目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确...目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。展开更多
目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和...目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位(CFU-f)、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。展开更多
目的 ：探讨半枝莲总黄酮类提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 ：体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞株,提取并鉴定半枝莲总黄酮提取物,配制不同浓度提取物作用于细胞,分别以MTT比色法、细胞划痕实验、transwel...目的 ：探讨半枝莲总黄酮类提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 ：体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞株,提取并鉴定半枝莲总黄酮提取物,配制不同浓度提取物作用于细胞,分别以MTT比色法、细胞划痕实验、transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,用实时定量PCR检测甲状旁腺相关蛋白（PTHr P）m RNA的表达变化。结果：与对照组相比,半枝莲总黄酮类提取物40-200μg/m L共5组作用于MDA-MB-231细胞24 h时,细胞增殖抑制率分别为（11.7±5.7）%、（25.1±4.1）%、（40.1±4.0）%、（44.7±4.0）%、（45.1±2.9）%;细胞迁移抑制率分别为（8.9±1.8）%、（20.4±2.7）%、（21.8±2.4）%、（29.3±4.0）%、（51.7±6.3）%;细胞侵袭抑制率分别为（31.4±0.3）%、（36.5±0.7）%、（57.8±0.8）%、（59.8±1.1）%、（80.7±1.4）%;PTHr P m RNA相对表达水平分别为81.8%、61.8%、46.5%、35.1%、22.2%。结论：半枝莲总黄酮类提取物可能通过下调PTHr P m RNA的表达,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力。展开更多
文摘目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。
文摘目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位(CFU-f)、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。
文摘目的 ：探讨半枝莲总黄酮类提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 ：体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞株,提取并鉴定半枝莲总黄酮提取物,配制不同浓度提取物作用于细胞,分别以MTT比色法、细胞划痕实验、transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,用实时定量PCR检测甲状旁腺相关蛋白（PTHr P）m RNA的表达变化。结果：与对照组相比,半枝莲总黄酮类提取物40-200μg/m L共5组作用于MDA-MB-231细胞24 h时,细胞增殖抑制率分别为（11.7±5.7）%、（25.1±4.1）%、（40.1±4.0）%、（44.7±4.0）%、（45.1±2.9）%;细胞迁移抑制率分别为（8.9±1.8）%、（20.4±2.7）%、（21.8±2.4）%、（29.3±4.0）%、（51.7±6.3）%;细胞侵袭抑制率分别为（31.4±0.3）%、（36.5±0.7）%、（57.8±0.8）%、（59.8±1.1）%、（80.7±1.4）%;PTHr P m RNA相对表达水平分别为81.8%、61.8%、46.5%、35.1%、22.2%。结论：半枝莲总黄酮类提取物可能通过下调PTHr P m RNA的表达,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
