甲状腺激素受体α在猪有腔卵泡发育和孤雌激活胚胎发育过程中表达模式

本研究旨在探讨猪不同发育时期的卵泡甲状腺激素受体α(TRα)蛋白的表达规律,以及体外培养猪卵母细胞和早期胚胎中TRα的表达模式。采用化学发光免疫分析法(CLIA)测定了不同直径大小猪卵泡甲状腺激素(THs)的含量,运用免疫组化法对猪卵巢TRα进行定位染色,应用免疫荧光技术和QRT-PCR技术分别检测体外培养猪卵母细胞和孤雌激活早期胚胎TRα蛋白的表达定位和TRαmRNA水平表达变化规律。结果表明:猪卵泡中T3含量随着卵泡直径的增大呈现先下降后上升的趋势。免疫组化染色结果显示,阳性信号主要见于GC、TC及卵母细胞。随着卵泡的发育,TRα阳性细胞数量呈增长趋势,原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡之间阳性细胞数量差异显著。QRT-PCR结果显示,猪TRα基因在不同成熟培养阶段的COCs均有表达,在孤雌激活早期胚胎1-细胞、2-细胞和4-细胞胚胎期显著高于8-细胞胚胎期、桑椹期和囊胚期(P【0.05)。免疫荧光观察到在猪体外成熟的COCs不同发育阶段颗粒细胞均表达TRα蛋白,在24~36h卵丘颗粒细胞表达阳性最强。TRα蛋白在猪孤雌激活早期胚胎不同阶段中均有表达,且8-细胞、桑椹胚和囊胚的阳性信号较强。结果提示,不同直径猪卵泡液中均存在THs,不同成熟阶段COCs和早期胚胎中TRα均呈现表达,推测THs可能通过与TRα结合而参与调控猪卵泡发生和早期胚胎发育。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响。结果谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核。通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01)。结论 IGFBP-3通过与TRα1相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据。

人小胶质细胞中促甲状腺激素受体的表达、分布及活性观察

目的 探讨人小胶质细胞(HMC3)中促甲状腺激素受体(TSHR)的表达、分布及活性。方法 取人小胶质细胞HMC3,以人甲状腺细胞及肝细胞作为对照,采用逆转录聚合酶链式反应检测TSHRN mRNA表达,以验证TSHR mRNA转录物。通过Western blotting法和免疫荧光染色分析测定HMC3细胞中TSHR蛋白水平及分布。将HMC3细胞分为0、20、50、100、200 ng/mL促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)组和阴性对照组,将各组细胞加入100μmol/L磷酸二酯酶抑制剂IBMX预孵育60 min,然后向TSAb组分别加入相应浓度的TSHR特异性抗体TSAb培养24 h。使用免疫测定试剂盒测定各组环磷酸腺苷(cAMP)水平,验证TSHR在HMC3细胞中的活性。结果 在HMC3细胞中检测到TSHR mRNA,其序列与人甲状腺细胞及肝细胞来源的mRNA相同。TSHR蛋白在HMC3细胞的细胞膜中表达。与0 ng/mL TSAb组相比,20 ng/mL TSAb组cAMP水平无统计学差异,50、100、200 ng/mL TSAb组cAMP水平增加,且高浓度组cAMP水平高于低浓度组(P<0.05或<0.01)。结论 TSHR在人小胶质细胞中存在并表达于细胞膜,且具有信号传导功能。

妊娠早期蜕膜甲状腺激素受体信号异常对蜕膜化进程的影响及其与流产发生的关联

目的评估自然流产患者蜕膜血管生成情况,并探讨自然流产患者蜕膜中甲状腺激素受体信号的表达改变。方法收集行人流术的孕妇蜕膜。以自然流产患者作为实验组,以社会因素行人流术的健康孕妇作为对照组,收集两组人群蜕膜组织。采用Western blot方法,检测蜕膜组织中甲状腺激素受体-α(THR-α)和THR-β的核转位情况,同时使用免疫组化法定位蜕膜组织中THR-α和THR-β的分布。Western blot测定蜕膜组织中Ⅱ型脱碘酶(DIO2)的蛋白表达水平,免疫荧光法定位DIO2在蜕膜组织分布并测定荧光强度。使用免疫组化,以CD34作为内皮标志物测定蜕膜血管密度。Western blot检测血管内皮生长因子受体(VEGFR-1)的蛋白表达水平。结果对照组与流产组在年龄、妊娠天数、TSH、T3、T4等基本资料中,差异均无统计学意义。Western blot结果提示THR-α和THR-β蛋白核转位置下降,同时蜕膜组织免疫组化染色结果表明自然流产患者蜕膜甲状腺激素受体核转位减少(P<0.05)。Western blot结果表明流产组DIO2蛋白表达较对照组下降,提示自然流产孕妇蜕膜中,甲状腺激素代谢受到影响;免疫荧光实验结果显示流产组DIO2的荧光强度较对照组减弱(P<0.05)。免疫组化法CD34标记蜕膜小血管的结果显示,在流产组中,CD34^(+)血管数量下降,差异有统计学差异(P<0.05)。Western blot结果提示流产组和对照组中VEGFR-1无明显变化,差异无统计学意义。结论蜕膜局部甲状腺激素受体信号异常可能导致蜕膜血管生成减少,从而参与自然流产的发生。

基于我国WS/T促甲状腺激素受体抗体检测方法的性能验证

目的 基于我国卫生行业标准(WS/T)对迈瑞高敏磁微粒化学发光法(CLIA)检测TRAb进行性能验证。方法 参照最新WS/T文件,以Roche Cobase 601电化学发光法(ECLIA)作为已验证的检测方法,对迈瑞CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性、检出限、参考区间进行验证,评价迈瑞与Roche的诊断符合率。结果 迈瑞CLIA检测TRAb的批内CV为1.56%~4.60%,实验室内CV为1.65%~5.19%;与Roche ECLIA的实验室相对差值为-3.6%;在0.02~44.00IU/L范围内线性拟合方程Y=1.040X+0.636,线性系数R2=0.990;24个检出限临界值数据22个(91.7%)≤0.3IU/L;20个健康体检者血清TRAb检测结果仅1个超出参考区间≤1.9IU/L;与Roche ECLIA的诊断总符合率90%,阳性符合率75%,阴性符合率100%,Kappa检验值0.7826(P<0.001)。结论 迈瑞高敏磁微粒CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性范围、检出限均符合厂家声明,参考区间经验证可转移至我实验室使用,与Roche的诊断符合率较好,该方法性能能满足本医院临床检验需求。

促甲状腺激素受体抗体磁微粒化学发光法的建立和初步临床应用评估

目的 建立检测人血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)的磁微粒化学发光法,并进行初步临床应用评估。方法 采用竞争法原理,建立基于异硫氰酸荧光素(FITC)-抗FITC系统的检测血清TRAb的磁微粒化学发光法,并对方法的空白限、检出限、线性区间、精密度、抗干扰能力进行评估。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估该方法的临床诊断效能。比较磁微粒化学发光法与电化学发光法和促甲状腺激素受体刺激性抗体(TSI)化学发光法的一致性。了解郑州地区健康成人血清TRAb的分布情况。结果 建立的磁微粒化学发光法的空白限为0.3 IU·L^(-1),检出限为0.7 IU·L^(-1),线性区间为1.0~50.0 IU·L^(-1);低、中、高水平样本的重复性分别为5.36%、2.54%和2.12%,中间精密度分别为8.13%、3.92%和3.50%。胆红素≤250 mg·L^(-1)、血红蛋白(Hb)≤1.0 g·L^(-1)、三酰甘油(TG)≤10.0 g·L^(-1)、FITC-Na≤500 ng·mL^(-1)对磁微粒化学发光法检测TRAb无干扰,甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素(TSH)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对磁微粒化学发光法检测TRAb无交叉反应。ROC曲线分析结果显示,磁微粒化学发光法检测TRAb诊断毒性弥漫性甲状腺肿(GD)的曲线下面积为0.998,最佳临界值为1.92 IU·L^(-1),敏感性为99.07%,特异性为95.00%。磁微粒化学发光法与电化学发光法具有良好的相关性(r2=0.941,P<0.0001),2种方法的偏差为0.090IU·L^(-1),总符合率为96.24%,一致性好(kappa=0.925);与TSI化学发光法的相关性一般(r2=0.671,P<0.000 1),2种方法的偏差为-2.613 IU·L^(-1),总符合率为88.15%,一致性较好(kappa=0.763)。采用百分位数法初步建立TRAb的参考区间为≤1.60 IU·L^(-1)。结论 成功建立了检测血清TRAb的磁微粒化学发光法,检测性能较好,可满足临床需求。

甲状腺激素受体相互作用物11基因变异所致软骨生成不全IA型家系遗传学分析

软骨生成不全IA型是一种罕见的致死性疾病,以常染色体隐性方式遗传,该疾病的发生与人14号染色体上甲状腺激素受体相互作用物11(TRIP11)基因变异有关。本研究采集了1例超声检查疑似致命性骨骼发育不良胎儿的流产皮肤组织及其父母的静脉血,通过提取基因组DNA,应用全外显子组测序技术对胎儿组织及其父母进行平行测序,对疑似致病变异用Sanger测序进行验证;并对以往报道基因检测结果进行文献复习,结合文献复习探讨该病的临床特点。结果发现了胎儿TRIP11检测到复合杂合变异c.790C>T(p.R264*)/c.589-2A>G,两位点分别来自父亲和母亲,符合常染色体隐性遗传。本研究报道的TRIP11基因复合杂合变异尚未见报道,拓宽了软骨生成不全1A型的基因变异谱,为该家庭的遗传咨询及产前诊断提供了重要的分子基础。

人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达

目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。

甲状腺疾病患者促甲状腺激素与甲状腺自身抗体情况分析

目的:分析甲状腺疾病患者促甲状腺激素与甲状腺自身抗体情况。方法:选取2022年1—12月泰安八十八医院收治的甲状腺功能减退症患者30例作为甲减组,桥本甲状腺炎(HT)患者30例作为HT组,毒性弥漫性甲状腺肿(GD)患者30例作为GD组;另选取健康体检者30例作为对照组。比较四组促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平及阳性率。结果:四组TSH水平比较,甲减组<对照组<GD组、HT组,差异有统计学意义(P<0.05);GD组、HT组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。四组TGAb、TPOAb水平比较,对照组<GD组<甲减组<HT组,差异有统计学意义(P<0.05)。四组TRAb水平比较,甲减组高于对照组、GD组、HT组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、GD组、HT组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。甲减组TSH阳性率高于对照组、GD组、HT组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、GD组、HT组TSH阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组TGAb、TPOAb阳性率低于GD组、甲减组、HT组,差异有统计学意义(P<0.05);GD组、甲减组、HT组TGAb、TPOAb阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。GD组TRAb阳性率高于对照组、HT组、甲减组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、HT组、甲减组TRAb阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TSH、甲状腺自身抗体在不同甲状腺疾病患者及健康者中有所差异,可用于辅助诊断甲状腺疾病。

文蛤甲状腺激素受体MmTR互作蛋白筛选及其对Aroclor 1254胁迫的转录响应研究

环境中存在的甲状腺干扰物(thyroid disrupting chemicals,TDCs)可影响生物体内甲状腺激素(thyroid hormone,THs)的合成、分泌、转运、代谢和作用等过程,干扰THs稳态,引起THs水平失衡。甲状腺激素受体(thyroid hormone receptors,TRs)是一种存在于细胞核内的DNA结合转录因子,属于配体依赖型核激素受体超家族。TRs可与甲状腺激素响应元件(thyroid hormone response elements,TREs)结合,调控其转录表达。TDCs可作为生物体内TRs的配基,竞争性地与TRs结合,进而激活甲状腺信号通路,调控机体的整个甲状腺信号通路基因的转录表达。为探究TDCs对海洋无脊椎动物体内甲状腺激素是否具有干扰效应及其机制,本文通过构建文蛤消化盲囊组织酵母双杂交cDNA文库和文蛤甲状腺激素受体TR基因的诱饵载体pGBKT7-MmTR,在文库内进行MmTR的互作蛋白筛选和鉴定。结果表明,文蛤消化盲囊酵母双杂交cDNA文库中,cDNA片段大小在0.5~2 kb之间,库容约>2×10^(6) cfu。重组质粒pGBKT7-MmTR诱饵载体无毒性和自激活活性,可应用于酵母双杂交系统。经文库筛选共得到36个阳性克隆子,测序获得30个阳性克隆片段。随机选取BIRC2_3与MmTR基因进行点对点验证,结果为阳性,推测所有结果真实可靠。经比对分析,MmTR的29个潜在互作蛋白,功能涉及生长与发育过程、蛋白质代谢与免疫调控过程、应激响应过程和转录调控过程。不同浓度Aroclor 1254胁迫下幼体及成体文蛤体内MmTR基因潜在互作蛋白基因的转录响应分析发现,大多数潜在互作蛋白基因会对低浓度(10 ng·L^(-1)和20 ng·L^(-1))的Aroclor 1254短时间(1 d)暴露产生转录上调响应,且在成体阶段相关基因的转录响应更强烈;与成体阶段相比,文蛤幼体阶段暴露于高浓度(2000 ng·L^(-1))的Aroclor 1254中,生长与发育、蛋白质代谢与免疫调控过程相关的MmTR潜在互作蛋白基因RSPH9、N23、ferritin、BHMT、SCC4、PSMB5具有更明显的上调表达趋势;在成体文蛤体内,未知蛋白基因和位置功能蛋白基因的表达更易受到Aroclor 1254胁迫的影响。本研究结果为深入研究TDCs对无脊椎动物甲状腺激素的作用奠定基础,并且对海洋环境的保护有重要意义。

甲状腺激素受体在阿尔茨海默病PC12细胞模型中异常表达

目的观察甲状腺激素受体在阿尔茨海默病(AD)PC12细胞模型中异常表达。方法将PC12细胞扩增,通过MTT法选择浓度为0、30、40 nmol/L的冈田酸(OA)分别加入培养液中处理24 h后更换培养液;收集经前述方法处理后的细胞,以Western印迹和免疫荧光检测Aβ表达情况;Western印迹检测tau蛋白磷酸化情况;Western印迹和PCR方法检测经不同浓度OA处理后的PC12细胞的甲状腺激素受体(THR)α,β及其基因表达情况。结果与0 nmol/L OA组相比,30、40 nmol/L组Aβ蛋白表达明显升高(P<0.001)且40 nmol/L组表达明显高于30 nmol/L组(P=0.006),免疫荧光结果显示,30、40 nmol/L OA处理组Aβ蛋白表达明显高于0 nmol/L;30、40 nmol/L OA处理组蛋白磷酸酯酶(PP)2A表达明显下调,磷酸化的tau蛋白(P-tau)表达明显增加,酪氨酸307磷酸化的PP2A(PP2Ac-yp307)表达显著升高(P<0.001);40 nmol/L OA处理组细胞THRα、THRβ蛋白及基因表达均明显升高(P<0.001),30 nmol/L OA处理组仅THRα蛋白,THRβ蛋白及基因表达明显升高(P<0.001),而THRα基因表达无显著异常(P=0.098)。结论PC12细胞AD模型中PC12神经细胞表达THR蛋白(α、β)及THRβ基因异常升高可能是细胞的一种修复反应,AD的发生诱发了PC12细胞THR蛋白及基因的高表达。

促甲状腺激素受体与人乳头瘤病毒16 E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探究促甲状腺激素受体(TSHR)、人乳头瘤病毒(HPV)16 E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2016年1月至2018年3月本院收治的124例宫颈癌患者作为研究对象,分别采集所有受试者的宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织,采用免疫组织化学法检测不同宫颈组织的TSHR、HPV16 E6蛋白表达情况。比较不同宫颈组织中TSHR、HPV16 E6蛋白阳性率,分析TSHR、HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌患者临床病理特征及生存状况的关系。结果宫颈癌组织中TSHR、HPV16 E6蛋白阳性率(67.74%、66.13%)均高于癌旁组织(21.77%、22.58%)及正常组织(2.42%、3.23%),且癌旁组织高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、肿瘤直径≥3 cm及有淋巴结转移宫颈癌患者TSHR蛋白阳性率均高于中高分化、肿瘤直径<3 cm及无淋巴结转移宫颈癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、临床分期宫颈癌患者TSHR蛋白阳性率比较差异无统计学意义。年龄≥60岁、有淋巴结转移宫颈癌患者HPV16 E6蛋白阳性率均高于年龄<60岁、无淋巴结转移宫颈癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期、分化程度、肿瘤直径宫颈癌患者HPV16 E6蛋白阳性率比较差异无统计学意义。随访3年,124例宫颈癌患者中,死亡74例,存活50例;宫颈癌死亡患者TSHR蛋白阳性率高于存活患者,差异有统计学意义(P<0.05),而宫颈癌死亡患者与存活患者HPV16 E6蛋白阳性率比较差异无统计学意义。结论宫颈癌组织中TSHR、HPV16 E6蛋白均存在异常高表达,其中TSHR蛋白表达与宫颈癌患者分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移及预后有关,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌患者年龄及淋巴结转移密切相关,而与预后无关。

促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和促甲状腺激素受体抗体检测在甲状腺疾病中的价值分析

分析促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)和促甲状腺激素受体抗体(TRAb)检测在甲状腺疾病中的价值。方法 收入2022年度体检的健康者30例为对照组,纳入同期病理诊断的各30例Graves(观察1组)、桥本甲状腺炎(观察2组)、亚甲炎(观察3组)、甲减(观察4组)患者,均进行指标检测,含促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和促甲状腺激素受体抗体,比较各组水平差异和阳性率。结果 TSH水平,观察1、2、4组显著高于对照组(P<0.05),最高的是观察4组(P<0.05),观察3组显著低于另外3个观察组以及对照组,(P<0.05),TPOAb、TRAb水平(P<0.05),观察1、2、3、4组均显著高于对照组(P<0.05),最高的均是观察2组(P<0.05)。SH、TPOAb、TRAb阳性率,观察1、2、3、4组均高于对照组(P<0.05),TSH阳性率中观察4组最高(P<0.05),TPOAb以及TRAb的阳性率中,均为观察1组最高(P<0.05)。结论 甲状腺疾病中通过TSH、TPOAb、TRAb的检验可以根据指标水平的变化进行不同疾病类型的辨别,可以帮助临床对患者进行诊断,对患者的治疗指导具有一定价值,建议参考和普及应用。

能谱CT联合促甲状腺激素受体mRNA对甲状腺乳头状癌诊断意义分析

探讨能谱CT定量联合促甲状腺激素受体(thyroid-stimulating hormone receptor,TSHR)mRNA对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma,PTMC)的诊断意义分析。方法 收集2017年5月-2021年2月我院经手术及病理证实为甲状腺微小结节的患者105例,其中61例为PTMC,44例为微小结节性甲状腺肿(Micronodular goiter,MNG)。所有患者均行能谱CT及血清TSHR-mRNA检查,在最佳单能量图像上测量病变区碘浓度,计算能谱曲线斜率k值。分析能谱CT定量参数联合血清TSHR-mRNA诊断PTMC的效能。采取曲线下面积(AUC)分析能谱CT定量参数联合血清TSHR-mRNA对PTMC的诊断准确度、特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值。结果 PTMC和MNG两组能谱CT定量参数碘浓度和能谱曲线斜率在平扫、动脉期、静脉期比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PTMC组患者血清TSHR-mRNA的平均表达量为(2.81±1.34)ng/ug,MNG组患者血清TSHR-mRNA的平均表达量为(0.96±0.42)ng/ug,且PTMC和MNG两组血清TSHR-mRNA表达量比较差异有统计学意义(t=31.285,P=0.000)。能谱CT定量参数碘浓度和能谱曲线斜率诊断PTMC的ROC曲线下面积AUC分别为0.721、0.754。采用碘浓度和能谱曲线斜率诊断PTMC,两者诊断PTMC的准确度、特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 能谱CT定量参数或血清TSHR-mRNA表达量均可在一定程度上诊断PTMC,两者联合应用时可更准确的诊断,对于临床治疗方案的选择具有重要意义。

促甲状腺激素受体及碘钠泵在人甲状腺癌中的表达及临床意义

目的研究促甲状腺激素受体(TSHR)、碘钠泵(NIS)在甲状腺癌中的表达,探讨其在人甲状腺癌治疗中的作用。方法采用免疫组织化学SABC法,检测TSHR、NIS在45例人正常甲状腺组织、45例乳头状甲状腺癌及21例未分化甲状腺癌中的表达。结果TSHR及NIS在人正常甲状腺组织的表达均高于其在乳头状甲状腺癌和未分化甲状腺癌中的表达。在人正常甲状腺组织,TSHR和NIS蛋白均定位于滤泡上皮细胞膜上;在乳头状甲状腺癌组织,TSHR蛋白定位于细胞膜和细胞质中,NIS蛋白仅在细胞质中有阳性表达;在未分化甲状腺癌,TSHR和NIS均定位于细胞质。结论TSHR、NIS的定位及表达水平与甲状腺癌的分化程度密切相关,可能成为预测甲状腺癌促甲状腺激素抑制治疗及131I治疗是否有效的指标。

缺碘大鼠补碘对脑内甲状腺激素受体的影响

目的研究缺碘大鼠补充不同质量浓度碘后脑内甲状腺激素受体与激素结合动力学参数的变化。方法复制Wistar低碘大鼠,然后根据饮用不同质量浓度的碘水来分组。选用第2代20日龄仔鼠实验,测定甲状腺功能状态,利用放射配体结合分析法测定脑内T3受体。结果①血清T3浓度:低碘组(LI)、高碘组(HI)、适碘组(AI)与正常对照组(N)相比,差异无显著意义(P> 0.05)。血清FT3:LI组、HI组明显高于N组(P< 0.05);②血清T4和FT4:LI组和HI组均显著低于N组(P< 0.05);③受体最大结合容量(MBC):LI组明显高于N组(P< 0.05)。结论LI组血中TT4和FT4低于N组,而脑中T3核受体MBC高于N组,提示甲状腺功能低下(甲低)状态下,脑组织中T3核受体有代偿性升高。高碘状态下缺碘大鼠脑细胞核T3核受体、MBC虽略有升高,但血中TT4和FT4却低于正常,提示长期缺碘后过量补碘会出现碘性甲低。长期缺碘后,即使补充适量碘也会出现一过性碘性甲状腺功能亢进(甲亢)。

促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和促甲状腺激素受体抗体检测在甲状腺疾病中的应用价值

探讨促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)在甲状腺疾病中的诊断价值。对44例Graves病(GD)、29例桥本甲状腺炎(HT)、13例亚甲炎患者和26例正常对照,采用电化学发光免疫分析法测定TSH、TPOAb、TRAb的含量,分析其在几组病例中的意义。三病例组的TSH、TPOAb、TRAb含量与正常对照组比均有显著差异(P<0.01);HT组TPOAb的测值和阳性率又显著高于GD组,而GD组TRAb的测值和阳性率都显著高于HT组,经统计学检验两者均有显著意义(P<0.05)。结果说明,TSH是甲状腺功能的非常敏感的特异性参数,TPOAb、TRAb的检测对鉴别诊断GD和HT有着重要意义。

促甲状腺激素受体基因甲基化与甲状腺乳头状癌关联的Meta分析

目的应用Meta分析方法综合评价促甲状腺激素受体(TSHR)基因的甲基化与人甲状腺乳头状癌的关联,为预防和诊治甲状腺乳头状癌提供参考。方法检索纳入2000年1月—2013年4月发表的8篇有关TSHR基因甲基化和人甲状腺乳头状癌关系的中英文文献,应用随机效应模型和固定效应模型对其进行综合的定量分析。结果来自8篇文献的583份样本被纳入Meta分析,甲状腺乳头状癌样本中TSHR基因发生甲基化数与对照组相比的合并OR值为4.57〔95%CI(1.68,12.43),P<0.01〕。分层分析(对照类型、国家、年龄、肿瘤分期、淋巴结转移)以及回归分析用于探索异质性的来源以及可能的危险因素,结果显示,在中国人群中和年龄小于45岁的甲状腺乳头状癌人群中〔OR=9.18,95%CI(5.19,16.23),P<0.01〕以及在非自体组织为对照的研究中〔OR=8.51,95%CI(3.72,19.46),P<0.01〕,TSHR基因的甲基化发生率均较高。TSHR基因甲基化在各期甲状腺癌中均可出现,TSHR基因甲基化发生率在肿瘤中晚期阶段〔OR=14.12,95%CI(2.93,68.18)〕高于早期〔OR=6.01,95%CI(3.21,11.28)〕,与淋巴结转移也存在关联〔OR=14.29,95%CI(2.47,82.75),P<0.01〕。本研究未观察到存在发表偏倚(t=-0.01,P>0.05),具有较好的代表性。结论 TSHR基因为甲状腺乳头状癌抑制基因,其甲基化的发生与甲状腺乳头状癌具有很强的相关性,可作为一个潜在的分子诊断标志物。

分化型甲状腺癌组织中促甲状腺激素受体的表达

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中促甲状腺激素受体(TSHR)的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP法对43例DTC(39例乳头状癌,4例滤泡状癌)、30例甲状腺腺瘤及16例正常甲状腺组织进行TSHR的测定。结果:正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和DTC组织TSHR均有不同程度表达,甲状腺腺瘤组织的表达与正常甲状腺组织相似,而DTC中有88.37%(38/43)的表达与正常组织相似,11.63%(5/43)的表达低于正常甲状腺组织。DTC组织中TSHR的表达与肿瘤病理分期、有无淋巴结转移、年龄有关(P<0.05);与性别、肿瘤大小、病灶多少无关(P>0.05)。结论:DTC可能为TSHR依赖性肿瘤,TSHR检测有助于提高DTC的诊疗水平。

甲状腺功能减退对新生早期大鼠各脑区甲状腺激素受体mRNA表达的影响

目的探讨甲状腺功能减退（甲减）对新生早期大鼠各脑区甲状腺激素受体（TR）mRNA表达的影响。方法建立甲减Wistar大鼠动物模型，分别于仔鼠0、14、21、45d，用实时荧光定量PCR方法检测大脑、小脑、脑干和海马TR mRNA的表达。结果与对照组相比，各时间点甲减仔鼠各脑区TRα1 mRNA的表达量呈总体下调趋势，而甲减0d仔鼠大脑、小脑、脑干TRα2 mRNA表达量明显增高（t=8．18、6．23、3．68，P〈0．01），且45d仔鼠各脑区TRα2 mRNA表达量仍高于对照组（t大脑=5．50、t小脑=5．46、t脑干=4．10、t海马=11．83，P〈0．01），TRα1、TRα2 mRNA表达峰（21d）均延迟于对照组（14d）出现。甲减仔鼠TRβ1 mRNA表达变化趋势与对照组相一致，但45d仔鼠各脑区TRβ1 mRNA表达量均低于对照组（t大脑=4．64、t小脑=2．73、t脑干=3．90、t海马=5．07，P〈0．01或〈0．05）。结论甲减时甲状腺激素受体mRNA表达峰值的延迟出现以及异常的表达变化与克汀病脑损伤机制密切相关。