北京官厅水库水体甲状腺激素干扰效应检测及特征

应用重组人甲状腺激素受体（hTR）基因酵母快速测试方法，检测北京官厅水库水体类/抗甲状腺激素干扰效应，并分析其地理分布、季节分布特征以及水体甲状腺激素干扰化合物（TDCs）组成特征.结果表明：官厅水库水体检出了显著的抗甲状腺激素干扰效应，与其它研究区域相比，效应处于较低到中等水平；入库河流对库区水质产生显著影响，且入库河流水质受季节影响显著，因此，库区水体不同季节甲状腺激素干扰水平存在差异；C18固相萃取柱对抗甲状腺激素干扰效应的去除率在61.9%-92.3%，表明官厅水库水体中的甲状腺激素抑制活性物质多集中在有机组分，加入30mg/L的EDTA后TR抑制活性显著降低，表明官厅水库水体中TDCs除有机化合物外可能还包含重金属类无机化合物.

改进型重组基因酵母TR-GRIP1检测化合物甲状腺激素干扰活性

应用酵母双杂交技术构建重组TR(甲状腺激素受体)基因酵母,用以检测类抗甲状腺激素化合物及环境样品的甲状腺激素干扰活性.提取并纯化含有TR基因的酵母表达质粒pGBT9-TR以及含有TR共激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒pGAD424-GRIP1,将pGBT9-TR和pGAD424-GRIP1同时转化至酵母细胞Y187,以营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)筛选阳性菌落,构建TR-GRIP1双杂交酵母.考察该酵母与天然甲状腺激素——T3(三碘甲状腺原氨酸)的结合情况,确定最佳暴露时间,建立剂量-效应关系曲线.结果表明:TR-GRIP1双杂交酵母能够与T3结合诱导β-半乳糖苷酶活性,选择暴露时间为2 h,T3诱导酶活性的EC50值为1.1×10-7 mol/L;构建的重组基因酵母TR-GRIP1提供了检测化合物甲状腺激素干扰活性的新方法.

污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制

环境中可以影响生物体甲状腺激素合成、运输、作用和代谢等过程的化学污染物称为甲状腺激素干扰物(TDCs),TDCs被认为是继环境雌激素之后最重要的一类内分泌干扰物.鱼类甲状腺的结构、甲状腺激素的转运和功能等与哺乳动物有较大差别.与哺乳动物相比,污染物干扰鱼类甲状腺激素的研究还较为缺乏.在介绍鱼类甲状腺结构、功能以及甲状腺激素在鱼体内动态过程的基础上,分析了污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制,探讨了今后鱼类甲状腺激素干扰研究的主要方向.污染物能对鱼类甲状腺激素水平、相关酶活性及甲状腺结构等产生直接影响;同时,污染物还可以通过干扰鱼类甲状腺系统对由甲状腺激素调节的重要生理过程如生长、繁殖和发育等产生间接影响.污染物主要通过干扰鱼类甲状腺激素的合成与分泌、转运、清除以及与甲状腺激素受体(TR)的相互作用等机制对鱼类产生不利影响.在污染物对鱼类甲状腺激素干扰的研究中,今后应重点关注环境中"新型"卤化有机污染物、鱼类早期发育过程与甲状腺激素干扰效应的关系、TR介导机制以及TDCs的筛选方法等.

四溴双酚-A的甲状腺激素干扰活性研究进展

四溴双酚-A(TBBPA)因与甲状腺激素的结构相似而被认为具有潜在的甲状腺激素干扰活性。目前已获得了TBBPA 具有甲状腺激素干扰效应的体内外实验证据,并推测 TBBPA 可能通过载体和核受体介导两种机制干扰生物体甲状腺激素系统;TBBPA 的活性氧诱导能力是其甲状腺激素干扰活性的表现,同时,TBBPA 的甲状腺干扰活性与神经毒性和生殖毒性等也具有密切关系,今后需进一步加强 TBBPA 对水生和两栖动物甲状腺激素干扰的活体实验研究。

甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅰ 观察指标的探讨

目的 :研究二巯基敌枯双所致甲状腺的形态改变 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法 :Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,常规 HE染色 ,光镜下观察。结果 :各时间点实验组血清 T4,TSH的浓度和对照组相比无显著变化 (P>0 .0 5 ) ;实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 ,(P<0 .0 5 ) ;组织学观察到实验组在第 5 d甲状腺滤泡上皮增生 ,有的滤泡出现局灶性增生斑块 ,第 10 d复层化的甲状腺滤泡上皮细胞继续增生 ,并向间质突出 ,形成实心芽 ,第 2 0 d实心芽向继发滤泡分化 ,出现了滤泡腔。结论 :二巯基敌枯双引起甲状腺增生 。

甲状腺激素干扰物体内甄别实验初探

目的 研究二巯基敌枯双对甲状腺的生物作用 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组 ( n=3 0 )和实验组 ( n=3 0 )。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 m g/kg。于给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,动物称重后分别放血处死两组动物。测定血清中 T4和 TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重测定甲状腺脏器系数 ;常规 HE染色 ,光镜下观察组织学变化 ;用免疫酶法测定核增殖抗原 ( PCNA)在甲状腺中的阳性表达 ;用酶组织化学方法观察甲状腺琥珀酸脱氢酶( SDH)、甲状腺过氧化物酶 ( TPO)活性的变化。结果 实验组各期甲状腺脏器系数显著高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮增生 ;实验组各期 PCNA表达阳性细胞数明显高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性也明显增高 ( P<0 .0 5 )。

运用爪蟾变态实验检测镉的甲状腺激素干扰效应

将NF51阶段非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪暴露于Cd2+浓度为0.01,0.1和1mg.L-1的溶液中21d,观测Cd2+对爪蟾的生长、变态和甲状腺组织结构的影响.1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪与对照组相比,7d后,平均体重减少了0.39倍,体长和后肢长分别减少了0.17倍和0.27倍,发育阶段稍有延缓;21d后,1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪后肢长减小了0.11倍,延缓了1个发育阶段.其余各浓度组在7d和21d暴露后,体重、体长、后肢长和发育阶段与对照组无显著差异.21d后,Cd2+各浓度组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、胶质减少甚至空泡化等现象,1mg.L-1Cd2+暴露组甲状腺滤泡之间还出现溶通现象.结果表明CdCl2具有甲状腺激素干扰效应,并可能是由于该化合物直接作用于甲状腺组织引起.由此可见,爪蟾变态实验可以有效检测重金属盐的甲状腺激素干扰效应.

全氟辛磺酸对于爪蟾的甲状腺激素干扰效应

运用两栖类变态实验（AMA）研究了全氟辛磺酸（PFOS）对于非洲爪蟾（Xenopuslaevis）蝌蚪的生长、变态和甲状腺组织结构的影响．结果显示，与对照组相比，7d后，10，50和250μμg·L^-1。PFOS暴露组蝌蚪的后肢长分别减小了17％，11％和18％，蝌蚪的发育延缓了1～2个阶段；19d后，10，50和250μg·L^-1PFOS组蝌蚪的体重分别增加了17％，10％和20％，体长分别增加了5％，4％和6％，而10μg·L^-1和250μg·L^-1。PFOS组蝌蚪的后肢长分别减小了12％和13％；暴露组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、上皮细胞增生、胶质减少甚至滤泡溶通等现象．结论是，在本实验浓度下，PFOS对于非洲爪蟾的蝌蚪生长有促进作用，对于变态发育过程却有抑制作用．参照AMA的方法，可以判断PFOS为抗甲状腺激素干扰物．

环境水体中甲状腺激素干扰物的研究进展

甲状腺激素在人类和动物的新陈代谢、生长发育与繁殖过程中起着重要的调节作用,环境中甲状腺激素干扰物(TDCs)会影响甲状腺激素的合成、分泌和代谢过程,从而干扰机体中由甲状腺激素调节的各项生理功能,对机体造成危害。主要介绍了环境中TDCs的种类、作用机制和环境水体中TDCs的生物检测方法,并展望了未来环境中TDCs的研究方向。

应用重组基因酵母法检测松花江吉林段土壤有机组分甲状腺激素干扰效应

利用重组甲状腺激素受体（TR）基因酵母，结合土壤样品索氏提取、富集和净化方法，检测松花江吉林段土壤有机组分甲状腺激素干扰效应及其分布特征。测试结果表明：所有样点均未检测出TR诱导效应；部分样点检测出TR抑制效应，检出率为56．25％，最大抑制率为46．00％；采用RIC20值（抑制率为20％时每孔所需要的土壤量，以mg计）表征样点的抑制效应，其RIC20值为0．81～5．34，表明松花江吉林段土壤中存在TR抑制效应污染物，可能具有潜在的环境危害。研究土壤甲状腺激素干扰效应的分布特征发现研究区甲状腺激素干扰效应分布与产业布局相关，TR抑制效应较高的样点主要集中在工业区及养殖区，表明TR抑制效应物质可能来源于工业污染或畜产养殖污染。通过本研究探明了松花江吉林段土壤有机组分的甲状腺激素干扰特征，为该地区土壤污染防治以及风险评价提供了基础的毒理学数据。

水环境中甲状腺激素干扰物分析方法研究进展

水环境中存在多种内分泌干扰物,对人类和动物的内分泌机能具有极大的破坏性,并可能对生态环境造成严重影响。以对人类与动物影响较大的甲状腺激素干扰物为分析重点,综述了水环境中甲状腺激素干扰物的化学分析和生物测试两类检测方法,并展望了水环境中甲状腺激素干扰物化学分析与生物检测的研究趋势,以期更好地开展对水环境中甲状腺激素干扰物的污染特征及生物学效应评价。

甲状腺激素干扰物对鱼类甲状腺轴的干扰效应研究进展

甲状腺激素干扰物(thyroid-disrupting chemicals,简称TDCs)能够通过干扰鱼体甲状腺激素(thyroid hormones,简称THs)的合成、转运、转化及代谢等过程造成其水平紊乱,影响甲状腺组织的结构和生理功能。为更系统地阐述TDCs对鱼类甲状腺轴的干扰,综述各类TDCs对鱼类下丘脑-垂体-甲状腺轴(hypothalamus-pituitarythyroid axis,简称HPT)干扰的最新研究进展,归纳分析TDCs对鱼类甲状腺激素水平、甲状腺组织病理学变化、HPT轴相关基因表达以及生长发育指标的干扰作用,在基因水平上探讨其可能的作用机制,并就水体中TDCs对鱼类HPT轴干扰效应的未来研究方向进行展望。

十溴联苯醚(BDE 209)暴露对孕期大鼠和胎鼠甲状腺激素干扰效应研究

为探讨孕期十溴联苯醚(BDE 209)暴露对孕期羊水和胎鼠循环甲状腺激素(TH)的影响及其对胎脑发育的损害作用,将24只Wistar雌性大鼠随机分为对照组、BDE 209低剂量组(100 mg·kg^(-1) bw)和高剂量组(300 mg·kg^(-1) bw),与雄鼠合笼,经阴道涂片确认受孕后,在孕1 d给予BDE 209经口持续灌胃染毒至孕15 d(GD15)和孕20 d(GD20)。在GD15和GD20这2个时间点麻醉母鼠后剥离胎鼠称取体质量;应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测GD15、GD20羊水及GD20胎鼠循环TH水平,包括总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清总甲状腺素(TT4)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(TSH)水平;应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胎脑促甲状激素释放激素(thyrotropin-releasing hormone,Trh)基因相对表达;应用苏木精-伊红染色(HE染色)观察GD20胎脑形态学改变。结果表明:(1)高剂量BDE 209可引起胎鼠体质量异常改变。(2)BDE 209可引起孕期羊水和孕后期胎鼠循环TH水平紊乱,表现为GD15时,BDE 209可引起羊水FT3下降、TT4和TSH增高,但未见统计学意义;低、高剂量BDE 209均可引起羊水FT4水平升高(P<0.05或P<0.01),且具有剂量依赖性。GD20时,与GD15相比,对照组羊水TH水平有所变化,FT3和TT4水平均明显增高,而TSH水平有所降低;低、高剂量BDE 209引起FT3显著降低(P<0.05),FT4在高剂量组升高(P<0.05);低、高剂量BDE 209引起TSH水平显著升高(P<0.05)。GD20时,胎鼠血清TH变化与同时期羊水中的基本一致,BDE 209可致胎鼠血清FT3和TT4下降,虽然没有显著性差异,胎鼠血清TSH水平增高,尤其在高剂量组(P<0.05)。(3)BDE 209可导致孕育中胎脑Trh基因表达下调(P<0.05),并随着孕期进程而加重。(4)病理学观察发现BDE 209可引起孕末期胎鼠脑细胞结构发生变化,使细胞数量减少,脑组织出现萎缩。综上,孕期BDE 209暴露可影响胚胎大鼠生长发育;引起羊水TH水平紊乱、胚胎大鼠循环TH水平紊乱以及胚胎脑组织Trh基因表达抑制,导致脑组织结构产生病理改变。这些可能是BDE 209致子代发育神经毒性的病理基础。

六溴环十二烷转甲状腺素蛋白结合活性及其发育期暴露的甲状腺激素干扰效应研究

为了探讨新型溴代阻燃剂六溴环十二烷(HBCDs)的潜在健康危害,采用体外研究与动物暴露实验相结合的方法,分析了HBCDs与转甲状腺素蛋白(TTR)的结合活性,以及不同剂量HBCDs暴露对发育期大鼠体内甲状腺激素水平的干扰作用.TTR竞争结合实验显示,HBCDs与125 I-T4竞争结合TTR的能力随溶液浓度的增加而升高,但即使在80μmol.L-1的高浓度下,125I-T4与TTR的结合率仍高达75.08%,表明HBCDs抑制甲状腺激素T4与转运蛋白结合的能力较弱.动物实验结果表明,新生3 d大鼠暴露于0.2 mg/kg及1 mg/kg剂量的HBCDs 21 d后,与对照组相比,暴露组大鼠血清中总三碘甲状腺原氨酸TT3、游离三碘甲状腺原氨酸FT3的含量显著升高(p<0.05、p<0.05);总甲状腺激素TT4、游离甲状腺激素FT4含量下降约20%,促甲状腺激素水平上升30%～230%,但3个指标变化均不具统计学意义.结合体内实验及动物实验结果,HBCDs可能通过对甲状腺激素T3的协同或替代作用产生直接和间接的甲状腺干扰效应.低剂量的HBCDs暴露即可导致发育期大鼠甲状腺激素内稳态失衡,对HBCDs发育期暴露的毒性作用值得关注.

水环境中溶解态腐殖酸对锌抗甲状腺激素干扰效应的影响

本文以重金属锌为研究对象,应用重组人甲状腺激素受体(h TR)基因酵母快速测试方法,检测溶解态腐殖酸对锌抗甲状腺激素干扰效应的影响,利用阳极溶出伏安法(ASV)检测溶解态腐殖酸与锌作用后,生物有效态锌含量的变化,同时利用三维荧光光谱中的激发-发射矩阵(3DEEM)技术初步考察腐殖酸与锌的作用机制.结果表明,氯化锌具有显著的抗甲状腺激素干扰效应,其RIC20(抑制率为20%时氯化锌的浓度)值为1.70×10-5mol·L^(-1),当腐殖酸与氯化锌作用后,其抗甲状腺激素干扰效应降低了30%~50%,ASV测试结果表明当腐殖酸和氯化锌溶液混合后,生物有效态锌含量明显降低,与生物测试结果相似;紫外照射腐殖酸与氯化锌的混合体系后,其抗甲状腺激素干扰效应上升,但仍低于未加腐殖酸氯化锌溶液的抗甲状腺激素干扰效应值;3DEEM的测试结果表明氯化锌能够降低腐殖酸荧光峰的荧光强度,能够直观地表征腐殖酸与氯化锌相互作用.上述结果可为研究环境水体中锌的生物毒性及锌水质基准的制定提供基础数据和理论支持.

丙硫氧嘧啶干扰甲状腺功能的亚急性毒性研究

[目的]研究丙硫氧嘧啶(Propylthiouracil,PTU)干扰甲状腺功能的亚急性毒性状况,为PTU致甲状腺肿的组织发生学研究提供实验室基础数据。[方法]SD大鼠150只,随机分为15组,包括3、6、9、12、15、18、21d的试验组和同期对照组,对照组用玉米油灌胃,试验组用PTU的玉米油溶液灌胃,于每个实验期结束的d2麻醉后股动脉放血处死动物,取甲状腺、肝、肾、脾、胸腺,称重后进行组织病理学观察。[结果]试验组血清TT3、TT4浓度先降低再进入平缓期,TSH浓度是先升高再进入平缓期,甲状腺绝对重量和脏器系数均持续升高,和对照组相比,6d时差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]PTU5mg/(kg.day)的剂量染毒大鼠21d,除干扰甲状腺功能,未见其他毒性反应,甲状腺在持续增生,功能尚未代偿。因此用该方法研究甲状腺的组织发生学是可行的。

有机磷阻燃剂甲状腺干扰效应及其作用机制研究——以磷酸三(2-氯丙基)酯(TCPP)为例

以典型有机磷阻燃剂磷酸三(2-氯丙基)酯(TCPP)为研究对象,应用GH3细胞增殖实验检测TCPP对甲状腺激素的干扰效应;应用重组甲状腺激素受体(TR)基因酵母实验和GH3(TRβ-)细胞增殖实验结合实时定量PCR技术初步探究TCPP甲状腺激素干扰作用机理.结果表明,TCPP在1×10^(-4)mol/L和2×10^(-4)mol/L浓度下对甲状腺激素T3诱导的GH3细胞增殖产生抑制效应;重组TR基因酵母实验和GH3(TRβ-)细胞增殖实验测试结果表明TCPP可能通过TR介导的基因组途径和非基因组途径诱导甲状腺激素干扰效应;实时定量PCR测试结果表明TCPP下调相关基因如:c-fos、TRβ、integrin-av和k-ras的m RNA表达,初步认为TCPP可能通过影响TRβ基因表达和激活αvβ3-ERK-1/2信号通路产生甲状腺激素干扰效应.

三丁基锡对非洲爪蟾甲状腺组织结构的影响

幼龄非洲爪蟾(Xenopus laevis)暴露于低浓度三丁基锡(25ng.L-1TBTCl)中2个月,运用组织学切片的方法观测甲状腺组织结构的变化.结果表明,TBT暴露1个月能引起爪蟾甲状腺滤泡胶质减少甚至空泡化,暴露2个月后,甲状腺滤泡的变形率也显著增加,相对甲状腺横截面积和滤泡面积仅为平行对照的35.3%和45.6%,而滤泡数目没有明显变化.空白组和暴露组均未观察到明显的滤泡上皮增厚或肥大等现象.由此可见,甲状腺萎缩是由于滤泡面积减小而不是滤泡数目减少所引起的;滤泡中胶质的减少和变形等与常见的滤泡上皮代偿性增生或肥大无关.所用低浓度的TBT能对爪蟾甲状腺组织结构造成严重损伤,TBT可以被认定为一种环境甲状腺激素干扰物.

丙硫氧嘧啶致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)致甲状腺增生的量效关系,为以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系的建立提供实验室依据。[方法]SD大鼠100只,雌雄各半,随机分为1个对照组和4个实验组。对照组用玉米油灌胃;实验组用不同剂量的PTU的玉米油溶液灌胃。于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察。[结果]在PTU剂量为5mg/(kg·d)的实验组,雌雄鼠甲状腺脏器系数均高于对照组(P﹤0.05);组织学观察发现随着PTU剂量增加,甲状腺增生程度有所加重;组织学观察到的最小有作用剂量分别比脏器系数提前3和2个剂量组。[结论]选择甲状腺增生的组织学早期改变为实验观察敏感性终点,建立以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系是可行的。

杀草强致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究杀草强(Amitrole)致甲状腺增生的量效关系,为杀草强的体内短期甄别甲状腺激素干扰物的标准化实验提供剂量设计依据。[方法]SD大鼠40只,随机分为1个对照组和4个实验组。对照组用蒸馏水灌胃,实验组用不同剂量的杀草强溶液灌胃。于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察及PAS染色观察。[结果]在100mg/(kg.day)剂量组,大鼠甲状腺脏器系数高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05);在200mg/(kg.day)剂量组甲状腺增生以实心继发滤泡为主。[结论]杀草强可作为短期甄别甲状腺激素干扰物实验体系的验证药物,200mg/(kg.day)可作为验证实验的中心剂量。