绝经后健康妇女甲状旁腺激素基因多态性与骨密度的关系

利用限制性片段长度多态性分析(RFLP)研究北京地区绝经后妇女甲状旁腺激素(PTH)基因多态性与骨密度的关系。筛选健康、无亲缘关系的绝经后妇女185例,应用双能X射线骨密度仪(DEXA)检测腰椎等部位的骨密度,用PCR-RFLP方法检测绝经后妇女的PTH基因型。绝经后健康妇女中bb、Bb、BB三种基因型的分布频率分别为7.56%、28.11%和64.32%。方差分析显示前臂部位骨密度与PTH基因相关。除华氏三角区外,BB基因型各部位的骨密度值均高于Bb、bb基因型。Logistic回归分析结果显示,bb基因型组骨质疏松与正常妇女存在显著差异(P<0.001)。PTH基因中B基因型可能对维持骨量具有一定的作用。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响。方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期。结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确。并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因。细胞周期检测提示PTH1R沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期。结论成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用。

甲状旁腺激素相关蛋白基因mRNA在口腔鳞癌及正常黏膜中的表达及意义

目的探讨甲状旁腺激素相关蛋白基因(parathyroid hormone-like hormone,PTHLH)mRNA在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)黏膜及正常口腔黏膜中的表达及意义。方法选取30例OSCC患者,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测肿瘤组织和自身对照正常口腔黏膜中PTHLH mRNA的表达,SAS6.12统计软件进行χ2检验和t检验。结果PTHLH mRNA在OSCC黏膜和自身对照正常黏膜中表达的阳性率分别为83.0%和36.7%,差异有统计学意义(χ2=11.74,P<0.001)。PTHLH mRNA在OSCC黏膜和自身对照正常黏膜中的表达水平分别为2.38±0.15和0.74±0.10,上调3.02倍,差异有统计学意义(t=49.83,P<0.01)。PTHLH mRNA在OSCC中表达上调与肿瘤临床分期(t=1.60)、病理分化程度(t=1.95)、是否发生颈淋巴结转移(t=1.73)无关,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论OSCC癌变过程中PTHLH mRNA表达水平显著上调,PTHLH基因可能是OSCC的1个靶基因,在OSCC分类诊断中有应用价值。

PTH基因多态性与骨质疏松性骨折的相关性研究

目的探讨甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)基因rs1459015位点多态性与北京地区汉族人群骨质疏松性骨折骨密度的关系。方法研究对象为北京地区无亲缘关系的汉族人群,其中骨质疏松性骨折患者(骨折组)127例,非骨质疏松性骨折患者(对照组)145例。采用SNaPshot法检验PTH基因多态性,双能X线吸收仪测定腰椎L2~4、股骨近端的neck、Ward’s三角、troch和total骨密度,计算两组等位基因频率、基因型频率,分析骨折组和对照组各部位骨密度差异以及骨折组PTH基因多态性与各部位骨密度的关系。结果骨折组A、G等位基因频率19.7%、80.3%,对照组A、G等位基因频率18.6%、81.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。两组AA、AG、GG基因型频率分别为3.9%、31.5%、64.6%和3.4%、30.3%、66.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。骨折组各部位骨密度均低于对照组,除neck骨密度差异外均有统计学意义(P<0.05)。骨折组中GG基因型腰椎骨密度均高于AA、AG基因型(P>0.05)。与AA、GG基因型相比,骨折组AG基因型髋部骨密度较高(P>0.05)。结论PTH基因多态性rs1459015位点与北京地区汉族人群骨质疏松性骨折患者骨密度不相关。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。

原发性萌出障碍(PFE)的变异位点与临床表型的相关性研究

目的对患有原发性萌出障碍(PFE)的患者进行基因检测,确定患者PTH1R基因的变异位点。并从PubMed/Medline数据库收集其他PFE病以增加病例样本量。初步探讨变异位点与临床表型之间的可能关系,并尝试从基因层面对PFE进行分类。对进一步了解PFE发生机制,诊断,分型,及治疗有重要意义。方法选取与我院正畸科就诊并诊断为PFE的患者进行基因学检测,采用外周血提取基因DNA,对甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTHR1)基因使用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术进行扩增。并对编码PTHR1的基因片段进行测序分析。采集PFE患者的临床资料,包括:PFE患者的性别、发生部位、累及牙位、家族史、异常牙齿、骨型。依据PRISMA指南,采用报道PFE研究的PubMed/Medline数据库进行系统搜索:采用以下检索词:"primary failure of tooth eruption"、"primary failure of eruption"、"tooth eruption failure"和"PFE"。对所有采集的资料进行统计分析。根据变异位点所在位置将PFE患者分为三组,分别为:1.外显子组。2.内含子组。3.SNP组。利用统计学方法研究不同组之间与临床表现的关系。结果对诊断为PFE的患者进行临床检查及基因学检测。面断层片示21根方有一颗多生牙;头颅侧位片测量显示ANB=0o(正常值2.7o±2.0o);根据Frazie-Bowers分型标准,该患者为Ⅱ型PFE;DNA测序结果显示其为内含子发生了碱基对的替换;通过PubMed/Medline数据库共识别报道314例PFE患者临床资料的文献17篇。首先,所有PFE患者均有磨牙受累。PFE同时累及磨牙与前磨牙者81例;乳牙受累者38例;家属未受累27例;另有牙齿异常39例。共记录与PFE相关的不同PTH1R基因变异型51个。结论从统计结果上来看,外显子发生突变的患者数量远大于内含子组及SNP组;无论是外显子还是内含子突变,双侧同时受累的概率要远大于单侧受累的概率;外显子突变组中累及双颌的概率远大于单颌受累的概率;外显子组中的患者受累牙范围相对更广,常累及至前磨牙;外显子组中大多数患者有明确家族史。而内含子组及SNP组则受样本量的限制未显示出明显特点。

附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠TGF-β/Smads/Gli2/PTHrP信号通路的影响

目的:研究附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠的保护作用及其作用机制。方法:裸鼠随机分为正常组、模型组、唑来膦酸组、附子-白术药对组,采用左心室注射乳腺癌细胞MDA-MB-231BO法建立骨转移模型,并进行相应干预。观察裸鼠骨转移程度,微计算机断层扫描(Micro-CT)检测裸鼠胫骨矿物质密度(BMD),骨体积(BV),选取感兴趣区域(ROI)体积(TV),计算骨体积分数BV/TV,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)观察骨转移灶中破骨细胞表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测转化生长因子-β_1(TGF-β1),Smad3,Smad4,胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)的表达。结果:与模型组比较,附子-白术药对组骨转移程度显著降低(P<0.01),裸鼠胫骨BMD,BV/TV显著升高(P<0.01),TRAP(+)细胞数量显著减少(P<0.01),骨转移灶中TGF-β_1,Smad3,Gli2和PHTr P表达均显著降低(P<0.01),Smad4表达均明显升高(P<0.05)。结论:附子-白术药对可减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤,其机制可能与其上调Smad4蛋白表达,下调TGF-β1,Smad3,Gli2和PTHr P蛋白表达,调控TGF-β1/Smads/Gli2/PTHr P信号通路有关。