甲状旁腺激素受体1基因相关与原发性牙齿萌出障碍的研究进展

原发性牙齿萌出障碍(PFE)是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病,主要表现为单侧或双侧后牙区开,无明显局部阻碍因素和全身因素,主要与患者牙齿萌出机制异常有关。目前研究认为其病因与甲状旁腺激素受体1(PTH1R)基因突变有密切联系,但其背后的致病机制还有待阐明。本文就与PFE发病相关的热点基因PTH1R信号缺陷与破骨细胞功能、牙囊发育、牙槽骨形成、牙周膜形成、牙根形成的研究现状进行综述,意为PFE的病因遗传学及分子机制的研究提供参考。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响。方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期。结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确。并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因。细胞周期检测提示PTH1R沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期。结论成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。

乳腺癌雌激素调控基因1在肿瘤中的研究进展

既往研究证实乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)参与激素依赖性肿瘤的发生发展,后续有研究发现GREB1也可参与激素非依赖性肿瘤的病理生理过程。GREB1通过调控细胞增殖、侵袭、转移和耐药等生物学行为,参与肿瘤的发生发展。因此,深入了解GREB1在肿瘤发生发展中的作用机制和功能,可为肿瘤的诊断和治疗提供新方向。

SSTR1基因介导继发性甲状旁腺功能亢进的分子机制研究

目的探讨继发性甲状旁腺功能亢进(sHPT)模型中生长抑素受体1(SSTR1)基因表达的作用机制研究。方法建立sHPT,慢病毒包装SSTR1,分为对照组、sHPT组和SSTR1组。实时定量荧光PCR(qPCR)和蛋白质印迹法测量在大鼠的整个喉部区域中SSTR1和甲状旁腺激素(PTH)水平;免疫印迹法检测PTH水平。蛋白质印迹法在大鼠喉部区域中检测经细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)水平。结果与对照组比较,sHPT组SSTR1 mRNA和蛋白水平降低,PTH水平升高(P<0.05)。与sHPT组比较,SSTR1组SSTR1 mRNA和蛋白水平升高,PTH mRNA和蛋白降低(P<0.05),此外,免疫组化结果显示与sHPT组比较,SSTR1组的PTH水平降低(P<0.05)。与对照组比较,sHPT组ERK1/2水平升高,而过水平降低ERK1/2的水平。结论过表达SSTR1后PTH水平降低,抑制ERK1/2水平,对sHPT的发展具有保护作用。

甲状旁腺激素1型受体在肾脏疾病中的研究进展

甲状旁腺激素1型受体(PTH1R)是G蛋白偶联受体家族成员之一,在体内广泛表达,参与体内胚胎发育、钙磷稳态、机体代谢、肿瘤发生等多种过程。PTH1R在肾脏中高度表达,PTH1R的活化可涉及多种复杂机制,参与肾脏疾病的发生、发展,与多种肾脏疾病如糖尿病肾病、肾小球肾炎、急性肾损伤、慢性肾脏病等关系密切。本文就PTH1R功能及其在肾脏疾病中发挥的作用和机制进行综述,深入探讨PTH1R与肾脏疾病的关系和相关机制,以期为肾脏疾病的诊断和治疗提供新思路。

4个绵羊品种褪黑激素受体1a基因第二外显子PCRR-FLP分析

采用 2种限制性内切核酸酶MnlⅠ和RsaⅠ ,对常年发情的小尾寒羊和湖羊以及季节性发情的多赛特羊和萨福克羊共 14 6只绵羊褪黑激素受体 1a(MTNR1A)基因外显子 2的 82 4bp扩增产物进行PCR RFLP分析。结果表明 :1)MTNR1A基因外显子 2的 6 0 5位碱基处表现出MnlⅠ酶切多态性。小尾寒羊、萨福克羊和湖羊只出现 2种基因型 :AB(30 3bp ,2 36bp/ 6 7bp)、BB(2 36bp/ 6 7bp ,2 36bp/ 6 7bp) ;多赛特羊出现 3种基因型 :AA(30 3bp ,30 3bp)、AB(30 3bp ,2 36bp/ 6 7bp)、BB(2 36bp/ 6 7bp ,2 36bp/ 6 7bp)。 2 )MTNR1A基因外显子 2的 6 0 4位碱基处表现出RsaⅠ酶切多态性。 4个绵羊品种都出现 3种基因型 :AA(2 90bp ,2 90bp)、AB(2 90bp ,2 6 7bp/ 2 3bp)、BB(2 6 7bp/ 2 3bp ,2 6 7bp/ 2 3bp)。 χ2 适合性检验结果表明 ,小尾寒羊和多赛特羊MTNR1A基因第二外显子在MnlⅠ酶切位点没有达到Hardy Weinberg平衡状态 (0 .0 1<P <0 .0 5 ) ,萨福克羊和湖羊MT NR1A基因第二外显子在MnlⅠ酶切位点已经达到Hardy Weinberg平衡状态 (P >0 .0 5 ) ;4个绵羊品种MT NR1A基因第二外显子在RsaⅠ酶切位点都已经达到Hardy Weinberg平衡状态 (P >0 .0 5 )。

黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与猪的毛色

猪的真黑色素与褐黑色素的合成量与分布主要受控于黑素皮质激素受体 1基因。本文综述了该基因的定位、突变与多态检测 ,黑素皮质激素受体的作用机制 ,提出了对黑素皮质激素受体 1基因进一步研究的看法。

实验性单侧前牙反修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

目的探讨实验性单侧前牙反修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)及PTH/PTHrP受体-1(PTH1R)表达的影响。方法在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反关系,2、4、8周后取颞下颌关节(TMJ),苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况。结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多(P<0.01),PTH1R阳性细胞明显减少(P<0.01);实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组(P<0.01),而PTH1R mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一。

褪黑激素受体1A基因外显子2与小尾寒羊高繁殖力的关联

以褪黑激素受体1A(melatonin receptor 1A,MTNR1A)基因为候选基因,通过2种限制性内切酶(MnlⅠ、RsaⅠ),采用PCR-RFLP技术检测MTNR1A基因第2外显子主要序列在高繁殖力绵羊品种小尾寒羊中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明,MTNR1A基因外显子2的605位碱基处表现出MnlⅠ酶切多态性,在小尾寒羊中检测到3种基因型:MM(236 bp/236 bp)、Mm(236 bp/303 bp)、mm(303 bp/303 bp),MM和Mm基因型频率明显高于mm基因型频率。MTNR1A基因外显子2的604位碱基处表现出RsaⅠ酶切多态性,在小尾寒羊中检测到3种基因型:RR(267 bp/267 bp)、Rr(267 bp/290 bp)、rr(290 bp/290 bp),RR和Rr基因型频率明显高于rr基因型频率。复合基因型MMRR、MMRr、MmRR、MmRr的频率明显高于MMrr、mmRR、mmRr的频率,没有检测到mmrr复合基因型。小尾寒羊产羔数在MnlⅠ和RsaⅠ酶切复合基因型之间没有显著差异,但至少携带一个拷贝等位基因M的小尾寒羊比不携带M的具有稍微较高的产羔数,基因型为mm的小尾寒羊产羔数比其他基因型的小尾寒羊平均低0.26只。

人参皂苷Rg_1诱导人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体报告基因表达的作用

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,G-Rg1)对人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体(GR)的调节作用。方法将含有糖皮质激素受体反应元件(GRE)的荧光素酶报告基因的表达质粒载体pGRE-tk-LUC与内参照基因载体质粒pRL-SV40,通过脂质体介导瞬时转染至人肝HL-7702细胞中,利用双荧光素酶报告基因检测系统,观察报告基因的表达变化;利用Western blotting方法检测药物对细胞GR蛋白表达的影响。结果G-Rg1与地塞米松均可诱导pGRF-tk-LUC报告基因表达,且呈剂量依赖性,而且这种诱导作用可以被糖皮质激素受体阻断剂RU486(Mifepristone)所阻断,G-Rg1对细胞GR蛋白表达有显著的抑制作用。结论G-Rg1在体外能够表现出一些类似糖皮质激素样的生物活性,可能是GR的配体。

美洲水貂(Neovison vison)黑素皮质激素受体-1(MC1R)基因序列鉴定及生物信息学分析

旨在探明美洲水貂黑素皮质激素受体-1(Melanocortin-1receptor,MC1R)基因序列结构特征及其对皮毛颜色的调控机制。根据欧洲水貂MC1R基因(GenBank登录号:AB189820)核苷酸序列设计1对特异性引物,利用PCR及克隆技术测定美洲短毛黑水貂MC1R基因完整编码区序列(CDS),并对该序列进行了BLAST比对及生物信息学预测和分析。结果表明,获得的美洲水貂MC1R基因与欧洲水貂相似性为95%,为单一外显子基因,核苷酸序列长度为1 324bp,包括部分5′UTR(188bp)、CDS(954bp)和3′UTR(182bp),编码区碱基G+C含量高达66.04%,由CDS推导共编码317个氨基酸,预测的MC1R蛋白理论分子质量为34.49ku,等电点(PI)为8.97,不稳定系数是36.63,属于弱碱性稳定蛋白质。进一步分析发现,美洲水貂MC1R基因编码的蛋白存在1个低复杂度结构域和7个典型的跨膜区,N-端不存在信号肽,定位于细胞质膜,具有典型的细胞膜受体结构。分子进化分析显示,美洲水貂与欧洲水貂亲缘关系较近,与二者均属鼬科、鼬属动物的传统动物分类学一致。美洲水貂MC1R基因的获取及序列结构特征分析为揭示其皮毛颜色多样性的分子遗传学机制奠定了详细的生物信息学基础。

甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响

目的:探讨甲状旁腺激素(PTH)对大鼠成骨细胞(ROB)的转化生长因子-β1-(TGF-β1)基因转录的影响。方法:ROB被分成3组培养:(1)对照组,在每个培养周期(48h)的前6h和后42h的培养液中均不加PTH;(2)PTH间歇刺激组(间刺组),仅在前6h的培养液中加PTH;(3)PTH持续刺激组(持刺组),前6h和后42h的培养液中均加PTH。第3周期细胞内mRNA含量用RT-PCR测定。结果:第3周期细胞内mRNA含量变化情况为:第6小时以间刺组最高,其余二组相似;第24小时依次是间刺组>对照组>持刺组;第48小时间刺组与对照组相似,持刺组最低。结论:PTH间歇与持续刺激对TGF-β1基因转录均有明显影响,该基因转录增强可能是PTH间歇刺激促成骨机制之一。

乳腺癌组织中雌激素受体与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1表达

目的观察乳腺癌组织中雌激素受体(ER)与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1(P-gp)蛋白表达并探讨其相互关系。方法用免疫组织化学法(S-P法)对162例乳腺癌手术切除标本进行ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)检测,结果作统计学分析。结果ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)的阳性表达率各为53.7%、37.0%和27.7%。ER在分化越高和无腋窝淋巴结转移者的乳腺癌中其阳性表达率高,C-erbB-2在分化越差的乳腺癌中其阳性表达率高,组间相比有显著差异(P<0.05)。在有腋窝淋巴结转移的乳腺癌中C-erbB-2、MDR1(P-gp)表达率明显升高。C-erbB-2与MDR1(P-gp)的阳性表达率间具有一定的正相关性,C-erbB-2表达与ER表达呈负相关。结论ER、C-erbB-2基因、MDR1(P-gp)在乳腺癌中有一定的内在联系,联合检测有助于乳腺癌预后的判断,为合理制定综合治疗方案提供依据。

赤狐黑色素皮质激素受体-1基因结构特征预测及分子进化分析

为进一步分析黑色素皮质激素受体-1(melanocortin-1 receptor,MC1R)基因的分子特性,利用生物信息学方法对Gen-Bank中已报道的赤狐MC1R基因完整编码区序列的碱基组成特点及其编码蛋白的结构特征进行了预测及分析,构建了12个物种MC1R蛋白的系统进化树。结果表明,赤狐MC1R基因编码区序列长度为954bp,共编码317个氨基酸,为单一外显子,G+C含量高于A+T,编码的蛋白质是一种分子质量为34.8694ku,等电点为9.13的亲水性稳定碱性蛋白;存在7个强跨膜区、7个广泛磷酸化位点和1个潜在的蛋白激酶C磷酸化位点(第157位的苏氨酸),α-螺旋为其主要二级结构元件;属于G蛋白偶联受体家族一员,包括多个潜在重要功能基序;同源性分析与分子进化树结果均表明,赤狐与北极狐、狗和貉的亲缘关系最近。

雌激素受体1基因多态性与不明原因复发性流产关系

目的:探究雌激素受体1(ESR1)基因多态性与不明原因复发性自然流产(URSA)关系。方法:选取本院88例URSA患者为URSA组,70例正常者为对照组,采用聚合酶链式反应-限制性片段多态性法检测外周血ESR1基因rs22234693、rs9340799、rs2046210位点多态性,酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)水平,化学发光法检测促卵泡刺激素(FSH)水平;胶体金法检测血清促黄体生成素(LH)水平,Hardy-weinberg遗传平衡定律验证基因型频率;logistic回归分析ESR1基因型与URSA发生风险关系;分析各位点基因型与激素水平关系。结果:URSA组FSH水平高于对照组,E2、LH水平低于对照组(P<0.05)。两组ESR1基因rs22234693、rs9340799、rs2046210位点基因频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。rs22234693位点T等位基因频率、rs9340799位点G等位基因频率、rs2046210位点T等位基因频率均高于对照组(P<0.05)。rs22234693、rs9340799、rs2046210位点突变型者血清E2、LH水平低于对照组(P<0.05)。rs22234693 TT和TC基因携带者发生URSA风险的相对危险度分别为CC等位基因的1.756倍和2.432倍,rs9340799 GG、AG基因携带者的发生URSA风险的相对危险度分别为AA等位基因的1.237倍和1.746倍,rs2046210 TT和TC基因携带者的发生URSA风险的相对危险度分别为CC等位基因的1.354倍和1.824倍。结论:ESR1基因rs22234693、rs9340799、rs2046210位点多态性与URSA发生有关,rs22234693位点C→T突变、rs9340799 A→G突变、rs2046210 C→T突变可增加URSA的发病风险。

内分泌治疗激素受体阳性乳腺癌的效果及其与ESR1基因位点的关系

目的研究内分泌治疗激素受体阳性乳腺癌的效果及其与雌激素受体1基因(ESR1)单核苷酸多态性位点(rs2077647和rs3798759)的关系。方法选择2014年1月—2018年12月于江苏省常熟市第五人民医院收治的86例激素受体阳性乳腺癌患者为研究对象,均接受内分泌治疗,并接受ESR1单核苷酸多态性位点(rs2077647和rs3798759)检测。分析内分泌治疗后短期疗效,并观察其与ESR1单核苷酸多态性位点的关系。结果86例患者内分泌治疗后完全缓解、部分缓解、疾病稳定共45例,均归入ETR组;疾病进展41例,归入ETNR组。ETR组rs2077647位点基因型为CC型者占比显著高于ETNR组(P<0.05),rs3798759位点基因型为TT型者占比显著低于ETNR组(P<0.05),且基因型为TG型者占比显著高于ETNR组(P<0.05)。ETR组rs2077647位点等位基因为C者占比显著高于ETNR组(P<0.05),rs3798759位点等位基因为G者占比显著高于ETNR组(P<0.05)。ESR1基因多态性是患者内分泌治疗效果的独立影响因素(P<0.05)。结论内分泌治疗激素受体阳性乳腺癌后疗效与ESR1单核苷酸多态性位点(rs2077647和rs3798759)密切相关。

分化相关基因1与雌激素受体α在Ⅰ型子宫内膜癌中表达的相关性分析

目的探讨分化相关基因1(NDRG1)在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达及其与雌激素受体(ER)α的相关性。方法采用免疫组织化学方法(ABC法和两步法)检测正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及Ⅰ型子宫内膜癌中NDRG1和ERα的表达。结果NDRG1在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及Ⅰ型子宫内膜癌中的表达率分别为12.5%、52.9%和83.5%,ERα的表达率分别为85.0%、70.6%和42.7%,两种指标在3种子宫内膜中表达率的差异均有统计学意义(P值均<0.01)。在子宫内膜恶性转变过程中,NDRG1的表达逐渐递增,ERα的表达逐渐递减,两者在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论NDRG1及ERα可能均参与Ⅰ型子宫内膜癌的癌变过程。

雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响

背景:雌激素受体β基因参与骨代谢的研究较少,其对骨代谢的具体调节机制仍不清楚。目的:分析雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。方法:实验分3组:空白对照组(即h FOB 1.19,未感染任何反转录病毒)、阴性对照组(即含无效干扰片断雌激素受体β-sh RNA-nc)、最佳RNAi组(即ERβ-sh RNA-3)。将前期最佳RNAi组的雌激素受体β-sh RNA反转录病毒载体感染人成骨细胞,通过抗性筛选并扩大培养,利用MTT法检测雌激素受体β稳定抑制后对细胞增殖的影响;随后在雌激素干预下,通过Western blot技术检测雌激素受体β蛋白表达的稳定抑制效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot技术检测雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。结果与结论:(1)成功筛选出稳定感染ERβ-shR NA-3反转录病毒载体的人成骨细胞,MTT法检测显示雌激素受体β稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响(P>0.05);(2)在雌激素干预下,雌激素受体β蛋白的抑制率为(93.11±0.57)%(P<0.05),且雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1 mR NA和蛋白的上调率分别为(26.65±3.81)%和(23.79±3.76)%,骨形态发生蛋白2 mR NA和蛋白的上调率分别为(16.62±1.71)%和(18.08±3.20)%(均P<0.05);(3)结果提示雌激素受体β可能通过调控转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2的表达在骨代谢中发挥作用。

褪黑激素受体1B及其基因的研究进展

褪黑激素通过与药理学特异性的高亲和性G-蛋白耦联受体相结合来发挥其生物学功能。作者介绍了褪黑激素受体1B的结构和功能,褪黑激素受体1B基因的克隆及基因结构、发育性表达与作用、定位与多态性,并讨论了该基因与繁殖季节性的关系。