在非小细胞肺癌患者中甲状旁腺激素相关蛋白PTHrP的表达及其临床意义

背景与目的:甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)通常在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中表达,结构与甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)相似,除引起恶性肿瘤高钙血症,还可调节癌细胞的生长、凋亡和肿瘤血管生成,此作用与性激素状态相关。本研究旨在探讨NSCLC患者中PTHrP的表达、PTHrP的表达与性别的关系及其临床意义,为肺癌发病过程中性别角色的研究提供一定的临床依据。方法:用免疫组织化学SP法检测125例NSCLC肿瘤组织、癌旁组织及远端正常组织中PTHrP的表达,分析PTHrP的表达与患者年龄、性别、组织学分型、临床分期、吸烟史及预后的相关性。用Log-rank法比较阳性及阴性患者的生存率。结果:NSCLC肿瘤组织、癌旁组织及远端正常组织中PTHrP的阳性表达率分别是65.6%(82/125)、24%(30/125)和16.8%(21/125),在癌组织中的表达较在癌旁组织和正常对照组织中的表达高(P<0.05)。在女性患者中PTHrP的表达(82.7%)较在男性患者中PTHrP的表达(53.4%)高(P<0.05)。在不同的组织学分型中以腺癌PTHrP的表达高(70.8%),但差异无统计学意义(P=0.359)。女性患者中PTHrP阳性者的中位生存时间是38.62个月,PTHrP阴性者的中位生存时间是20.00个月(P<0.05);男性患者中PTHrP阳性者的中位生存时间是27.14个月,PTHrP阴性者的中位生存时间是25.00个月(P>0.05)。在吸烟者中,PTHrP阳性者的中位生存时间是35.24个月,PTHrP阴性者的中位生存时间是25.00个月(P<0.05);不吸烟者中,PTHrP阳性者的中位生存时间是38.71个月,PTHrP阴性者的中位生存时间是20.00个月(P<0.05)。结论:在NSCLC患者中PTHrP的表达在肿瘤组织中较高,在女性患者中较高,在腺癌中相对较高。女性患者的生存状态与PTHrP的表达有关,PTHrP阳性者的生存率更高;男性患者的生存状态与PTHrP的表达无关。吸烟或不吸烟者的生存状态均与PTHrP的表达有关,PTHrP阳性者的生存率更高。PTHrP的表达可能和女性患者的生存优势有关,在控制了年龄、分期及组织学的影响以后,对女性患者的生存率而言,PTHrP可能是一个有意义的预测指标。

实验性单侧前牙反修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

目的探讨实验性单侧前牙反修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)及PTH/PTHrP受体-1(PTH1R)表达的影响。方法在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反关系,2、4、8周后取颞下颌关节(TMJ),苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况。结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多(P<0.01),PTH1R阳性细胞明显减少(P<0.01);实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组(P<0.01),而PTH1R mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一。

中医不同治法对绝经后骨质疏松症大鼠骨骼、骨骼肌甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)含量影响的比较研究

目的观察补肾、健脾、活血法对骨质疏松症大鼠骨骼、骨骼肌甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)含量变化的影响。方法将SD雌性大鼠分为正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组。采用酶联免疫法测定小鼠骨骼、骨骼肌PTHrP含量变化。结果(1)与正常组比较,模型组大鼠骨骼的PTHrP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,补肾组、健脾组、活血组骨骼的PTHrP含量明显升高(P<0.01),其中补肾组升高程度比较明显。(2)与正常组比较,模型组大鼠骨骼肌的PTHrP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,补肾组、健脾组、活血组骨骼肌的PTHrP含量明显升高(P<0.01),其中健脾组升高程度比较明显。结论 (1)骨质疏松症的形成,可能与骨骼、骨骼肌协调性下降有关。(2)补肾、健脾方法通过提高骨质疏松症大鼠的骨骼、骨骼肌PTHrP含量,对骨质疏松症具有一定的防治作用。

不同咀嚼负荷对幼兔髁突软骨内印度豪猪蛋白-人甲状旁腺激素相关蛋白通路表达的影响

目的分析不同咀嚼负荷作用下,幼兔髁突软骨内印度豪猪蛋白(Ihh)-人甲状旁腺激素相关蛋白(PThrP)通路表达的差异性,探讨咀嚼应力负荷对髁突软骨Ihh-PThrP信号通路的影响。方法选取10d龄幼兔48只,随机分为硬食组和软食组,分别喂以同种颗粒状(硬食)和粉状(软食),于饲养的第2、4、6、8周处死。采用苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学、免疫印迹、实时定量荧光聚合酶链反应检测Ihh和PThrPmRNA和蛋白的动态变化。结果HE染色显示硬食组髁突软骨厚度高于软食组的厚度;第2、4、6、8周,Ihh蛋白、PThrP蛋白和mRNA表达量在两组中呈递减趋势;软食组中Ihh和PThrP蛋白以及mRNA表达量显著低于硬食组。结论较低的咀嚼负荷会造成髁突软骨生长因子Ihh和PThrP分泌减少,Ihh-PThrP通路表达迟缓,软骨发育受阻碍;适当的咀嚼负荷对髁突的正常发育有至关重要的作用。

牵张力作用下甲状旁腺激素相关蛋白对人成骨样细胞增殖的影响

目的研究牵张力作用下甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对人成骨样细胞增殖的影响。方法建立体外培养细胞牵张力施力模型。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PTHrP mRNA的表达及12%牵张应变作用下PTHrP(1nmol/L)对MG-63细胞c-fos mRNA表达的影响。检测不同浓度PTHrP(0、0.01、0.1、1nmol/L)及12%牵张应变联合作用12h后对细胞增殖活性的影响。结果不同牵张力对PTHrP mRNA表达影响的差异具有统计学意义,12%牵张应变组作用的影响最为显著。牵张力联合PTHrP刺激下培养较PTHrP或牵张力的单独效应具有更强的促MG-63增殖作用。牵张力联合PTHrP作用较牵张力的单独效应具有更强的增加MG-63细胞c-fos mRNA表达的作用。结论牵张力可显著影响人成骨样细胞PTHrP mRNA的表达水平。PTHrP在牵张力环境下较牵张力的单独效应具有更强的促MG-63增殖作用。在牵张力环境下PTHrP可能通过c-fos信号传导途径影响成骨细胞增殖。

终末期肾病患者甲状旁腺激素与肌钙蛋白水平的相关性研究

目的探讨终末期肾病(ESRD)患者的肌钙蛋白(c Tn I)与甲状旁腺激素(i PTH)水平的相关性。方法选择我院2014年2月至2015年2月收治的126例终末期肾病患者为ESRD组,其中i PTH>200 ng/L者58例作为治疗组,所有患者均进行心脏彩超检查,治疗组患者接受活性维生素D3冲击治疗;另选同期健康体检者120例为健康组,对三组受检者进行血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血红蛋白(Hb)、血清P物质(P)、血清钙(Ca)、c Tn I、i PTH等生化指标检验,探讨c Tn I、i PTH与心脏结构的相关性。结果 ESRD患者中i PTH升高96例(76.19%),c Tn I升高70例(55.56%);左室肥厚(LVH)88例(73.33%),治疗组LVH患者51例(87.93%);ESRD组与健康组各项生化指标比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后各指标与治疗前比较明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05);肌钙蛋白(c Tn I)与左心室质量(LVMI)呈线性相关性,r=0.223,P<0.05;与肾功能无相关性,r=0.125,P>0.05;i PTH与肾功能损伤程度、LVMI呈线性正相关性,r分别为0.365、0.412,P<0.05;不管治疗与否,i PTH与c Tn I均为持续性正相关性,r分别为0.214,0.369,P<0.05。结论 ESRD患者继发高甲状旁腺激素血症为常见症状,c Tn I上升与LVH也常存在,c Tn I与i PTH呈密切相关性,治疗高甲状旁腺激素血症,可有效改善心肌损伤,利于远期预后。

甲状旁腺激素相关蛋白的临床研究

目的 :探讨慢性肾衰竭 (CRF)患者甲状旁腺激素 (PTH)和甲状旁腺激素相关蛋白 (PTHrP)与中医辨证分型的关系。方法 :采用放免法测定 92例CRF患者和 30例正常人血清PTH和血浆PTHrP含量 ,并按中医辨证分型 ,将CRF患者分为脾肾气虚、脾肾气阴两虚、肝肾阴虚、阴阳两虚四型。结果 :四个不同证型中的血清PTH、血浆PTHrP含量较正常对照组明显升高。结论 :(1)血清PTH可做为慢性肾衰竭中医辨证分型的参考指标 ;(2 )

甲状旁腺激素相关蛋白的研究进展

甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone-relatedprotein,PTHrP）又称甲状旁腺激素类似激素（parathyroid hor-mone-like hormone,PTHLH）,于1987年被发现,由BURTIS等从高钙血症相关的恶性肿瘤组织中分离得出,因其基因结构及生物活性均与甲状旁腺激素（parathyroid hormone,PTH）类似,故称为PTHrP。

鼠源性甲状旁腺激素相关蛋白1～84片段的制备及其促进骨形成的作用

目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。

重组甲状旁腺激素相关蛋白1-36及其在促进牙槽骨骨形成中的作用

目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位(CFU-f)、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。

体外骨对甲状旁腺激素相关蛋白-141的双相反应

目的:通过体外器官培养系统,探讨甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone-related protein,PTHrP)在新骨生成和骨组织破坏方面的效应。方法:将全长PTHrP(-36～+141)cDNA克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+),并用重组质粒pcDNA3.1-PTHrP转染LCC15-MB乳腺癌细胞,在体外器官培养系统里加不同浓度含PTHrP的条件培养上清液培养小鼠颅盖骨。通过组织学方法检测PTHrP141在新骨形成和骨组织破坏方面的效应。结果:转染的乳腺癌细胞产生的PTHrP在低剂量时诱导骨的形成,而高剂量时诱导骨的再吸。结论:PTHrP在新骨的形成和骨组织的破坏方面因其浓度的不同而具有不同效应。

甲状旁腺激素相关蛋白与肺癌及乳腺癌骨转移的相关研究

目的通过放射免疫学(RIA)的方法来研究甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)与实体瘤骨转移的相关性,为临床工作中肿瘤骨转移的诊断与治疗提供新的途径。方法 57例患者中,男28例,女29例;年龄33～76岁,平均年龄61岁。根据CSCO最新发布的2007版《实体瘤(肺癌,乳腺癌)骨转移临床诊疗专家共识》中提出的骨转移的诊断方法对肿瘤患者进行分组。A组为伴发骨转移的肿瘤患者28例;B组为无骨转移的肿瘤患者29例。C组为正常对照31例,为同期健康体检者,年龄35～75岁,平均年龄64岁(均排除肿瘤及甲状旁腺疾病)。通过放射免疫分析法检测血浆中PTHrP水平。结果 A、B、C组PTHrP水平分别为(48±5)pg/100μl,(40±4)pg/100μl,(37±6)pg/100μl。A组的PTHrP值均高于B组与C组,3组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌、乳腺癌骨转移瘤患者体内PTHrP水平明显高于无骨转移及健康者,提示PTHrP与肿瘤骨转移具有一定相关性。

胃腺癌甲状旁腺激素相关蛋白的表达及临床意义

目的探讨甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)在胃腺癌组织的表达以及与分化程度、分期和转移之间的关系。方法应用免疫组织化学链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidasecomplex method,SABC),对60例胃腺癌手术标本(其中低分化17例、中分化28例、高分化15例)进行PTHrP检测,并分析PTHrP表达与胃腺癌组织分化程度、分期和转移之间的关系。结果阳性细胞表现为胞浆染色,主要存在于癌组织和淋巴结转移灶,部分肿瘤间质中亦有一定表达,癌周正常组织无表达。中低分化组阳性率分别为100%(17/17)、100%(28/28),高分化组阳性率为46.7%(7/15),不同分化组之间差异有统计学意义(P<0.01)。不同分期之间阳性率差异无统计学意义。结论胃腺癌组织高表达PTHrP,中低分化组织表达阳性率较高。

慢性肾功能衰竭甲状旁腺激素和甲状旁腺激素相关蛋白的变化及相关性的临床研究

目的 探讨慢性肾功能衰竭 (CRF)患者甲状旁腺激素 (PTH)和甲状旁腺激素相关蛋白 (PTHr P)的关系。方法 采用放免法测定 92例 CRF患者和 30例正常人血清 PTH和血浆 PTHr P含量 ,并按 CRF分期 ,将 CRF患者分为四期。结果 (1 )在慢性肾功能衰竭各个阶段 ,血清 PTH、血浆 PTHr P含量较正常对照组明显升高 (P<0 .0 1 )。 (2 )相关分析显示血清 PTH与血肌酐 (Scr)、血尿素氮 (BUN)、碱性磷酸酶 (AL P)、血压 (BP)存在显著正相关 (P<0 .0 1 ) ,与血红蛋白 (Hb)存在显著负相关 ,与钙 (Ca)、磷 (P)无相关性 (P>0 .0 5)。血浆 PTHr P与Scr、 BUN存在显著正相关 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,与 Ca、 P、 Hb、 ALP、 BP无显著相关性 (P>0 .0 5)。两者与年龄、病程均无显著相关性 (P>0 .0 5)。结论 (1 )血清 PTH含量及血浆 PTHr P均可反映慢性肾功能衰竭的程度 ,其含量随肾功能损害的加重而逐渐升高。 (2 )血清 PTH含量及血浆 PTHr P反映肾功能损伤基本一致 ,但两者与 Ca、P、Hb、ALP、

妇科恶性肿瘤患者甲状旁腺激素相关蛋白与高血钙的相关性研究

目的:探讨妇科恶性肿瘤患者高血钙与甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的相关性。方法:对宫颈癌6例、卵巢癌4例(透明细胞癌3例、卵巢甲状腺肿1例)所致高血钙患者术前进行PTHrP放射免疫测定。结果:血钙与PTHrP呈正相关(Y=2.433 9+0.455X),其相关系数r=0.903,对r进行假设检验,P<0.000 1。结论:PTHrP是妇科恶性肿瘤引起高血钙的主要体液因子之一。

甲状旁腺激素相关蛋白对去卵巢大鼠骨组织中OPG、RANKL基因表达的影响

目的观察不同剂量间歇性注射甲状旁腺激素相关蛋白氨基端片段1-34(PTHrP1-34)对去卵巢大鼠骨密度及股骨RANKL、OPG基因表达的影响。方法4月龄健康雌性未孕Wistar大鼠60只,随机分为6组,假手术组(Sham组)和卵巢切除+安慰剂组(Placebo组)给予生理盐水;卵巢切除+雌激素治疗组(E2组)给予苯甲酸雌二醇注射液;卵巢切除+PTHrP治疗组分别用20、40、80μg/kg剂量,每日1次注射PTHrP1-34。给药12周后,测定腰椎L3～6及股骨BMD,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测大鼠股骨RANKL、OPG基因表达的水平。结果①BMD结果:PTHrP40组和PTHrP80组大鼠股骨、腰椎BMD明显高于Placebo组。②与Sham组相比,Placebo组OPG mRNA明显下降(P<0.01),RANKLmRNA水平则显著升高(P<0.01)。E2组OPG mRNA水平较Placebo组明显升高(P<0.01),RANKLmRNA水平显著下降(P<0.01)。与Placebo组相比,不同剂量PTHrP(1-34)治疗组OPG、RANKL mRNA水平无明显变化(P>0.05)。结论PTHrP1-34 40或80μg/kg每天皮下注射能提高去卵巢大鼠股骨、腰椎BMD,间歇性注射PTHrP(1-34)对去卵巢大鼠骨组织RANKL、OPG mRNA水平无明显影响。

重组人甲状旁腺激素相关蛋白1-141序列的克隆和表达载体构建

目的:构建人甲状旁腺激素相关蛋白1-141(hPTHrP1-141)基因的表达载体。方法:提取人基因组DNA,PCR扩增PTHrP1-141基因,将其克隆入原核表达载体pQE-30Xa,构建重组表达载体pQE-30Xa/hPTHrP1-141。结果:重组载体pQE-30Xa/hPTHrP1-141经限制性核酸内切酶PvuⅡ酶切鉴定,得到符合预期大小的核酸片段。结论:表达载体pQE-30Xa/hPTHrP1-141构建成功。

人A549肺腺癌细胞中甲状旁腺激素相关蛋白的表达及其与性激素状态相关性的研究

目的探讨人A549肺腺癌细胞中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的表达,以及性激素对其表达的影响。方法将人A549肺腺癌细胞培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其雌激素受体(ER)-α、β,雄激素受体(AR),PTHrP mRNA的表达。再分别以不同浓度(0、0.5、1、5、10 nmol/L)的雌二醇和睾酮处理人A549肺腺癌细胞48 h,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测其PTHrP mRNA的表达。结果在人A549肺腺癌细胞中有ERβ-、AR及PTHrP mRNA表达,而ER-α不表达。再以不同浓度的17β-雌二醇及睾酮处理人A549肺腺癌细胞48 h,17β-雌二醇处理后未检测到PTHrP mRNA的表达;浓度为0、0.5、1、5、10 nmol/L睾酮处理后PTHrP的表达量分别为100%、90%、75%、60%、25%。结论人A549肺腺癌细胞中有ERβ-、AR及PTHrP mRNA表达,性激素可调节PTHrP mRNA的分泌,其中AR对PTHrP mRNA起负调节作用。