新的肺癌血清标志物——甲状腺运载蛋白

背景与目的肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,迄今缺乏临床诊断可用的分子标志物。本实验应用SELDI技术寻找肺癌新的血清标志物。方法对227例血清样品(包括146例肺癌、13例肺炎、28例结核性胸膜炎和40例正常人血清样品)进行蛋白质谱检测。对候选蛋白进行质谱鉴定,并结合免疫共沉淀和ELISA技术筛选出肺癌新的候选标志物。结果通过Biomarker WizardTM软件分析显示13.78kDa、13.90kDa和14.07kDa的蛋白峰在肺癌病人血清样品中明显低于对照组。通过1-D胶分离,质谱鉴定和免疫沉淀分析显示这3个差异蛋白峰为野生型甲状腺运载蛋白(nativeTTR)和它的两个变体(cysTTR and glutTTR)。ELISA和SELDI技术分析上述血清样品均发现TTRs在肺癌血清中的表达下调。结论采用SELDI技术首次筛选并鉴定出TTRs,表明其可能作为肺癌诊断的候选血清标志物。

碱化修饰甲状腺素运载蛋白显著增强对淀粉样β蛋白聚集的抑制作用

阿尔茨海默症与淀粉样β蛋白(amyloid-βprotein,Aβ)的纤维化聚集有关,因此开发高效的抗Aβ聚集的抑制剂是防治阿尔茨海默症的策略之一。研究发现,甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)可通过疏水作用抑制Aβ单体之间的聚集,但抑制作用需要较高蛋白浓度(150μg·ml^(-1))。为了提高TTR抑制Aβ聚集的作用,本研究利用乙二胺修饰TTR表面的羧基,生成碱化甲状腺素运载蛋白(TTR-B),以增加其与带负电荷的Aβ之间的静电相互作用。研究表明,修饰度最高的TTR-B3(平均每分子TTR上38.9%的羧基被转换成氨基)对Aβ聚集的抑制能力显著提高,在较低的浓度下(15μg·ml-1)即可有效缓解Aβ对细胞的毒性(使细胞活性从78%提高至>90%),浓度仅为TTR的10%。与碱化人血清白蛋白(HSA-BF)相比,TTR-B3用量为HSA-BF的75%时即可使AD线虫延长相同的寿命,在HSA-BF用量的45%时即可完全清除AD线虫体内的Aβ斑块。结果表明TTR-B3是一种高效的Aβ聚集抑制剂。

四溴双酚A和甲状腺素运载蛋白复合物的电喷雾质谱研究

为阐明四溴双酚A(TBBPA)的内分泌干扰机制,构建了电喷雾质谱法研究四溴双酚A和甲状腺素运载蛋白(TTR)的相互作用,考察了电喷雾离子源条件对TTR蛋白和TTR蛋白质复合物多电荷峰的影响,证明了电喷雾质谱是研究蛋白质多聚体和蛋白质复合物的有力工具.结果表明:在温和的电喷雾电离条件下,四溴双酚A和TTR蛋白可形成稳定的摩尔比为1︰1和2︰1复合物,影响TTR蛋白和天然底物甲状腺素(T4)的结合,干扰甲状腺素在生物体内的正常运输和生理功能.

甲状腺运载蛋白-胆管癌血清中表达下调的蛋白

目的胆管癌发病率不高，但恶性程度高，早期诊断困难，迄今缺乏临床诊断可用的分子标志物。实验利用SELDI技术寻找胆管癌新的血清标志物。方法对60例胆管癌、146例肺癌、65例喉癌、58例喉咽癌、49例胆管良性疾病和53例正常人血清样品进行蛋白芯片检测。对候选蛋白进行质谱鉴定，并结合免疫共沉淀和EuSA技术筛选出胆管癌新的候选标志物。结果通过Bio—markerWizard”软件分析显示13．71×10^3，13．83×10^3和13．99×10^3的蛋白峰在胆管癌患者血清样品中明显低于对照组。通过1-D胶分离、质谱鉴定和免疫沉淀分析，显示这3个差异蛋白峰为野生型甲状腺运载蛋白（nativeTTR）和它的两个变体（cysTTR和glutTTR）。ELISA和SELDI技术分析上述血清样品均发现TTRs在胆管癌血清中的表达下调。结论采用SELDI技术首次筛选并鉴定出TTRs，表明其可能作为胆管癌诊断的候选血清标志物。

溴代阻燃剂与甲状腺素运载蛋白相互作用的非变性电喷雾质谱研究

该文采用非变性电喷雾质谱法(Native electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)与分子对接模拟计算(MD)分别研究了1种溴代阻燃剂和2种羟基化代谢物,即3,5,3',5'-四溴-4,4'-二羟基基二苯砜(TBS)、4-羟基-2,2',3,4',5,5',6-八溴联苯醚(4-OH-BDE-187)、6-羟基-2,2',3,4,4',5,5'-八溴联苯醚(6-OH-BDE-180)与甲状腺素运载蛋白(TTR)的相互作用情况。ESI-MS结果表明,在37℃及生理pH值条件下的醋酸铵缓冲溶液中,TBS与TTR蛋白可形成稳定的化学计量比为1∶1的复合物,4-OH-BDE-187、6-OH-BDE-180可与TTR蛋白分别形成稳定的化学计量比为1∶1和2∶1的复合物。通过分子对接模拟计算方法推测了上述3种配体与TTR可能的结合模型,发现3种配体与TTR的结合位点位于ASP-74残基附近。研究结果可为进一步了解溴代阻燃剂及其羟基化代谢产物体内的生物过程及毒性机制提供实验基础。

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。

帕替西朗治疗遗传性甲状腺素运载蛋白介导淀粉样变的多发神经病变Ⅲ期临床试验取得阳性结果

Alnylam制药和赛诺菲旗下健赞公司公布了其RNAi在研新药帕替西朗（patisiran），在治疗遗传性甲状腺素运载蛋白介导淀粉样变的多发性神经病变Ⅲ期临床APOLLO试验中取得了极佳的效果，达到了主终点和次终点。该试验是随机、双盲、安慰剂对照的全球性研究，评价该药每3周1次0．3mg／kg，共18周治疗225名患者的疗效和安全性。主终点是治疗18周时，神经病变损害得分较基线时的改变，即感觉运动能力、神经传导、反射和自主神经功能。次终点是生活质量评分。

欧洲药品管理局批准Tafamidis上市用于甲状腺素运载蛋白淀粉样变性

2011年11月16日，欧洲药品管理局（EMA）人用药品委员会（CHMP）建议批准辉瑞（Pfizer）制药公司的产品Tafamidis（商品名：Vyndaqel）上市，用于延缓甲状腺素运载蛋白淀粉样变性引起的神经损伤。

系统性老年性淀粉样变患者血清转甲状腺素蛋白出现三种修饰基团减少

目的:探讨转甲状腺素(TTR)蛋白代谢修饰与淀粉样变形成的分子机制。方法:本研究首先利用ProteomeLabPF-2D系统依据蛋白质等电点分选各个p H值范围蛋白质,然后利用抗人TTR抗体,点免疫印迹实现鉴定TTR蛋白存在于被收集的范围。利用硫黄素T(ThT)试剂,测定各个收集部分溶液中淀粉样变的含量,进一步利用飞行质谱的表面增强激光解吸/电离时间(SELDI-TOF-MS)分析各个部分TTR蛋白的修饰类型。结果:系统性老年性淀粉样变(SSA)患者和健康志愿者血清pH范围分别为8.1～8.0,4.0～4.6及6.8～5.8范围时出现高丰度蛋白。并且SSA患者p H6.8～5.8范围淀粉样变含量明显高于对照组(P<0.05),其中SSA组与健康组相比,血TTR蛋白N端氨基酸修饰基团包括磷酰基(Phosphoryl)、羟基(Hydroxyl)、葡萄糖胺(O-GlcNac)基团修饰阴性。结论:SSA患者血TTR蛋白N端氨基酸修饰基团Phosphoryl、Hydroxyl、O-GlcNac的减少可能与淀粉样蛋白的形成有关。

视黄醇结合蛋白及视黄醇转运机制

视黄醇类结合蛋白(RBP)是视黄醇特异性的载体蛋白,存在于血浆和其他组织细胞中。它可通过与视黄醇类物质、甲状腺素运载蛋白(TTR)的相互作用完成肝脏和靶细胞之间的视黄醇的运输。本文就RBP的分类、功能以及其转运视黄醇的机制作一概述。

人参皂苷Rg1通过抑制TTR延缓X射线颅脑照射后小鼠海马衰老

目的探讨人参皂苷Rg1延缓X射线颅脑照射后小鼠海马衰老的可能机制。方法将40只C57BL/6J小鼠随机均分为空白对照组(Con组)、颅脑照射组(IR组)、人参皂苷Rg1预处理组(Rg1组)、人参皂苷Rg1预处理颅脑照射组(Rg1+IR组)。观察各组小鼠体质量、进食情况、活动状态、精神状态、毛色与大小便评估健康状况;采用Morris水迷宫评估小鼠认知能力;采用SA-β-Gal染色检测海马齿状回衰老细胞数量;采用转录组测序分析确定Rg1抗辐射衰老的靶点;采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测靶点的表达水平。结果与Con组相比,IR组小鼠体质量减轻、进食量减少、活动减少、精神倦怠、毛发灰暗、大便稀溏,出现明显的认知能力下降,海马齿状回衰老细胞增多(P<0.05)。与IR组相比,Rg1+IR组小鼠上述指标均有改善(P<0.05)。甲状腺素视黄质运载蛋白(TTR)为筛选出的最显著靶点。IR组小鼠海马中TTR表达较Con组升高(P<0.05),而Rg1+IR组TTR表达较IR组降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制TTR延缓X射线颅脑照射后小鼠的海马衰老,从而保护认知能力。

淀粉样变心脏病的治疗进展

淀粉样变性的病理包括多种蛋白质沉着于各个器官系统。英国5100例淀粉样变患者的主要分型比例为,免疫球蛋白轻链（AL）型占67％、继发（AA）型占12％、甲状腺素运载蛋白（ATTR）型占6.6％、老年全身性淀粉样变性（野生型甲状腺素运载蛋白）（Senile）型占3.3％,其他型包括纤维蛋白原和载脂蛋白突变产生的淀粉样变性,未定型占4％的病例。由于某些类型的检出率低（如老年全身性淀粉样变性）,故以上数据并不能准确反映每种类型真实的发生率和比例。如果该种疾病不进行治疗,心脏明显受累患者的后果必然是死亡。

心脏淀粉样变性的诊断进展

淀粉样变性是由于淀粉样蛋白沉积在细胞外基质,造成沉积部位组织和器官损伤的一组疾病,出现心脏受累时即为心脏淀粉样变性,该病病情重、进展快、治疗困难、病死率高,但临床少见且识别率低。本文着重叙述其诊断手段和相关进展,并对诊断流程进行了归纳,以协助临床了解并正确诊断该病,使患者获得及时治疗并从中获益。

遗传性甲状腺激素结合蛋白异常性疾病

血清中的甲状腺激素主要通过与甲状腺激素结合蛋白结合来转运和贮存，甲状腺激素结合蛋白主要包括：甲状腺素结合球蛋白（TBG）、甲状腺素运载蛋白（TTR）和人血清白蛋白（HSA）。编码这3类蛋白的基因突变可导致遗传性甲状腺激素结合蛋白异常性疾病，表现为正常甲状腺功能性高甲状腺激素血症或正常甲状腺功能性低甲状腺激素血症，临床上极易误诊为甲状腺功能亢进症或甲状腺功能减退症。对这3类转运蛋白的分子结构、基因位点、致病突变及其临床特点的阐述，可提高对这类疾病的认识。

急性时相反应对学龄前儿童维生素A营养评价指标的影响

【目的】评估急性时相反应对维生素A评价指标,包括血清视黄醇,视黄醇结合蛋白(retinol binding pro-tein,RBP),甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)以及RBP:TTR摩尔比值的影响。【方法】从重庆巴南地区随机抽取四所幼儿园中的350名学龄前儿童作为研究对象,利用HPLC法测定其血清视黄醇浓度,ELISA测定血清RBP浓度,免疫比浊法测定血清中TTR和C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)水平并对其相关性进行分析。【结果】边缘性维生素A缺乏(marginal vitamin A deficiency,MVAD)儿童的RBP水平明显低于维生素A正常(normal vitamin A,NVA)儿童(P<0.01)。维生素A缺乏(vitamin Adeficiency,VAD)儿童和MVAD儿童TTR值均显著低于NVA儿童(P<0.01)。MVAD儿童的RBP∶TTR摩尔比值显著低于NVA儿童(P<0.05)。RBP∶TTR摩尔比值在维生素A不足且伴感染的儿童中最低(P<0.05),而在正常维生素A状态不伴感染的儿童中最高(但差异不明显)。【结论】在伴感染的学龄前儿童中评价其维生素A营养状况时,RBP∶TTR摩尔比值有可能是一个有用的指标,但是还需要进一步的研究对其使用效度进行评价。

血清TTR、PD-L1与复发或难治弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理特征及预后的关系

目的研究血清甲状腺素运载蛋白(TTR)与可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)与复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(R/R DLBCL)临床病理特征及预后的关系。方法将170例初治DLBCL患者纳为研究对象,抽取治疗前外周静脉血,采用R-CHOP方案化疗2~8个周期,评估疗效,将其中41例被评估为R/R DLBCL,纳为R/R DLBCL组,129例为缓解DLBCL,纳为DLBCL组。比较两组治疗前血清TTR及PD-L1水平,并分析R/R DLBCL患者血清TTR与PD-L1水平与其临床病理特征及预后的关系。结果R/R DLBCL组患者血清TTR及sPD-L1水平均显著高于缓解组(P<0.05)。R/R DLBCL患者结外病变、血清LDH与其血清TTR及sPD-L1水平有关(P<0.05),其他临床特征与血清TTR及sPD-L1水平无明显相关性(P>0.05);Hans分型、C-MYC/BCL-2及C-MYC/BCL-2/BCL-6表达水平与R/R DLBCL患者血清TTR及sPD-L1水平相关,其他病理特征与R/R DLBCL患者血清TTR及sPD-L1水平无相关性(P>0.05);以R/R DLBCL患者血清平均TTR及sPD-L1水平为分界点,将41例R/R DLBCL患者分为TTR高表达组(n=20)与低表达组(n=21),sPD-L1高表达组(n=16)与低表达组(n=25),绘制生存曲线发现,TTR高表达组患者生存状况显著优于TTR低表达组(P<0.05)。sPD-L1高表达组患者生存状况显著优于sPD-L1低表达组(P<0.05)。结论初次治疗前血清TTR及sPD-L1水平可有效反映DLBCL患者治疗效果及疾病进展,且在预测R/R DLBCL患者预后中也具有良好的价值。

血清多肽谱在胃癌早期诊断中的应用价值

目的 寻找早期胃癌相关的血清标志物,并评价其诊断价值.方法 利用质谱联合纳米磁珠技术对433例胃癌患者（其中包括65例ⅠA期患者）和120名健康人群的血清多肽谱进行研究,用Biomarker Wizard软件筛选差异峰.将所有研究对象分为测试组（204例胃癌患者和70名健康人）和验证组（229例胃癌患者和50名健康人）.进一步用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异峰,评价其灵敏度和特异性 并分析差异峰在不同分期的胃癌患者中分布情况.结果 通过42例胃癌患者和42名性别年龄匹配的健康人群血清比较筛选出13个差异峰（均P＜0.01）.在测试组和验证组中ROC曲线面积都在0.8以上的有2745、2768、6629、3402、6436 m/z 5个差异峰,同时鉴定出6629 m/z差异峰为甲状腺素运载蛋白.测试组分析显示,当6629 m/z取24.58这个截点时,可获得较高的诊断敏感度和特异度.验证组分析显示,6629 m/z总体诊断敏感度和特异度分别为65.5%和92.0%,对于ⅠA胃癌患者,其诊断敏感度为59.4%.结论 6629 m/z差异峰（甲状腺素运载蛋白）对于早期胃癌具有较高的诊断价值,有助于胃癌的早期筛查.

茯苓酸潜在靶点预测研究

目的:利用反向分子对接技术预测茯苓酸的潜在靶标。方法:采用PharmMapper在线服务器作为预测工具,选用PyRx0.8软件autodock vina模块进行分子对接验证。结果:预测得到茯苓酸与靶蛋白Transthyretin、Vitamin D3 receptor、corticosteroid11 beta dehydrogenase isozyme 1的结合较好,靶蛋白药效团模型与茯苓酸分子特征一致,分子对接显示茯苓酸与靶蛋白核心氨基酸有相互作用。结论:Transthyretin、Vitamin D3 receptor、Corticosteroid 11 beta dehydrogenase isozyme 1可能是茯苓酸潜在的靶点。

放射性核素示踪技术应用于心脏淀粉样变的研究进展

淀粉样变是由于错误折叠成B片层的前体蛋白异常聚集在细胞外,导致组织器官功能障碍的一组异质性疾病[1].多种类型的前体蛋白可以作用于心脏,包括轻链免疫球蛋白、突变的遗传性甲状腺素运载蛋白、野生型甲状腺素运载蛋白、突变的载脂蛋白和血清淀粉样A蛋白等[2].心脏淀粉样变是由于这些不可溶的蛋白纤维异常聚集在胞外基质,同时不断浸润损伤心肌细胞,最终导致以进行性收缩性和舒张性心力衰竭为主要表现的心脏疾病.这些淀粉样物质在光镜下能被刚果红染成砖红色,偏振光下呈现特征性苹果绿,因而心内膜活检是心脏淀粉样变诊断的＆quot;金标准＆quot;[3].