甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅰ 观察指标的探讨

目的 :研究二巯基敌枯双所致甲状腺的形态改变 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法 :Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,常规 HE染色 ,光镜下观察。结果 :各时间点实验组血清 T4,TSH的浓度和对照组相比无显著变化 (P>0 .0 5 ) ;实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 ,(P<0 .0 5 ) ;组织学观察到实验组在第 5 d甲状腺滤泡上皮增生 ,有的滤泡出现局灶性增生斑块 ,第 10 d复层化的甲状腺滤泡上皮细胞继续增生 ,并向间质突出 ,形成实心芽 ,第 2 0 d实心芽向继发滤泡分化 ,出现了滤泡腔。结论 :二巯基敌枯双引起甲状腺增生 。

甲状腺激素干扰物体内甄别实验初探

目的 研究二巯基敌枯双对甲状腺的生物作用 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组 ( n=3 0 )和实验组 ( n=3 0 )。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 m g/kg。于给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,动物称重后分别放血处死两组动物。测定血清中 T4和 TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重测定甲状腺脏器系数 ;常规 HE染色 ,光镜下观察组织学变化 ;用免疫酶法测定核增殖抗原 ( PCNA)在甲状腺中的阳性表达 ;用酶组织化学方法观察甲状腺琥珀酸脱氢酶( SDH)、甲状腺过氧化物酶 ( TPO)活性的变化。结果 实验组各期甲状腺脏器系数显著高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮增生 ;实验组各期 PCNA表达阳性细胞数明显高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性也明显增高 ( P<0 .0 5 )。

环境水体中甲状腺激素干扰物的研究进展

甲状腺激素在人类和动物的新陈代谢、生长发育与繁殖过程中起着重要的调节作用,环境中甲状腺激素干扰物(TDCs)会影响甲状腺激素的合成、分泌和代谢过程,从而干扰机体中由甲状腺激素调节的各项生理功能,对机体造成危害。主要介绍了环境中TDCs的种类、作用机制和环境水体中TDCs的生物检测方法,并展望了未来环境中TDCs的研究方向。

水环境中甲状腺激素干扰物分析方法研究进展

水环境中存在多种内分泌干扰物,对人类和动物的内分泌机能具有极大的破坏性,并可能对生态环境造成严重影响。以对人类与动物影响较大的甲状腺激素干扰物为分析重点,综述了水环境中甲状腺激素干扰物的化学分析和生物测试两类检测方法,并展望了水环境中甲状腺激素干扰物化学分析与生物检测的研究趋势,以期更好地开展对水环境中甲状腺激素干扰物的污染特征及生物学效应评价。

甲状腺激素干扰物对鱼类甲状腺轴的干扰效应研究进展

甲状腺激素干扰物(thyroid-disrupting chemicals,简称TDCs)能够通过干扰鱼体甲状腺激素(thyroid hormones,简称THs)的合成、转运、转化及代谢等过程造成其水平紊乱,影响甲状腺组织的结构和生理功能。为更系统地阐述TDCs对鱼类甲状腺轴的干扰,综述各类TDCs对鱼类下丘脑-垂体-甲状腺轴(hypothalamus-pituitarythyroid axis,简称HPT)干扰的最新研究进展,归纳分析TDCs对鱼类甲状腺激素水平、甲状腺组织病理学变化、HPT轴相关基因表达以及生长发育指标的干扰作用,在基因水平上探讨其可能的作用机制,并就水体中TDCs对鱼类HPT轴干扰效应的未来研究方向进行展望。

改进型重组基因酵母TR-GRIP1检测化合物甲状腺激素干扰活性

应用酵母双杂交技术构建重组TR(甲状腺激素受体)基因酵母,用以检测类抗甲状腺激素化合物及环境样品的甲状腺激素干扰活性.提取并纯化含有TR基因的酵母表达质粒pGBT9-TR以及含有TR共激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒pGAD424-GRIP1,将pGBT9-TR和pGAD424-GRIP1同时转化至酵母细胞Y187,以营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)筛选阳性菌落,构建TR-GRIP1双杂交酵母.考察该酵母与天然甲状腺激素——T3(三碘甲状腺原氨酸)的结合情况,确定最佳暴露时间,建立剂量-效应关系曲线.结果表明:TR-GRIP1双杂交酵母能够与T3结合诱导β-半乳糖苷酶活性,选择暴露时间为2 h,T3诱导酶活性的EC50值为1.1×10-7 mol/L;构建的重组基因酵母TR-GRIP1提供了检测化合物甲状腺激素干扰活性的新方法.

污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制

环境中可以影响生物体甲状腺激素合成、运输、作用和代谢等过程的化学污染物称为甲状腺激素干扰物(TDCs),TDCs被认为是继环境雌激素之后最重要的一类内分泌干扰物.鱼类甲状腺的结构、甲状腺激素的转运和功能等与哺乳动物有较大差别.与哺乳动物相比,污染物干扰鱼类甲状腺激素的研究还较为缺乏.在介绍鱼类甲状腺结构、功能以及甲状腺激素在鱼体内动态过程的基础上,分析了污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制,探讨了今后鱼类甲状腺激素干扰研究的主要方向.污染物能对鱼类甲状腺激素水平、相关酶活性及甲状腺结构等产生直接影响;同时,污染物还可以通过干扰鱼类甲状腺系统对由甲状腺激素调节的重要生理过程如生长、繁殖和发育等产生间接影响.污染物主要通过干扰鱼类甲状腺激素的合成与分泌、转运、清除以及与甲状腺激素受体(TR)的相互作用等机制对鱼类产生不利影响.在污染物对鱼类甲状腺激素干扰的研究中,今后应重点关注环境中"新型"卤化有机污染物、鱼类早期发育过程与甲状腺激素干扰效应的关系、TR介导机制以及TDCs的筛选方法等.

运用爪蟾变态实验检测镉的甲状腺激素干扰效应

将NF51阶段非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪暴露于Cd2+浓度为0.01,0.1和1mg.L-1的溶液中21d,观测Cd2+对爪蟾的生长、变态和甲状腺组织结构的影响.1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪与对照组相比,7d后,平均体重减少了0.39倍,体长和后肢长分别减少了0.17倍和0.27倍,发育阶段稍有延缓;21d后,1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪后肢长减小了0.11倍,延缓了1个发育阶段.其余各浓度组在7d和21d暴露后,体重、体长、后肢长和发育阶段与对照组无显著差异.21d后,Cd2+各浓度组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、胶质减少甚至空泡化等现象,1mg.L-1Cd2+暴露组甲状腺滤泡之间还出现溶通现象.结果表明CdCl2具有甲状腺激素干扰效应,并可能是由于该化合物直接作用于甲状腺组织引起.由此可见,爪蟾变态实验可以有效检测重金属盐的甲状腺激素干扰效应.

全氟辛磺酸对于爪蟾的甲状腺激素干扰效应

运用两栖类变态实验（AMA）研究了全氟辛磺酸（PFOS）对于非洲爪蟾（Xenopuslaevis）蝌蚪的生长、变态和甲状腺组织结构的影响．结果显示，与对照组相比，7d后，10，50和250μμg·L^-1。PFOS暴露组蝌蚪的后肢长分别减小了17％，11％和18％，蝌蚪的发育延缓了1～2个阶段；19d后，10，50和250μg·L^-1PFOS组蝌蚪的体重分别增加了17％，10％和20％，体长分别增加了5％，4％和6％，而10μg·L^-1和250μg·L^-1。PFOS组蝌蚪的后肢长分别减小了12％和13％；暴露组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、上皮细胞增生、胶质减少甚至滤泡溶通等现象．结论是，在本实验浓度下，PFOS对于非洲爪蟾的蝌蚪生长有促进作用，对于变态发育过程却有抑制作用．参照AMA的方法，可以判断PFOS为抗甲状腺激素干扰物．

丙硫氧嘧啶干扰甲状腺功能的亚急性毒性研究

[目的]研究丙硫氧嘧啶(Propylthiouracil,PTU)干扰甲状腺功能的亚急性毒性状况,为PTU致甲状腺肿的组织发生学研究提供实验室基础数据。[方法]SD大鼠150只,随机分为15组,包括3、6、9、12、15、18、21d的试验组和同期对照组,对照组用玉米油灌胃,试验组用PTU的玉米油溶液灌胃,于每个实验期结束的d2麻醉后股动脉放血处死动物,取甲状腺、肝、肾、脾、胸腺,称重后进行组织病理学观察。[结果]试验组血清TT3、TT4浓度先降低再进入平缓期,TSH浓度是先升高再进入平缓期,甲状腺绝对重量和脏器系数均持续升高,和对照组相比,6d时差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]PTU5mg/(kg.day)的剂量染毒大鼠21d,除干扰甲状腺功能,未见其他毒性反应,甲状腺在持续增生,功能尚未代偿。因此用该方法研究甲状腺的组织发生学是可行的。

三丁基锡对非洲爪蟾甲状腺组织结构的影响

幼龄非洲爪蟾(Xenopus laevis)暴露于低浓度三丁基锡(25ng.L-1TBTCl)中2个月,运用组织学切片的方法观测甲状腺组织结构的变化.结果表明,TBT暴露1个月能引起爪蟾甲状腺滤泡胶质减少甚至空泡化,暴露2个月后,甲状腺滤泡的变形率也显著增加,相对甲状腺横截面积和滤泡面积仅为平行对照的35.3%和45.6%,而滤泡数目没有明显变化.空白组和暴露组均未观察到明显的滤泡上皮增厚或肥大等现象.由此可见,甲状腺萎缩是由于滤泡面积减小而不是滤泡数目减少所引起的;滤泡中胶质的减少和变形等与常见的滤泡上皮代偿性增生或肥大无关.所用低浓度的TBT能对爪蟾甲状腺组织结构造成严重损伤,TBT可以被认定为一种环境甲状腺激素干扰物.

丙硫氧嘧啶致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)致甲状腺增生的量效关系,为以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系的建立提供实验室依据。[方法]SD大鼠100只,雌雄各半,随机分为1个对照组和4个实验组。对照组用玉米油灌胃;实验组用不同剂量的PTU的玉米油溶液灌胃。于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察。[结果]在PTU剂量为5mg/(kg·d)的实验组,雌雄鼠甲状腺脏器系数均高于对照组(P﹤0.05);组织学观察发现随着PTU剂量增加,甲状腺增生程度有所加重;组织学观察到的最小有作用剂量分别比脏器系数提前3和2个剂量组。[结论]选择甲状腺增生的组织学早期改变为实验观察敏感性终点,建立以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系是可行的。

杀草强致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究杀草强(Amitrole)致甲状腺增生的量效关系,为杀草强的体内短期甄别甲状腺激素干扰物的标准化实验提供剂量设计依据。[方法]SD大鼠40只,随机分为1个对照组和4个实验组。对照组用蒸馏水灌胃,实验组用不同剂量的杀草强溶液灌胃。于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察及PAS染色观察。[结果]在100mg/(kg.day)剂量组,大鼠甲状腺脏器系数高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05);在200mg/(kg.day)剂量组甲状腺增生以实心继发滤泡为主。[结论]杀草强可作为短期甄别甲状腺激素干扰物实验体系的验证药物,200mg/(kg.day)可作为验证实验的中心剂量。

二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅱ:组织化学观察

目的 :研究甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺组织化学的改变 ,并探讨所致甲状腺增生的最佳取材时间和敏感指标。方法 :Wistar大鼠 6 0只 ,随机分成正常对照组和实验组 ,每组各 30只。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双的二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 m g/ kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。用酶组织化学方法观察甲状腺琥珀酸脱氢酶 (SDH)、甲状腺过氧化酶酶活性的变化 (TPO) ;用免疫酶法测定核增殖抗原 (PCNA)在甲状腺中的阳性表达。结果 :实验组各期甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性明显增高 (P<0 .0 5 ) ,实验组的各期 PCNA表达阳性细胞数也明显高于同期对照组 (P<0 .0 5 )。结论 :甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性增高是 TSH刺激的结果 ,其最佳取材时间应是 5 d以前 ,而敏感指标应该是核增殖抗原 (PC-NA)。

PCNA在PTU致大鼠甲状腺增生效应中的表达规律

目的分析增殖细胞核抗原(PCNA)在甲状腺素干扰物丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)致大鼠甲状腺增生效应中的表达规律。方法雄性SD成年大鼠,PTU(5.0mg/kg.d)灌胃染毒,分别设染毒3d、染毒6d、染毒9d、染毒12d组和对照组,每组5只大鼠,在染毒期满后处死动物,取甲状腺组织进行PCNA的免疫组化染色和RT-PCR检测。结果与对照组相比,免疫组化染色和RT-PCR均检测到PCNA在染毒3d组明显增高(P<0.05),染毒6d组达到最高,染毒9d、染毒12d组呈现下降的趋势。结论PCNA在甲状腺增生中存在先增高后降低的表达规律,提示甲状腺激素干扰物甄别试验的动物试验期可明显缩短为6d。

二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅲ:时效关系的探讨

目的 :研究甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺的形态、血清 T4 和 TSH改变 ,探讨二巯基敌枯双生物作用的时效关系。方法 :Wistar大鼠 78只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双的二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/ kg体重。于实验组的给药第 1d、第 3d和第 5 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4 ,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,同时光镜下观察其形态学的变化。结果 :第 3d和第 5 d实验组血浆 TSH的浓度和对照组相比 ,显著增高 (P<0 .0 5 ) ,第 5 d实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮局灶增生成增生斑。第 3d实验组甲状腺脏器系数与对照组比较尽管无差异 ,但组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮已增生成复层。结论 :TSH、甲状腺的脏器系数和甲状腺的组织学观察在本实验中呈现明显的时间效应关系 ,而且最早出现生物学指标变化的时间是实验第 3d。

多氯联苯(Aroclor 1254)对非洲爪蟾变态发育的影响

为了研究多氯联苯(Aroclor 1254)对非洲爪蟾变态发育的影响,将非洲爪蟾受精卵暴露在一定浓度(0、400ng·L-1、2μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1)的Aroclor 1254中,直至完全变态.结果表明,20μg·L-1Aroclor1254暴露可使变态所需时间显著延长(p<0.05),低于20μg·L-1的各组变态所需时间与对照组无显著差异.2μg·L-1以上的Aroclor1254暴露可使蝌蚪甲状腺发生明显的组织学改变,包括甲状腺组织滤泡扩张、胶体面积相对缩小,滤泡细胞增殖、高度增加,并且这种变化随暴露剂量的增加而愈发明显.提示多氯联苯可干扰非洲爪蟾的变态发育,引起甲状腺组织学改变.采用定量组织病理学技术检测甲状腺激素干扰物较为灵敏,方法简单易行,是一种切实可行的筛选和确证甲状腺干扰物的体内方法.

多氯联苯对非洲爪蟾变态发育的影响研究

将非洲爪蟾蝌蚪从发育的第52期开始暴露在不同浓度(0、10、25、50、100μg/L)的多氯联苯(Aroclor1254)中,直到变态结束,研究其对非洲爪蟾变态发育的影响。结果表明,在变态高峰期前,对照组和试验组的存活率无显著的差别,而在变态高峰期,浓度高于10μg/L的试验组蝌蚪大量死亡,各组存活率分别为25μg/L组72.9%,50μg/L组53.1%,100μg/L组12.3%;各浓度组蝌蚪在变态结束时的体重无显著差异(P>0.05);50μg/L组和100μg/L组蝌蚪变态高峰期所需的时间与对照组相比差异显著(P<0.05);25μg/L以上浓度组,蝌蚪甲状腺组织表现不同程度的滤泡扩张,滤泡上皮细胞增生、叠加,滤泡数目增多等。提示多氯联苯可干扰非洲爪蟾的变态发育,两栖类变态试验可以作为筛选甲状腺激素干扰物的一种简便可行的方法。

丙硫氧嘧啶致甲状腺组织增生的时效关系研究

目的初步建立以染毒(PTU)为模型的甲状腺激素干扰物体内短期甄别实验系统。方法PTU(5mg/kgbw)灌胃染毒,分别设丙硫氧嘧啶染毒3、6、9、12天实验组及溶剂对照组,每组10只大鼠,在染毒期满后处死动物,取血清,用全自动化学发光法测量TT3,TT4和TSH,同时观察甲状腺组织病理改变,PAS染色观察胶质的改变,免疫组化法和Western-blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果与对照组相比,染毒3天组,TT3开始出现显著的降低(P<0.05),6、9、12天组,TT3、TT4浓度均显著降低,并伴TSH浓度显著升高(P<0.05)。甲状腺脏器系数在6、9、12天组均显著高于对照组(P<0.05)。组织学观察发现3天组甲状腺滤泡上皮复层化;6天组弥漫性增生,大量增生斑、实心芽形成(P<0.05);9天组纤维母细胞和毛细血管内皮细胞大量增生,大量实心继发滤泡形成;12天组有大量的空心继发滤泡形成。PAS染色显示,3、6、9天组的甲状腺滤泡胶质染色弱阳性,12天组甲状腺滤泡胶质染色阴性。免疫组织化学检测的PCNA标记指数和Western-blot检测的PCNA/β-actin的相对值随时间变化的规律完全一致,即3天组开始显著增加(P<0.05);而6天组达到高峰(P<0.05);9天组开始减少(P<0.05);12天组与对照组相比则差异无显著性。结论初步确定甲状腺激素干扰物体内短期甄别实验实验观察终点为增生斑和实心芽,以及IHC检测的PCNA标记指数,最佳实验期为6天。