transwell小室迁移实验检测各组细胞迁移情况,采用克隆形成实验检测细胞放疗抵抗性,采用Western blot检测核因子-κB(NF-κB)p65和低氧诱导因子(HIF-1α)蛋白表达。结果4μmol/L组和8μmol/L组细胞OD值明显低于0μmol/L组(P<0.05);8μmol/L组细胞OD值明显低于4μmol/L组(P<0.05)。4μmol/L组和8μmol/L组穿膜细胞数明显少于0μmol/L组(P<0.05);8μmol/L组穿膜细胞数明显少于4μmol/L组(P<0.05)。4μmol/L组和8μmol/L组细胞0、8 Gy照射后克隆形成能力明显低于0μmol/L组(P<0.05);8μmol/L组细胞0、8 Gy照射后克隆形成能力明显低于4μmol/L组(P<0.05)。4μmol/L组和8μmol/L组细胞NF-κB p65和HIF-1α蛋白表达明显低于0μmol/L组(P<0.05);8μmol/L组细胞NF-κB p65和HIF-1α蛋白表达明显低于4μmol/L组(P<0.05)。结论2-ME2能抑制鼻咽癌干细胞增殖及迁移能力,同时降低其放疗抵抗性,机制可能与其抑制HIF-1/NF-κB信号通路有关,值得进一步研究。

甲氧雌二醇抗肿瘤作用研究进展

目的:对甲氧雌二醇的抗癌作用机理及其应用进行综述。方法:查阅大量文献资料,分类总结。结果:甲氧雌二醇具有抗血管生成、抑制实体瘤生长并促进其凋亡等作用,对多发性骨髓瘤、肉瘤等多种肿瘤均有抗肿瘤活性。结论:甲氧雌二醇是小分子的血管生成抑制剂,具有抗血管生成和抗肿瘤作用,是有发展潜力的抗肿瘤药物。

2-甲氧雌二醇与槲皮素体外联合抗前列腺癌的作用

目的观察2-甲氧雌二醇（2-Methoxyestradiol，2-ME）和槲皮素（quercetin，Que）联合应用对人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3生长的作用，评价Que和2-ME联合用药的体外抗前列腺癌效果并筛选有协同作用的配伍组合。方法用不同浓度Que（0、3．125、6．25、12．5、25、50、100、200μmol／L）和2-ME（0、0．3125、0．625、1．25、2．5、5、10μmol／L）分别处理LNCaP和PC-3细胞，锥虫蓝法计数并计算48h癌细胞生长抑制率和半抑制浓度（IC50）。根据量效曲线与IC50值，分别选择两种药物的适宜浓度按照析因设计组成不同的联用配伍组合。应用不同药物配伍组分别处理LNCaP和PC-3细胞48h，测定细胞生长抑制率，并计算两种药物16个配伍组的联用指数（cI），以评价药物的体外联合抗前列腺癌效果。结果随单用Que或2-ME的浓度增加，其对LNCaP或PC-3细胞的生长抑制率增加。槲皮素和2-ME的IC50值分别为23．29μmol／L和1．89μmol／L（针对LNCaP细胞）；22．12μmol／L和1．74μmol／L（PC-3细胞）。选择Que（5、10、20、40μmoL／L）和2-ME（0．5、1、3、5μmol／L）组成16个配伍组作用于癌细胞48h后，低剂量槲皮素（5和10μmol／L）联合高剂量2-ME（3和5μmol／L）对LNCaP细胞生长表现出协同抑制作用；而对PC-3细胞，除了槲皮素10μmol/L＋2-ME 3μmol／L配伍组外，高剂量的槲皮素（20和40μmol／L）联合高剂量的2-ME（3和5μmol／L）也表现出协同作用。结论Que和2-ME对人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3的生长均具有抑制作用，并剂量相关性，两药合适剂量的配伍组合对前列腺癌细胞的生长抑制具有协同作用。

活性氧在2-甲氧雌二醇诱导骨尤文肉瘤细胞凋亡中的作用

目的研究在2-甲氧雌二醇（2-ME）诱导SK—N—MC尤文肉瘤细胞凋亡的过程中，调控细胞活性氧水平（ROS）的环节及ROS引发的下游事件。方法利用流式细胞仪、clark氧电极等手段及撤药实验、线粒体通透性转换（PT）孔干预等方法检测2-ME作用下凋亡的可逆性及呼吸链活性、线粒体跨膜电势（△ψm）、细胞ROS水平等参数的变化，并考察它们之间的关系。结果2-ME诱导SK—N—MC细胞发生依赖于ROS的细胞凋亡。2-ME作用3h内撤药，至24h无明显凋亡发生；3h后撤药，至24h有明显凋亡。2-ME作用下，线粒体呼吸链活性被抑制，ROS生成加速；△ψm经历“升高-降低”变化，3h时开始降低，PT孔稳定剂可维持△ψm不降低；ROS水平持续升高，3h时有跳跃性增高，胛孔稳定剂对ROS升高趋势无明显影响。结论2-ME作用引起sK—N—MC细胞呼吸链的抑制，引发△ψm的升高，由此造成ROS生成加速及ROS水平升高，当ROS水平突破-定阈值，引发了胛孔的不可逆开放及△ψm的消解乃至崩溃，并最终使细胞走向凋亡。ROS是2-ME诱导凋亡信号传导中的-个环节。

2-甲氧雌二醇对胶质瘤放射敏感性影响实验研究

一、资料与方法 1．主要试剂：2-甲氧雌二醇（2ME），雌二醇（E2）购自美国Sigma公司。 2．细胞培养：人胶质瘤细胞T98G细胞来自于哈尔滨医科大学神经外科研究所，于含10％胎牛血清、10％非必需氨基酸（NEAA）的MEM培养基中培养。