甲状旁腺激素受体1基因相关与原发性牙齿萌出障碍的研究进展

原发性牙齿萌出障碍(PFE)是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病,主要表现为单侧或双侧后牙区开,无明显局部阻碍因素和全身因素,主要与患者牙齿萌出机制异常有关。目前研究认为其病因与甲状旁腺激素受体1(PTH1R)基因突变有密切联系,但其背后的致病机制还有待阐明。本文就与PFE发病相关的热点基因PTH1R信号缺陷与破骨细胞功能、牙囊发育、牙槽骨形成、牙周膜形成、牙根形成的研究现状进行综述,意为PFE的病因遗传学及分子机制的研究提供参考。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响。方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期。结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确。并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因。细胞周期检测提示PTH1R沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期。结论成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用。

甲状旁腺激素受体1在糖尿病合并乳腺浸润性导管癌患者的表达及意义

目的观察甲状旁腺激素受体1(PTH1R)在糖尿病合并乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测32例糖尿病合并乳腺浸润性导管癌患者及71例非糖尿病合并乳腺浸润性导管癌患者组织PTH1R表达,并结合临床预后进行对比分析。结果乳腺浸润性导管癌组织中,糖尿病患者PTH1R阳性表达率高于非糖尿病患者(P<0.05)。PTH1R表达水平随着糖尿病合并乳腺浸润性导管癌患者预后不良而升高。结论糖尿病状态下PTH1R表达水平与乳腺浸润性导管癌预后有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一。

甲状旁腺激素受体1在大鼠颞下颌关节炎髁突软骨中的表达变化研究

目的 研究甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)在大鼠颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)髁突软骨中的表达变化。方法 研究于2022年7月至2023年1月在潍坊医学院动物实验中心和潍坊市口腔生物医学重点实验室进行。选取8周龄健康雄性SD大鼠48只,将大鼠随机分为实验组和对照组,每组各24只。实验组大鼠用咬合升高法构建TMJOA动物模型,并于造模后的第2、4、6、8周分别处死6只大鼠,解剖分离双侧髁突;对照组大鼠仅进行相同时长的张口动作,其余操作与实验组相同。通过苏木精-伊红和番红O-固绿染色,观察大鼠髁突软骨的组织学变化,按照改良Mankin评分系统对大鼠髁突软骨及软骨下骨拍照并评分;再应用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和免疫组化染色,检测大鼠髁突软骨内PTH1R mRNA和蛋白的表达情况。结果 苏木精-伊红和番红O-固绿染色结果显示,所有时间点对照组髁突软骨的组织学形态具有一致性,而实验组颞下颌关节的炎性改变呈现时间依赖性,且Mankin评分随咬合升高时间的延长而增高;qRT-PCR结果显示,第2、4、6、8周,实验组大鼠髁突软骨中PTH1R mRNA的相对表达量均低于相应对照组,差异均有统计学意义(均P <0.001);免疫组化染色结果显示,随着咬合升高时间的延长,实验组大鼠髁突软骨PTH1R染色强度逐渐减弱;且第2、4、6、8周实验组髁突软骨中PTH1R的积分光密度值均低于相应对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05);实验组Mankin评分与PTH1R mRNA相对表达量及积分光密度值均呈负相关关系(均P <0.05)。结论 大鼠颞下颌关节炎进展过程中,PTH1R的表达量逐渐下降,与髁突软骨炎症程度呈负相关关系;PTH1R可能是评估炎症进展状态的指标或治疗TMJOA的重要靶点。

甲状旁腺激素1型受体在肾脏疾病中的研究进展

甲状旁腺激素1型受体(PTH1R)是G蛋白偶联受体家族成员之一,在体内广泛表达,参与体内胚胎发育、钙磷稳态、机体代谢、肿瘤发生等多种过程。PTH1R在肾脏中高度表达,PTH1R的活化可涉及多种复杂机制,参与肾脏疾病的发生、发展,与多种肾脏疾病如糖尿病肾病、肾小球肾炎、急性肾损伤、慢性肾脏病等关系密切。本文就PTH1R功能及其在肾脏疾病中发挥的作用和机制进行综述,深入探讨PTH1R与肾脏疾病的关系和相关机制,以期为肾脏疾病的诊断和治疗提供新思路。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。

高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究

目的阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制。方法应用实时(real time)PCR分别检测0(对照组)、5、15、25mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R-NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25mmol/L葡萄糖处理后PTH1RmRNA水平最高(均P<0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P<0.05,P<0.01及P<0.01)及Bcl-2表达(均P<0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P<0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P<0.01)及Bcl-2表达(P<0.01)增高,而Bax表达(P<0.01)降低。结论高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一。

甲状旁腺激素Ⅰ型受体在预防应力性骨折中的研究进展

甲状旁腺激素Ⅰ型受体(PTH1R)是广泛表达于成骨细胞和骨细胞中的基本细胞因子,在维持骨骼完整、维持骨内平衡、调节钙磷代谢等方面发挥重要作用。PTH1R可通过多种途径调节骨重塑,进而预防应力性骨折的发生。有效预防应力性骨折的发生,对于士兵、运动员等具有重要意义。在此,我们简要综述与预防应力性骨折密切相关的PTH1R的研究进展,以期为应力性骨折的临床预防提供参考。

散发型甲状腺髓样癌中CTn和PTHR1表达与RET突变的分析

目的分析降钙素(CTn)和甲状旁腺激素受体1(PTHR1)在散发型甲状腺髓样癌(SMTC)组织中的表达及其与RET突变的关系。方法采用免疫组化SP法检测SMTC(64例)、结节性甲状腺肿(55例)和正常甲状腺(35例)组织中CTn、PTHR1的表达;PCR直接测序法检测RET突变;分析CTn、PTHR1的表达与临床病理特征和RET突变的关系。结果CTn在SMTC中的阳性率为90.6%(58/64),高于结节性甲状腺肿的78.2%(43/55)和正常甲状腺组织的68.6%(24/35),差异有统计学意义(P<0.05);CTn表达与患者肿瘤大小和淋巴结转移有关(P<0.05)。PTHR1在SMTC、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的阳性率分别为81.3%(52/64)、69.1%(38/55)和60.0%(21/35),差异无统计学意义(P>0.05);PTHR1表达与患者性别、年龄、淋巴结转移及包膜侵犯均无关,仅与肿瘤大小有关(P<0.05)。CTn、PTHR1阳性率与RET突变无关,但RET突变型中,CTn和PTHR1的中等阳性和强阳性率分别为87.5%、70.8%,均高于RET野生型的25.0%、30.0%(P<0.05);CTn和PTHR1表达与RET突变呈正相关(r=0.507、0.364,P<0.05)。结论CTn和PTHR1高表达与SMTC的发生发展有关,且二者表达强度受RET突变的影响,其具体机制尚需进一步研究。

CASR/VDR/PTH1R信号通路在含钙肾结石发生机制中的初步研究

目的研究CASR/VDR/PTH1R通路在含钙肾结石发生中的作用及机制。方法取肾结石患者肾脏髓质为实验组,肾脏肿瘤患者正常肾髓质为对照组,分别采用q-PCR、WB、免疫荧光法检测肾实体组织中CASR、VDR、PTH1R的mRNA表达和蛋白水平。结果CASR、PTH1R基因mRNA在积水肾髓质及肾肿瘤正常髓质表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。VDR基因的mRNA在积水肾髓质及肾肿瘤正常髓质表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论CASR、VDR、PTH1R在肾结石患者肾脏髓质中表达,且有可能通过CASR/VDR/PTH1R信号通路途径参与含钙肾结石的发生机制。

甲状旁腺激素1型受体对骨肉瘤细胞炎症因子和血管生成的影响及其机制研究

目的探讨甲状旁腺激素1型受体(PTHR1)对骨肉瘤细胞炎症因子和血管生成的影响及其机制。方法培养骨肉瘤MG63细胞,分为PTHR1阴性对照组(si-NC组)和PTHR1小干扰RNA组(si-PTHR1组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测si-NC组和si-PTHR1组细胞中PTHR1、血管紧张素原(AGT)mRNA的相对表达水平,采用Western blot检测两组细胞中肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)蛋白的相对表达量,采用血管生成实验检测两组细胞血管生成能力。结果si-NC组MG63细胞中PTHR1、AGT mRNA相对表达量分别为0.94±0.08、1.12±0.11,均大于si-PTHR1组的0.58±0.06、0.55±0.04,差异均有统计学意义(t=6.24、8.44,P值均<0.01)。si-NC组TNF、IL-1β和IL-8蛋白的相对表达量分别为1.18±0.16、1.14±0.13和1.18±0.08,大于si-PTHR1组的0.58±0.04、0.56±0.05、0.52±0.04,差异均有统计学意义(t=6.30、7.21、10.84,P值均<0.01)。si-NC组细胞血管生成率为92.90%±6.42%,大于si-PTHR1组的57.27%±3.10%,差异有统计学意义(t=8.660,P<0.001)。结论下调PTHR1在骨肉瘤细胞中的表达,可以减少骨肉瘤细胞炎症因子的释放和血管生成,其机制可能与下调AGT的表达有关。

骨质疏松症新药——阿巴洛帕肽

阿巴洛帕肽(Abaloparatide)是甲状旁腺激素受体1(PTHR1)的选择性激动剂,于2017年4月28日经美国FDA批准用于治疗骨质疏松症,适用于处于骨折风险或对其他治疗药物无效的绝经后妇女。临床研究表明,阿巴洛帕肽能显著增加骨密度,降低绝经后女性椎体和非椎体新发骨折的发生率和风险。本文对该药的作用机制、药动学特征、临床疗效、安全性、用法用量等方面进行综述,为其临床应用提供参考。

原发性牙齿萌出障碍的研究进展

原发性牙齿萌出障碍(PFE)是一种十分罕见的疾病,它并非由临床检查可发现的局部或全身因素所致,而是由牙齿萌出机制本身出现异常导致的牙齿萌出障碍。PFE常影响恒磨牙,造成严重的后牙开,其诊断和治疗均较为困难。本文就PFE的临床特征、发病机制、临床诊断和治疗等方面的研究进展作一综述。

原发性牙齿萌出障碍(PFE)的研究现状

原发性牙齿萌出障碍(PFE)是一种比较罕见的牙齿萌出异常性疾病,它是由于萌出机制本身异常而导致的牙齿萌出障碍,而非其他局部或全身因素所致.发病机制尚不十分明确,可能与基因突变有关,甲状旁腺激素受体1(PTH1R)突变是已经被证实的病因之一.临床表现以牙齿萌出不全和后牙开牙合为主要特征,正畸牵引无效.因其具有明显的家族聚集性,基因遗传分析是必要的辅助检查手段,对PFE的筛查、诊断和治疗具有重要意义.目前PFE尚无较好的治疗方法,可摘局部义齿、种植义齿和外科手术治疗等是可以参考的治疗手段.该文将从PFE的发病机制、临床特征、诊断和治疗等方面的研究现状作一综述.

原发性萌出障碍(PFE)的变异位点与临床表型的相关性研究

目的对患有原发性萌出障碍(PFE)的患者进行基因检测,确定患者PTH1R基因的变异位点。并从PubMed/Medline数据库收集其他PFE病以增加病例样本量。初步探讨变异位点与临床表型之间的可能关系,并尝试从基因层面对PFE进行分类。对进一步了解PFE发生机制,诊断,分型,及治疗有重要意义。方法选取与我院正畸科就诊并诊断为PFE的患者进行基因学检测,采用外周血提取基因DNA,对甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTHR1)基因使用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术进行扩增。并对编码PTHR1的基因片段进行测序分析。采集PFE患者的临床资料,包括:PFE患者的性别、发生部位、累及牙位、家族史、异常牙齿、骨型。依据PRISMA指南,采用报道PFE研究的PubMed/Medline数据库进行系统搜索:采用以下检索词:"primary failure of tooth eruption"、"primary failure of eruption"、"tooth eruption failure"和"PFE"。对所有采集的资料进行统计分析。根据变异位点所在位置将PFE患者分为三组,分别为:1.外显子组。2.内含子组。3.SNP组。利用统计学方法研究不同组之间与临床表现的关系。结果对诊断为PFE的患者进行临床检查及基因学检测。面断层片示21根方有一颗多生牙;头颅侧位片测量显示ANB=0o(正常值2.7o±2.0o);根据Frazie-Bowers分型标准,该患者为Ⅱ型PFE;DNA测序结果显示其为内含子发生了碱基对的替换;通过PubMed/Medline数据库共识别报道314例PFE患者临床资料的文献17篇。首先,所有PFE患者均有磨牙受累。PFE同时累及磨牙与前磨牙者81例;乳牙受累者38例;家属未受累27例;另有牙齿异常39例。共记录与PFE相关的不同PTH1R基因变异型51个。结论从统计结果上来看,外显子发生突变的患者数量远大于内含子组及SNP组;无论是外显子还是内含子突变,双侧同时受累的概率要远大于单侧受累的概率;外显子突变组中累及双颌的概率远大于单颌受累的概率;外显子组中的患者受累牙范围相对更广,常累及至前磨牙;外显子组中大多数患者有明确家族史。而内含子组及SNP组则受样本量的限制未显示出明显特点。

治疗绝经后骨质疏松症新药——阿巴洛肽(abaloparatide)

阿巴洛肽(abaloparatide)最初由法国Ipsen制药公司研制,授权给美国Radius Health生物制药公司开发,负责在美国上市和销售。阿巴洛肽是人工合成34个氨基酸的多肽,为甲状旁腺激素相关蛋白的类似物,通过选择性激活甲状旁腺素1型受体的信号通路,调节代谢,促进骨骼形成,用于治疗有骨质疏松症风险的绝经后女性。2017年4月28日获美国食品药品管理局(FDA)批准上市,商品名为Tymlos。该文对阿巴洛肽的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

特发性甲状旁腺功能减退症对大鼠牙萌出的影响

目的通过建立特发性甲状旁腺功能减退症(idiopathic hypoparathyroidism,IHP)动物模型,探究生长发育期甲状旁腺功能减退对牙萌出及牙釉质发育的影响,以及IHP影响牙萌出的作用机制。方法选择出生后第7天(postnatal 7,P7;P14、P25、P38含义以此类推)的SD大鼠共48只,采用随机数字表法分为IHP组和假手术组,每组24只,用纳米碳负显影技术对IHP组大鼠行双侧甲状旁腺切除术(parathyroidectomy,PTX),对假手术组大鼠应用同样技术但不行PTX,术后检测大鼠血清钙、磷、甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)浓度,建立IHP模型。P14、P25及P38时分别处死大鼠并收集下颌骨样本,每组每个时点6只,通过显微CT分析下颌第三磨牙根方牙槽骨的骨微结构参数、下颌第三磨牙萌出高度及牙釉质体积。制备组织学石蜡切片,通过免疫组织化学染色检测大鼠第三磨牙周围牙槽骨中成骨标志物Runt相关转录因子2(runt‐related transcription factor 2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)的分布及表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨细胞数量。分离下颌第三磨牙,显微硬度仪检测牙釉质硬度,扫描电镜观察牙釉质显微结构。另收集P14大鼠下颌骨,每组6只,体外分离培养牙囊细胞进行细胞集落形成实验。诱导牙囊细胞成骨向分化后用碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测矿化程度。提取下颌骨组织及牙囊细胞mRNA,实时荧光定量PCR检测与成骨、破骨细胞分化和功能有关的基因及甲状旁腺激素受体-1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)基因的表达。结果通过双侧PTX成功建立大鼠IHP模型,术后IHP组大鼠血清钙及PTH浓度显著降低、血清磷浓度显著升高(P<0.01)。IHP组下颌第三磨牙牙釉质体积[(4.58±0.24)mm^(3)]较假手术组[(5.22±0.46)mm^(3)]显著减小(P<0.05),牙釉质表面釉柱结构排列紊乱,显微硬度[(167.76±21.86)MPa]较假手术组[(223.92±10.94)MPa]显著降低(P<0.01)。IHP组下颌第三磨牙萌出高度显著低于假手术组(P<0.05),根方牙槽骨骨体积分数、骨小梁数量均较假手术组显著减小(P<0.05),根方牙槽骨中RUNX2、OSX蛋白表达均较假手术组显著降低(P<0.05),冠方牙槽骨破骨细胞数量[(3.86±1.07)个]显著低于假手术组[(6.43±1.27)个](P<0.01)。IHP组牙囊细胞增殖活性较假手术组显著降低(P<0.01)。诱导成骨分化后,IHP组牙囊细胞矿化能力较假手术组减弱。与假手术组相比,IHP组下颌骨组织中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达水平均显著降低(P<0.05),核因子κB活化因子配体/骨保护素比值亦显著降低(P<0.01),PTH1R的基因表达显著降低(P<0.05)。同时,IHP组牙囊细胞中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达、核因子κB活化因子配体/骨保护素比值及PTH1R的基因表达也较假手术组显著降低(P<0.01)。结论IHP可能通过抑制PTH/PTH1R信号通路,进而抑制牙囊细胞的增殖及成骨向分化、影响破骨细胞分化及功能,从而使牙萌出过程中牙胚周围牙槽骨的骨改建受阻,最终导致牙齿迟萌。