甲状旁腺激素1型受体在肾脏疾病中的研究进展

甲状旁腺激素1型受体(PTH1R)是G蛋白偶联受体家族成员之一,在体内广泛表达,参与体内胚胎发育、钙磷稳态、机体代谢、肿瘤发生等多种过程。PTH1R在肾脏中高度表达,PTH1R的活化可涉及多种复杂机制,参与肾脏疾病的发生、发展,与多种肾脏疾病如糖尿病肾病、肾小球肾炎、急性肾损伤、慢性肾脏病等关系密切。本文就PTH1R功能及其在肾脏疾病中发挥的作用和机制进行综述,深入探讨PTH1R与肾脏疾病的关系和相关机制,以期为肾脏疾病的诊断和治疗提供新思路。

重组人甲状旁腺激素1-34的氨基酸组成分析

分析重组人甲状旁腺激素 1-3 4的氨基酸组成 ,为该品种的结构鉴定提供依据。水解条件含 1%苯酚的6mol L盐酸 ,10 5℃水解 2 4h ;衍生方法异硫氰酸苯酯 (PITC)柱前衍生法 ;氨基酸测定色谱条件色谱柱为PhenomenexprodigyODS 10 0A。 (4 .6mm× 2 5cm ,5 μm) ;流动相A为 0 .1mol L醋酸钠 (pH6.5 ) -乙腈 (93 :7) ,B为水 -乙腈 (1:4) ;二元梯度洗脱 ;检测波长为 2 5 4nm ;流速为 1ml min ;柱温为 40℃。结果 :实验值与理论值一致 ,偏差小于 10 %。本法准确、可靠、重现性好 ,可用于该产品的质量控制。

重组人甲状旁腺激素1-34多次皮下注射给药的人体药动学特征

目的研究健康志愿者多次皮下注射重组人甲状旁腺激素1-34[(rhPTH(1-34)]后体内的药动学特征。方法8名健康志愿者多次皮下注射rhPTH(1-34)后,采用放射免疫法测定血浆中rhPTH(1-34)浓度,评估它的药动学特性。结果rhPTH(1-34)的主要药动学参数如下:d 1,AUC0→t为(17103.3±2243.3)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20471.3±2444.6)ng.min.L-1,ρmax为(171.2±34.2)ng.L-1,tmax为(38.1±15.1)min,t12为(55.7±3.9)min;d 7,AUC0→t为(17759.6±3781.5)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20698.4±3374.6)ng.min.L-1,ρmax为(184.6±36.8)ng.L-1,tmax为(35.0±16.0)min,t12为(51.6±7.6)min,蓄积系数R为1.02±0.18。结论多次皮下注射rhPTH(1-34)后,与单次给药相比它在人体内的吸收、消除不随连续给药变化,药物在体内没有蓄积作用。rhPTH(1-34)的安全耐受性良好。性别对药动学参数没有影响。

人甲状旁腺激素1-34对大鼠牙本质形成和矿化的影响

目的:观察人甲状旁腺激素1-34(human parathyroid hormone1-34,hPTH1-34)对牙本质的形成和矿化的影响,探讨PTH影响牙本质形成和矿化的机制。方法:切除大鼠甲状旁腺,建立牙本质发育不全的动物模型后,再人工给予不同剂量的hPTH1-34,检测血钙水平的变化,42d后处死大鼠,取下颌切牙制作切片,HE染色,光镜观察并进行图像分析。结果:切除甲状旁腺的大鼠血钙水平下降,牙本质矿化缺陷。在给予hPTH1-34皮下注射后可以检测到血钙水平上调,光镜观察和图像分析结果发现牙本质的形成和矿化发生逆转,10nmol/kg组和20nmol/kg组作用效果优于5nmol/kg组(P<0.05)。结论:PTH可能通过调节血钙或其自身直接作用影响牙本质的形成和矿化。

人甲状旁腺激素1-34对培养的人牙髓细胞PTH-PTHrP受体mRNA表达的影响

目的:观察人甲状旁腺激素1-34(hum an Parathyroid hormone 1-34,hPTH1-34)对PTH-PTHrP(Parathyroid hormone-Parathyroid hormone related prote in)受体mRNA在体外培养的人牙髓细胞中表达的影响,探讨PTH影响牙本质形成和矿化的机制。方法:将培养的第4代牙髓细胞分为两组:实验组培养基加入含33.3 nmol/L hPTH1-34,在其培养的第5,10,15,20天提取总RNA,以RNA为模板在逆转录酶作用下合成cDNA,加入特异引物进行PCR扩增,同时扩增β-肌动蛋白的cDNA作为半定量RT-PCR的内参照,对PCR产物进行半定量分析。结果:在人牙髓细胞培养的5、10 d,对照组和实验组的PTH-PTHrP受体mRNA水平均较低,10 d以后PTH-PTHrP受体mRNA水平开始升高,实验组高于对照组,差异有统计学意义。结论:PTH-PTHrP受体的表达与牙髓细胞的分化密切相关;hPTH1-34可以促进PTH-PTHrP受体的表达,PTH可能通过促进PTH-PTHrP受体的表达或与PTH-PTHrP受体结合影响牙本质的形成和矿化。

甲状旁腺激素1-34、阿仑膦酸钠、辛伐他汀治疗大鼠骨质疏松效果的比较

背景:在应用骨吸收类药物治疗骨质疏松性骨折尚存争议的背景下,对新型药物尤其是促进骨形成类药物的开发显得愈发重要和迫切。目的:比较甲状旁腺激素1-34、阿仑膦酸钠、辛伐他汀对卵巢切除大鼠骨丢失的作用。方法:3月龄雌性SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只,除假手术组外,其余大鼠接受双侧卵巢切除术,术后3个月开始分别给予安慰剂(卵巢切除+安慰剂组)、甲状旁腺激素1-34(20μg/kg,5 d/周,卵巢切除+甲状旁腺激素组)、阿仑膦酸钠[70μg/(kg·周),卵巢切除+阿仑膦酸钠组]、辛伐他汀[5 mg/(kg·d),卵巢切除+辛伐他汀组],3个月后处死大鼠,双能X射线法检测大鼠L4腰椎骨密度、骨组织形态计量学分析其松质骨骨量和微观结构,取L5腰椎行压缩试验,分析其最大载荷、弹性模量等生物力学性能。结果与结论:(1)骨密度:各组骨密度由高到低依次为卵巢切除+甲状旁腺激素组、假手术组、卵巢切除+阿仑膦酸钠组、卵巢切除+辛伐他汀组和卵巢切除+安慰剂组,除卵巢切除+甲状旁腺激素组与假手术组无显著差别外,任意2组间比较均差异有显著性意义(P<0.05);(2)骨组织形态计量学分析:卵巢切除+安慰剂骨小梁相对体积显著低于其余各组,卵巢切除+甲状旁腺激素组显著高于卵巢切除+阿仑膦酸钠组和卵巢切除+辛伐他汀组;(3)生物力学性能:卵巢切除+安慰剂组显著低于其余各组,假手术组和卵巢切除+甲状旁腺激素组显著高于卵巢切除+辛伐他汀和卵巢切除+阿仑膦酸钠组。(4)结果说明,研究采用的剂量和干预周期下,3种药物对去卵巢大鼠骨质疏松的疗效由大到小依次为甲状旁腺激素1-34、阿仑膦酸钠、辛伐他汀。

重组人甲状旁腺激素1-34对豚鼠骨关节炎的改善作用

目的:评估重组人甲状旁腺激素1-34(PTH1-34)对豚鼠自发性骨关节炎的作用。方法:采用6月或10月龄豚鼠,每天皮下注射生理盐水或PTH1-34或复泰奥3个月,考察II型胶原C端肽CTX-2、骨钙素OC、组织病理学OARSI评分、骨体积分数BV/TV及骨小梁模式因子Tb.pf等指标。结果:6月龄豚鼠给药后,PTH1-34或复泰奥可降低CTX-2水平、OARSI评分、Tb.pf,提高BV/TV,对豚鼠骨关节炎有改善作用;PTH1-34 30及60 mg/kg改善明显,停药1个月后30 mg/kg组仍可见明显骨改善。10月龄豚鼠PTH1-34给药后雌性动物Tb.pf明显低于对照,认为存在骨改善。结论:PTH1-34对6月龄豚鼠骨关节炎有明显改善作用,对10月龄豚鼠也有一定程度骨质量改善。

重组人甲状旁腺激素1-34的纯化研究

重组人甲状旁腺激素(rhPTH(1-34))在工程菌pET(32a+)-PTH(1-34)/BL21(DE3)中以胞内可溶性融合蛋白形式高效表达。经过高压匀浆破菌处理,取上清经过亲和层析、酶切、阴离子交换层析、反相层析和阳离子交换层析进行分离纯化,得到rhPTH(1-34)原液样品纯度在98%以上,比活性达到1.05×104U/mg。

甲状旁腺激素(1-34)对老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者的疗效

目的:探究甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉在老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者中的临床疗效。方法:选取2020年7月至2021年7月济源市人民医院收治的老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者80例,随机分为观察组和对照组,各40例。对照组患者给予空心钉治疗,观察组患者采用甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉治疗。观察并比较两组患者骨折愈合时间、出院时间、疼痛评分、髋关节功能评分、骨密度水平及生活质量评分。结果:观察组患者骨折愈合时间、出院时间短于对照组,疼痛评分低于对照组,髋关节功能评分及骨密度水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉治疗方案应用于老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者可获得较好的临床疗效,相较于单用空心钉治疗,患者康复的时间更短,治疗后疼痛症状缓解显著,髋关节功能及骨密度水平改善效果好。

甲状旁腺激素受体1基因相关与原发性牙齿萌出障碍的研究进展

原发性牙齿萌出障碍(PFE)是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病,主要表现为单侧或双侧后牙区开,无明显局部阻碍因素和全身因素,主要与患者牙齿萌出机制异常有关。目前研究认为其病因与甲状旁腺激素受体1(PTH1R)基因突变有密切联系,但其背后的致病机制还有待阐明。本文就与PFE发病相关的热点基因PTH1R信号缺陷与破骨细胞功能、牙囊发育、牙槽骨形成、牙周膜形成、牙根形成的研究现状进行综述,意为PFE的病因遗传学及分子机制的研究提供参考。

人甲状旁腺激素片断1-34对去卵巢大鼠骨量和骨生物力学特性的作用

目的探讨人甲状旁腺激素1-34[human parathyroid hormone(1-34),hPTH1-34]对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法 分别予去卵巢6周的Wister大鼠hPTH1-34(40μg·kg-1·d-1,sc每周5次)或生理盐水干预8周,假手术大鼠不予治疗。留取 腰椎1-6(L1-6)、右侧股骨及血、尿标本分别进行骨密度、骨生物力学和生化指标的测定。结果 hPTH1-34组L1-6、股骨远端和股 骨干骨密度值明显高于去卵巢对照组,且L1-6和股骨干的骨密度值与假手术组无差异;凹入试验中hPTH1-34组Can．Load和 Can．Stiff明显高于去卵巢对照组,和假手术组无差异;三点弯曲实验中hPTH1-34组E．Modulus值与对照组无统计学差异;hPTH1-34 组血ALP和UDpd／Cr水平低于去卵巢对照组,但高于假手术组。结论 hPTH1-34可以明显增加去卵巢骨质疏松大鼠的骨量和 骨生物力学特性。

胰岛素样生长因子-1对甲状旁腺激素介导成骨细胞增殖及成骨活性的影响

目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,并观察其形态及功能,以原代培养乳鼠成骨细胞为实验模型,分空白组、PTH组、IGF-1组及不同浓度IGF-1作用的PTH介导的成骨细胞组(0、10、50、100 ng/L)。通过不同剂量的胰岛素样生长因子-1(0、10、50、100 ng/L)联合10-9mol/L重组人甲状旁腺素刺激体外培养的成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,RT-PCR法检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 PTH和IGF-1均可促进成骨细胞增殖;IGF-1联合PTH可以促进成骨细胞增殖,且具有剂量依赖性。PTH联合IGF-1使成骨细胞增殖能力增强、I型胶原蛋白mRNA表达增强。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。结论 PTH与IGF-1均可刺激成骨细胞增殖和分化,IGF-1可促进PTH对成骨细胞的分化、增殖。两者合用其作用增强,有协同促进作用。

甲状旁腺激素1-34通过Wnt/β-catenin信号通路阻断晚期糖基化终末产物对骨髓间充质干细胞负性成骨作用

目的观察甲状旁腺激素(PTH)1-34是否可以阻断晚期糖基化终末产物(AGEs)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的负性成骨作用及其可能信号通路。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs,分别给予成骨诱导液、牛血清血蛋白(BSA)、AGEs、AGEs联合PTH1-34预处理,7 d后行实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原酶(COL-Ⅰ)mRNA表达水平,Western印迹法检测β-catenin、osterix(OSX)、核心结合蛋白因子2(RUNX2)、终末期氨基糖基化受体蛋白表达水平。21 d后采用茜素红染色检测矿化结节并定量;在10-8 mmol/L的PTH1-34中加入Wnt通路特异性阻断剂Dickkopf-1(DKK1)1μg/ml后,Western印迹法再次检测β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达水平。结果AGEs抑制ALP、COL-ⅠmRNA及β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达(P<0.05),而PTH1-34预处理后逆转AGEs的作用,ALP、COL-ⅠmRNA及β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达较AGEs组增加(P<0.05),茜素红染色矿化结节呈红棕色且增多,定量检测OD值,PTH1-34预处理组高于AGEs组(P<0.05)。DKK1(1μg/ml)作用后,β-catenin、OSX蛋白表达均较BSA组减少(P<0.05)。结论PTH1-34可通过Wnt/β-catenin信号通路阻断AGEs对BMSCs的负性成骨作用。

HPLC法测定甲状旁腺激素1-34原料药中有关物质的含量

目的:建立测定甲状旁腺激素1-34原料药中有关物质含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18,流动相为0.05mo·lL-1氯化钾水溶液(磷酸调节pH至4.5)-乙腈=75∶25,流速为1.0mL·min-1,检测波长为210nm,柱温为室温,进样量为20μL;以主成分自身对照法计算有关物质的含量。结果:甲状旁腺激素1-34与杂质能完全分离,其有关物质检测浓度线性范围为5～50μg·mL-1(r=0.99996);3批样品中有关物质含量均小于0.29%。结论:所建立的方法简便、准确、灵敏度高、专属性强,可用于甲状旁腺激素1-34原料药中有关物质的含量测定。

甲状旁腺激素1-34和雷奈酸锶联合使用对去势大鼠骨质疏松症影响的研究

目的研究联合使用甲状旁腺激素1-34(PTH)和雷奈酸锶(SR)对去势大鼠骨质疏松症的影响。方法 50只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=5)及双侧去卵巢手术组(OVX组,n=45),正常情况下饲养12周后,随机取5只OVX组大鼠和5只Sham组大鼠处死,取胫骨检查骨质疏松模型的建立情况。随后剩下的40只OVX组大鼠随机平均分成4组(10只/组):OVX对照组、SR组、PTH组和PTH+SR组;SR组、PTH组和PTH+SR组分别给予SR灌胃(625 mg/kg,每周5次)、PTH皮下注射(20μg/kg,每天1次)和相同剂量的SR灌胃及PTH皮下注射。药物治疗8周后将所有大鼠处死取胫骨行骨密度及微观参数检测,最大载荷及弹性模量的测定和血清P1NP、CTX-1含量的测定。结果骨质疏松大鼠模型建立成功。与OVX对照组相比,SR组、PTH组和PTH+SR组各组大鼠胫骨骨密度显著增加,骨小梁数量增加,差异均有显著性意义,P<0.05。与OVX对照组比较,SR、PTH及PTH+SR组的Tb.N、Tb.Th、BV/TV及conn.D明显增加,Tb.Sp明显降低,差异有显著性意义,P<0.05。SR组、PTH组和PTH+SR组的胫骨最大载荷及刚度值均高于OVX对照组;与OVX对照组比较,SR、PTH及PTH+SR组大鼠血清中P1NP表达量增加,而CTX-1表达降低,差异有显著性意义,P<0.05。结论联合使用PTH和SR可以明显增强去势大鼠成骨活性,增加其骨密度,增强骨强度,对去势大鼠骨质疏松症的治疗有叠加作用。

甲状旁腺激素(1-34)对老年骨质疏松性肱骨近端骨折术后影响的临床研究

目的分析PTH在老年骨质疏松性肱骨近端骨折术后患者中的应用。方法选取老年骨质疏松性肱骨近端骨折患者100例,将100例患者随机分为治疗组(n=50)和对照组(n=50)。治疗组在锁定钢板内固定手术后加用PTH,对照组仅予锁定钢板内固定手术。对比分析治疗组与对照组术后各项指标差异,分析锁定钢板内固定手术联合PTH在骨质疏松性肱骨近端骨折老年患者中的应用。结果术后1周、2周时2组患者疼痛情况比较,治疗组NRS评分明显低于对照组(P<0.05),随访12个月时治疗组患者肩关节功能恢复情况明显优于对照组(P<0.05),治疗组术后并发症发生率明显低于对照组(P<0.05),治疗组骨折愈合时间、骨痂出现时间、住院时间及肿胀消退时间均短于对照组(P<0.05)。结论 PTH对老年骨质疏松性肱骨近端骨折患者术后安全有效,能够有效减轻患者疼痛,缩短病程,改善患者肩关节功能,降低术后并发症的发生率。

重组人甲状旁腺激素(1-34)对体外培养成骨细胞骨形成的作用

目的 体外观察重组人甲状旁腺激素[recombinant human parathyroid hormone（1-34），rhPTH（1-34）]对成骨细胞骨形成的刺激作用。方法采用酶消化法分离获得大鼠成骨细胞，间隙加药方法给予rhPTH（1-34），观察药物对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。结果 10^-12～10^-8mol／L浓度对成骨细胞的增殖、分化和矿化功能均显示刺激作用。10^-11～10^-8mol／L浓度组的MTT、ALP的A值及矿化结节形态计量结果与对照组比较，具有显著性增加（P〈0．05），增加率以10^-9mol／L浓度组为最高，并呈剂量一效应关系。结论 rhPTH（1-34）对体外培养成骨细胞的增殖、分化和矿化功能具有明显促进作用。

甲状旁腺激素(1-34)和阿仑膦酸钠治疗骨质疏松症合并类风湿关节炎疗效的对比研究

目的比较甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)和阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)治疗骨质疏松症合并类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)女性患者的疗效。方法选取98例于2017年2月至2017年11月在我院就诊诊断为骨质疏松症合并RA的绝经后女性患者。按照治疗方案将患者分为PTH组和ALN组,两组患者分别接受特立帕肽或阿仑膦酸钠治疗,观察治疗6个月后两组患者骨密度和骨代谢指标的改变。结果在两组治疗6个月后,腰椎的骨密度较治疗前均有显著增加(P<0.05)。与ALN组相比,PTH组治疗6个月腰椎骨密度的平均变化百分比显然更高;而股骨颈骨密度仅在PTH组显著增加。结论甲状旁腺激素(1-34)在短期治疗骨质疏松症合并类风湿女性患者时,效果较阿仑膦酸钠更佳。

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响。方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期。结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确。并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因。细胞周期检测提示PTH1R沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期。结论成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用。

重组人甲状旁腺激素(1-34)片段促进动物骨折愈合的研究

目的:通过实验动物骨折模型观察重组人甲状旁腺激素(1-34)片段[rhPTH(1-34)]促进动物骨折愈合作用,并初步探讨rhPTH(1-34)的作用机制。方法:制备日本大耳白家兔标准骨折模型,随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,高、中、低剂量组皮下间歇注射不同剂量的rhPTH(1-34)。检测血清骨特异性碱性磷酸酶(bAKP)、骨保护素(OPG)、骨钙素(BGP)、白介素-6(IL-6)指标,同时进行病理组织形态学及骨组织形态计量学观察。结果:X线片和组织学结果显示,与对照组相比,rhPTH(1-34)各组骨折愈合速度加快,骨形成活跃。rhPTH(1-34)各组在术后1周后,血清bAKP均明显升高(P<0.05)。随后高剂量组bAKP仍呈上升趋势,其余各组随骨折愈合而逐渐下降至正常水平。除低剂量组外,其他实验各组血清OPG水平在2周达到最高值,随后除高剂量组外,也相对维持在高的水平。实验各组术后IL-6水平均比术前有一定程度的升高,术后4周对照组升高尤为显著。结论:rhPTH(1-34)可以促进兔骨折早期愈合,促进骨形成并且可抑制骨吸收。