血管紧张素转换酶抑制剂/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类药物治疗贝伐珠单抗所致心血管毒性的效果及影响因素

目的探究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)类药物治疗贝伐珠单抗所致心血管毒性效果的影响因素,为临床提高抗心血管毒性效果提供参考。方法选取2021年1月至2023年12月江苏省第二中医院128例贝伐珠单抗治疗后发生心血管毒性的肿瘤患者,根据是否采取ACEI/ARB类药物治疗分为2组,将采取ACEI/ARB类药物治疗的95例患者纳入观察组,将未采取ACEI/ARB类药物治疗的33例患者纳入对照组。比较2组心肌肌钙蛋白I(cTnI)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、左心室射血分数(LVEF)、收缩压、舒张压水平。采用单因素、多因素分析ACEI/ARB类药物治疗贝伐珠单抗引起心血管毒性效果的影响因素。结果观察组患者血浆NT-proBNP、cTnI水平、收缩压、舒张压均低于对照组,LVEF高于对照组(均P<0.05)。ACEI/ARB类药物治疗心血管毒性的临床效果评估中治愈60例(63.2%),好转30例(31.6%),无效5例(5.3%)。临床分期(比值比=5.349)、合并心血管疾病(比值比=3.132)、心脏毒性反应分级(比值比=4.218)、血浆NT-proBNP(比值比=2.824)、血浆cTnI(比值比=3.779)水平是ACEI/ARB类药物治疗心血管毒性效果的危险因素,LVEF水平(比值比=0.333)是ACEI/ARB类药物治疗心血管毒性效果的保护因素(均P<0.05)。结论ACEI/ARB类药物治疗贝伐珠单抗所致心血管毒性具有一定效果,可降低心血管毒性,减轻心肌损伤。临床分期、合并心血管疾病、心脏毒性反应分级、血浆NT-proBNP、血浆cTnI为ACEI/ARB类药物治疗效果的危险因素,LVEF水平为治疗效果的保护因素。

帕妥珠单抗与曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体阳性2乳腺癌的效果及对血清胸苷激酶1与结合素-4的影响

目的:分析帕妥珠单抗与曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌的效果及对血清胸苷激酶1(TK-1)与结合素-4(nectin-4)的影响。方法:选取2021年10月至2022年9月期间本院收治的HER2阳性乳腺癌患者92例,使用随机数字表分为研究组(46例)与对照组(46例)。两组均接受常规化疗治疗,对照组应用曲妥珠单抗治疗,研究组在其基础上应用帕妥珠单抗治疗。针对两组临床疗效、癌胚抗原(CEA)与糖类抗原153(CA153)水平、血清TK-1与nectin-4水平、不良反应,以及乳腺癌生命质量测定量表(FACT-B)评分进行比较。结果:关于治疗的客观缓解率比较,研究组结果较对照组高(P<0.05)。治疗后,研究组血清CA153、CEA水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,研究组血清TK-1、nectin-4水平低于对照组(P<0.05)。不良反应发生率比较中,两组结果未见差异性(P>0.05)。治疗后,研究组FACT-B分值低于对照组(P<0.05)。结论:帕妥珠单抗与曲妥珠单抗在HER2阳性乳腺癌患者中具有较为理想的效果,可以下调血清肿瘤标志物与血清TK-1与nectin-4水平,改善生存质量。

甲状旁腺素和维生素D受体基因多态对糖尿病患者骨密度的影响

目的探讨甲状旁腺素（PTH）基因多态性与中国北方汉族人糖尿病患者骨密度的关系，联合分析维生素D受体（VDR）基因和PTH基因多态性与骨密度的相关性。方法选自青岛市内分泌糖尿病医院1998年1月～2002年1月住院的糖尿病患者，运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测了1型糖尿病（T1DM）组54例，2型糖尿病（T2DM）组104例，健康对照（CON）组102例，260例中国北方汉族人PTH基因多态性；采用双能x线吸收法骨密度仪（DEXA）测量骨密度。结果校正年龄和BMI后，1型糖尿病组腰椎、股骨颈骨密度低于对照组（P〈0．05）；2型糖尿病组与对照组相比，骨密度差异无显著性（P〉0．05）；甲状旁腺素（BSTBI位点）基因型和等位基因分布频率在1型糖尿病组、2型糖尿病组与对照组间差异无显著性（P〉0．05）；在对照组及2型糖尿病组，BB基因型者腰椎（L24）和股骨颈部位骨密度显著高于Bb／bb基因型（P〈0．05）；在1型糖尿病组，BB基因型仅腰椎L：。部位骨密度高于Bb／bb基因型（P〈0．05）；联合VDR基因多态（ApaI酶切位点）分析结果表明，Bbaa基因型在腰椎和股骨颈骨密度低于其他基因型（P〈0．05）。结论糖尿病患者PTH基因多态性（BSTB1位点）可能是预测骨量减少、骨质疏松易感性的遗传标志。联合VDR基因多态（ApaI酶切位点）有助于识别糖尿病患者发生骨质疏松的高危人群。

钙对染铅大鼠骨钙素、甲状旁腺激素及其受体表达的影响

目的:研究钙对铅染毒大鼠骨钙素(OC)、甲状旁腺激素(PTH)及其受体(PTHr1)表达的影响。方法:分别以纯净水和1.0g/L醋酸铅水饲喂Wistar大鼠,其中醋酸铅饲喂大鼠又分为正常饲料、高钙饲料和低钙饲料组。测定大鼠骨钙、骨铅、OC和PTH含量,并采用RT-PCR方法观察OC和PTHr1mRNA的表达。结果:铅处理降低了骨钙和血清OC的含量,抑制了OC mRNA的表达;但同时血清PTH的含量升高,PTHr1的表达增强;而高钙可以拮抗铅的这些作用,低钙则加剧了铅的上述效应。结论:补充膳食钙可减轻铅对大鼠骨骼的毒性作用。

酵母双杂交筛选与甲状旁腺素1型受体相互作用的蛋白

目的:采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统,筛选与甲状旁腺素1型受体(PTH1R)相互作用的蛋白。方法:将全长PTH1R基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵,用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTH1R和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中,检测Mel1报告基因的表达,并进行相互作用的验证。结果:测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTH1R相互作用;根据对SNAPIN基因的功能分析,其可能与细胞内钙稳态的调控有关。结论:为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的机制提供了一定的线索。

水牛甲状旁腺素1受体基因CDS区克隆与生物信息学分析

试验旨在对水牛甲状旁腺素1受体(parathyroid hormone 1receptor,PTH1R)基因CDS区进行克隆,并对所获序列进行生物信息学分析,以期丰富水牛PTH1R基因研究的基础数据。提取水牛基因组DNA,以牛PTH1R基因为参考序列(GenBank登录号:NM-001075332.1),应用Primer Premier 5.0软件设计引物序列,运用PCR扩增及测序获得水牛完整CDS区序列,使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA、PSORTⅡPrediction等在线分析软件分析PTH1R的一级结构、二级结构、三级结构与理化性质,并进行同源性分析及构建系统进化树。结果显示,试验成功克隆了水牛PTH1R基因完整编码序列,该序列长为2 283bp,CDS区长1 770bp,序列已提交GenBank,登录号:MF380401,可编码589个氨基酸。PTH1R基因CDS区核苷酸序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼同源性比对结果显示,其同源性分别为99.4%、93.2%、93.5%、95.3%、98.1%和93.9%,物种之间同源性较高,进化树分析结果与其亲缘关系远近一致,表明水牛PTH1R基因编码区在进化过程中比较保守。蛋白理化性质分析显示,水牛PTH1R蛋白分子式为C2996H4616N792O823S30,分子质量为65 860.22u,半衰期为30h,理论等电点(pI)为8.37,水溶液在280nm处的消光系数为117 770,肽链N端为M(Met),不稳定系数为43.36,属于碱性不稳定蛋白。脂肪系数为88.61,总平均亲水性为0.007,该蛋白属于不可溶性蛋白。二级结构分析显示,水牛PTH1R基因蛋白中包含有218个α-螺旋、114个延伸链、44个β-转角、213个无规则卷曲,与三级结构预测结果相一致。综上所述,PTH1R基因编码区在长期生物进化过程中具有较强的保守性,PTH1R基因的成功克隆及分析为进一步揭示其遗传特性提供了理论依据。

重组人甲状旁腺素(1-34)诱导过表达EGFR的角质形成细胞中差异表达转录因子的筛选

目的利用转录组测序技术,筛选重组人甲状旁腺素(1-34)[rhPTH(1-34)]影响角质形成细胞(KC)内表皮生长因子受体(EGFR)表达的差异转录因子,以探讨rhPTH(1-34)治疗银屑病的机制。方法慢病毒转染培养的HaCaT细胞,使之过表达EGFR。rhPTH(1-34)组加入0.01μmol/L rhPTH(1-34),空白组加入等量DMEM溶液。抽提两组细胞RNA,用紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳法进行RNA产量和质量检测。合成cDNA,实时定量PCR扩增,对文库有效浓度进行准确定量。上机测序,对所得数据进行处理和分析。用DESeq2软件分析两组数据之间的差异,以|log_2foldchange|≥1且P<0.05作为筛选条件对测序结果进行分析。结果rhPTH(1-34)组和空白组共表达的基因数目12455个,rhPTH(1-34)组单独表达421个,空白组单独表达461个。rhPTH(1-34)组与空白组比较,差异基因共185个,其中108个上调,77个下调。下调中,|log_2foldchange|最高的5个差异转录因子为ZNF525、ZNF774、ZNF576、ZBTB42和POU4F1(P<0.05)。其中ZNF774、POU4F1主要涉及Notch2、MAPK信号通路的调节。结论rhPTH(1-34)抑制KC增殖可能与下调ZNF525、ZNF774、ZNF576、ZBTB42、POU4F1表达有关。其中ZNF774、POU4F1可能与KC增殖相关。

甲状旁腺素1受体(PTH1R)调控成釉细胞MMP-20基因表达的分子机制研究

目的通过进行甲状旁腺素l受体(PTH1R)基因克隆以及真核表达载体的构建,分析PTH1R对成釉细胞MMP-20基因表达的影响.为进一步探讨PTH1R在牙釉质形成以及发育过程中的分子调控方面奠定基础。方法根据引物设计原则设计PTH1R基因的RT-PCR引物,用PCR法扩增得出含有EcoRⅠ和XhoL的PTH1R目的基因片段。通过T4连接酶连接到pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体上。并用双荧光素酶报告基因系统检测MMP-20启动子区域的转录活性。结果①经过PCR引物扩增得到1794BP的基因片段,将获得的重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-PTH1R双酶切分析鉴定,测序结果与GenBank登录基因完全一致。②经双荧光素酶报告基因系统检测得出PTH1R能够上调MMP-20基因的表达水平。结论成功实现了PTH1R基因克隆及真核表达载体的构建,初步证明了PTH1R可能调控MMP-20基因的表达。

甲状旁腺激素对人牙囊前体细胞核因子κB受体激活因子配体和骨保护素mRNA表达的影响

目的:研究不同浓度、不同作用时间的甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone,PTH)对体外培养的人牙囊前体细胞表达核因子κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA的影响。方法:原代培养和纯化人牙囊前体细胞,取生长状况良好的第3～5代人牙囊前体细胞,与不同浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)重组人PTH共孵育,分别用RT-PCR检测不同浓度PTH作用2 h和100 ng/mL PTH作用不同时间点人牙囊前体细胞RANKL、OPG的mRNA表达,以GAPDH作为内参,进行灰度值比较。结果:随着PTH浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)和PTH作用时间(2、4、8 h)的增加,人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达逐渐增高,OPG mRNA的表达逐渐降低。不同浓度组间和不同时间之间相比,RANKL和OPG mRNA表达量均有显著性差异(P<0.05)。结论:PTH可增强体外培养的人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达,降低OPG mRNA的表达。

甲状旁腺素相关蛋白和甲状旁腺素及其Ⅰ型受体在髁突发育中的作用

髁突软骨是下颌骨重要的生长点,其细胞具有特殊的生长和分化方式。甲状旁腺素相关蛋白在髁突整个发育过程中起关键调节作用。甲状旁腺素作为最有前景的促骨合成代谢调节剂,在人工调节髁突发育中起着不可取代的作用。下面就甲状旁腺素相关蛋白和甲状旁腺素及其Ⅰ型受体在髁突发育中的研究进展作一综述。

甲状旁腺素及其受体对成釉细胞增殖的影响

目的通过体外培养成釉细胞,探讨甲状旁腺素(PTH)对于小鼠成釉细胞增殖的影响。方法首先利用免疫组化方法检测甲状旁腺素1受体(PTH1R)在小鼠牙齿成釉细胞中的表达;然后在细胞培养箱内培养成釉细胞16h,通过利用不同浓度的PTH作用于成釉细胞,噻唑蓝荧光检测PTH对成釉细胞的增殖作用效果。结果免疫组化法检测可知PTH1R在小鼠成釉细胞层中表达呈现阳性;荧光检测发现PTH可显著促进成釉细胞的增殖,尤其是在浓度达到1μg/L时其促进细胞增殖效果达到最高值。结论 PTH1R在小鼠牙齿成釉细胞层中具有较强的表达效应,同时PTH可以促进成釉细胞的增殖,其有效作用浓度与成釉细胞生长密度呈相关关系。

甲状旁腺素对人甲状腺髓样癌细胞调控作用的实验研究

目的探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和甲状旁腺素受体单抗(Anti-Parathyroid Hormone Receptor1antibody,anti-PTHR1)对人甲状腺髓样癌细胞株(TT细胞株)体外生长及细胞增殖的影响。方法体外培养TT细胞株,药物作用分为PTH组,anti-PTHR1组,各组经药物处理后,先在倒置显微镜下观察细胞的生长状况,MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR法检测PTHmRNA的表达变化情况。结果倒置显微镜下可较明显看到细胞的变化,MTT结果显示,PTH和anti-PTHR1能有效地抑制TT细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系,2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/Lanti-PTHR1能明显提高细胞的生长抑制率(P<0.05),RT-PCR结果显示药物作用后PTHRmRNA的表达下调(P<0.05)。结论 2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/L的anti-PTHR1可抑制TT细胞的增殖。阻止细胞周期进展,明显降低其增殖指数,在诱导凋亡中起重要作用。

甲状旁腺素通过磷脂酶C非依赖途径激活蛋白激酶C

目的利用基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术的检测PKC激活或PKC-delta激活的报告分子来确定PTH是否可以通过PLC非依赖途径激活PKC和PKC-delta。方法将表达PKC激活报告分子(CKAR)的质粒和表达PKC-delta激活报告分子的质粒转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并以此判断佛波酯(TPA)是否激活PKC和PKC-delta。将表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒共转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并判断PTH(1-34)、G1R19(1-34)和0.1%的三氟乙酸(TFA)对PKC和PKC-delta的作用。结果在转染CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,TPA均使青色荧光与黄色荧光的强度之比(C/Y)增加。在共转染PTH1R质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,PTH(1-34)和G1R19(1-34)均增加了C/Y的值,而0.1%TFA未引起C/Y的改变。结论 PTH与PTHR1结合后通过PLC非依赖途径激活PKC/PKC-delta。

联合甲状旁腺激素和普萘洛尔对人成骨细胞增殖及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的联合甲状旁腺激素(rhPTH1-34)和普萘洛尔(PRO)处理体外培养的人松质骨源性成骨细胞(HOB),观察其对人成骨细胞增殖及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达的影响,探讨其对骨代谢影响的可能机制。方法(1)以成人髂骨和股骨颈部松质骨为原料,分离培养原代人成骨细胞并对其鉴定。(2)以人成骨细胞为体外实验模型,固定浓度rhPTH1-34(50 ng/ml)和不同浓度PRO(0.1μM、1μM、10μM)分别及联合刺激体外培养的人成骨细胞72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL基因的表达。结果 rhPTH1-34和PRO单独给药均可促进成骨细胞增殖(P<0.05),在PRO 10 uM时成骨细胞OPG基因的表达量增加(P<0.05),且大于RANKL基因的表达量;相反,联合rhPTH1-34和PRO给药抑制成骨细胞增殖(P<0.05),并抑制成骨细胞OPG和RANKL基因的表达(P<0.05),且随着PRO浓度的增加,OPG和RANKL基因表达均呈下降趋势。结论 rhPTH1-34和PRO单独给药均可促进成骨细胞增殖,而两者联合给药后却抑制了成骨细胞的增殖,可能是通过调控OPG和RANKL基因的表达来实现的。

慢性肾衰竭患者血清甲状旁腺激素和瘦素水平在高通量血液透析前后变化的研究

目的探讨高通透量透析对慢性肾衰竭(CRF)患者血清甲状旁腺激素(iPTH)和瘦素(leptin)水平的影响及其两者的相互关系。方法测定15例CRF高通量透析患者(HPD组)和15例CRF常规透析患者(CHD组)透析前后血清iPTHl、eptin水平及肾功能指标(BUN、Cr)。比较两组各项检测指标水平的下降率,并分析高通量透析前、后血清iPTH和Leptin水平的相互关系。结果CHD组透析后血清iPTHl、eptin水平与透析前无明显变化(P>0.05),而HPD组明显降低(P<0.01);但两组对小分子尿毒症毒素的清除率差异均无显著性(P>0.05);HPD组透析前后血清iPTH和Leptin水平呈负相关(r分别为-0.730和-0.665,P<0.05),且透析后血清iPTH下降率小于leptin下降率(P<0.05)。结论高通量透析能很好地清除CRF患者血清iPTH和leptin;高血清leptin水平与高血清iPTH水平两者可能具有相互桔抗作用。

甲状旁腺激素相关蛋白对去卵巢大鼠骨组织中OPG、RANKL基因表达的影响

目的观察不同剂量间歇性注射甲状旁腺激素相关蛋白氨基端片段1-34(PTHrP1-34)对去卵巢大鼠骨密度及股骨RANKL、OPG基因表达的影响。方法4月龄健康雌性未孕Wistar大鼠60只,随机分为6组,假手术组(Sham组)和卵巢切除+安慰剂组(Placebo组)给予生理盐水;卵巢切除+雌激素治疗组(E2组)给予苯甲酸雌二醇注射液;卵巢切除+PTHrP治疗组分别用20、40、80μg/kg剂量,每日1次注射PTHrP1-34。给药12周后,测定腰椎L3～6及股骨BMD,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测大鼠股骨RANKL、OPG基因表达的水平。结果①BMD结果:PTHrP40组和PTHrP80组大鼠股骨、腰椎BMD明显高于Placebo组。②与Sham组相比,Placebo组OPG mRNA明显下降(P<0.01),RANKLmRNA水平则显著升高(P<0.01)。E2组OPG mRNA水平较Placebo组明显升高(P<0.01),RANKLmRNA水平显著下降(P<0.01)。与Placebo组相比,不同剂量PTHrP(1-34)治疗组OPG、RANKL mRNA水平无明显变化(P>0.05)。结论PTHrP1-34 40或80μg/kg每天皮下注射能提高去卵巢大鼠股骨、腰椎BMD,间歇性注射PTHrP(1-34)对去卵巢大鼠骨组织RANKL、OPG mRNA水平无明显影响。

胞外钙调节成骨细胞和成骨前体细胞内甲状旁腺素相关肽表达

以往研究表明,甲状旁腺素相关肽在绝经后女性骨质疏松患者中骨的合成过程中发挥重要作用。在细胞水平上,甲状旁腺素相关肽能促进成骨细胞的募集并阻止成骨细胞和骨细胞的凋亡。在发挥骨吸收作用的破骨细胞周围,其钙离子浓度远大于血浆钙离子浓度。因此,在成骨细胞发挥再吸收活性的附近区域,其细胞外钙离子浓度可能有所升高。该研究意在估计细胞外钙对成骨细胞内甲状旁腺素相关肽表达的调节作用。成人间充质干细胞可以通过标准方法进行培养和分型。通过免疫放射分析测定释放到培养基里的甲状旁腺素相关肽,而通过实时PCR估计甲状旁腺素相关肽、骨钙素和Runx2mRNA的表达水平。把钙离子浓度从1mmol升高到5mmol并持续24h结果导致甲状旁腺素相关肽水平升高4～6倍。钙离子浓度的升高同样增加了甲状旁腺素相关肽mRNA的表达水平。钙对甲状旁腺素相关肽释放的刺激效应在提高钙离子浓度的60min内出现。细胞外钙感应受体激动剂新霉素能够模拟钙离子的作用,但是MEK/MAPK抑制剂PD98059却能消除钙离子和新霉素产生的效应。高水平的细胞外钙能够提高成人间充质干细胞的矿化作用和骨钙素的表达水平,但是新霉素不能模拟产生该效应。研究结果表明,在成人间充质干细胞中,细胞外钙离子水平的升高能增加甲状旁腺素相关肽及其mRNA的表达。细胞外钙感应受体的激活能模拟钙对甲状旁腺素相关肽的效应,而抑制MAPK信号通路又可减少该效应的发生。

人重组甲状旁腺素治疗骨质疏松及其骨折的研究进展

人体天然甲状旁腺素（hPTH）含有84个氨基酸。人重组甲状旁腺素1—34具有与人体天然甲状旁腺素N端34个氨基酸序列完全相同的结构，其生物学作用亦是通过与特异性高亲和性人体天然甲状旁腺素-Ⅰ受体结合介导的。PTH的N端与C端在骨代谢中发挥作用不尽相同，N端主要与经典PTHⅠ型受体结合，影响成骨作用；

甲状旁腺激素联合辛伐他汀对成骨细胞分化及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的联合甲状旁腺激素(rhPTH1-34)和辛伐他汀(SIM)在体外对乳鼠颅盖骨成骨细胞分化及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达的影响。方法以乳鼠成骨细胞为体外试验模型,rhPTH1-34(10-9mol/L)联合不同浓度SIM(10-8、10-7、10-6mol/L)作用于体外培养的乳鼠成骨细胞,采用对硝基苯磷酸盐(PNPP)法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法测定OPG和RANKL基因的表达。结果 rhPTH1-34和SIM单独给药均可促进成骨细胞ALP活性及OPG基因、降低RANKL基因表达(P<0.05);两者联合后与SIM单独作用组比较,ALP活性明显增加,并能协同促进OPG、降低RANKL基因表达(P<0.05)。结论 rhPTH1-34和SIM联合应用对成骨细胞分化和代谢有协同作用。