蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响

目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。

四溴苯三唑对甲状腺鳞癌SW579细胞凋亡的影响

目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组细胞均在培养24 h后加药,加入不同浓度的TBB,使其终浓度分别为12.5、25、50、75、100μmol/L。培养到一定时间后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达。结果低浓度TBB组(12.5、25、50μmol/L)肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势;高浓度组(75、100μmol/L)细胞生长密度较对照组明显降低,与低浓度组相比,向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示,实验组细胞均出现显著的生长抑制作用,且呈剂量依赖性。实验组随着TBB药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加,细胞滞留在G1期。RT-PCR方法检测发现实验组细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平上调。结论 TBB可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其机制可能与上调Caspase-3基因表达,激活Caspase途径有关。

ATRA对甲状腺鳞癌细胞生长及RARβ和p21mRNA表达的影响

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及维甲酸受体β(RARβ)和p21表达的影响,进而探讨维甲酸的抗癌作用机制。方法甲状腺鳞癌SW579细胞株经不同浓度ATRA作用48h后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR方法检测细胞RARβ及p21mRNA的表达。结果随着ATRA的升高,SW579细胞的生长呈显著抑制状态,细胞生长滞留在G1期,RARβ和p21mRNA表达水平均显著上调,呈剂量依赖性。结论 ATRA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌SW579细胞株有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与提高细胞RARβ基因的表达、进而再上调p21的表达有关。

多西环素对人甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

研究多西环素对甲状腺癌SW579细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。采用MTT技术检测细胞增殖能力的变化,荧光分光光度计检测线粒体膜电位的变化,Western blot技术检测细胞色素C(CytC)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果显示,与对照组相比,多西环素组细胞存活率,线粒体膜电位,MMP-2蛋白表达,侵袭细胞数均明显降低(P<0.05),CytC表达明显增高(P<0.05),呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。因此,多西环素能有效抑制SW579细胞增殖和侵袭,并且能诱导其细胞凋亡。

原发性甲状腺鳞癌12例临床分析

目的 总结原发性甲状腺鳞癌的诊治经验。方法 回顾分析我院 1996～ 2 0 0 1年收治的 12例原发性甲状腺鳞癌患者的临床资料。结果 单纯性鳞癌 4例 ,合并甲状腺其它疾病 8例。主要临床表现为颈部包块和声嘶。单纯性鳞癌免疫组化甲状腺球蛋白染色阳性 3例 ,阴性 1例。 12例患者中 10例行姑息性切除者于术后 1年内死亡 ,2例行根治性切除者存活时间超过 3年。结论 原发性甲状腺鳞癌呈高度恶性 ,可与甲状腺其它良、恶性疾病并存 ;要重视对该病的诊断和鉴别诊断 ,免疫组化甲状腺球蛋白染色可提高确诊率 ;根治性手术切除加综合治疗是提高其生存率的关键。

原发性甲状腺鳞癌1例报告及文献复习

原发性甲状腺鳞状细胞癌（鳞癌）是一种临床罕见的甲状腺恶性肿瘤,发病率约占甲状腺恶性肿瘤的1%。其恶性程度高,预后极差。临床医生往往对其缺乏认识,现对我院近期收治的1例患者进行分析并结合文献报道如下。

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达。结果:TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P<0.05)。RT-PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达水平上调。结论:不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响。方法以终浓度为10^(-7)、5×10^(-7)、10^(-6)、5×10^(-5)、10^(-5)mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期。结果全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期。结论全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10^(-7)、5×10^(-7)、10^(-6) moL/L)可能对细胞具有诱导分化作用。

SBHL对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长抑制作用的研究

目的观察SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长的抑制作用,从分子水平探讨SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长抑制作用的机制。方法用MTT比色法观察不同浓度和作用时间的SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖的影响;用流式细胞术对细胞周期进行分析;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5mol/L-1×10-3mol/LSBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖有明显的抑制作用,这种抑制作用随SBHL浓度的增加而增加;流式细胞术对细胞周期进行分析的结果显示,随着SBHL浓度的增加,S期细胞含量逐渐降低,G1期细胞含量逐渐增加,SBHL将细胞阻滞于G1期,抑制DNA合成。SBHL处理的甲状腺鳞癌SW579细胞与对照组相比,端粒酶活性明显降低。结论 (1)SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长具有明显的抑制作用,而且这种抑制作用与SBHL的浓度呈正相关。(2)其机制可能与下调端粒酶活性,进而抑制肿瘤细胞生长有关。

原发性甲状腺鳞癌1例

患者男72岁,因＂发现颈部肿块20 d,声音嘶哑8 d＂于2010年10月11日入院。患者20 d前无明显诱因下发现颈部肿块,无疼痛,无声音嘶哑,无呼吸困难,无畏寒发热,未就诊,8 d前患者出现声音嘶哑,前往当地医院就诊,B超提示＂右侧甲状腺混合回声团块＂,遂转我院继续治疗。查颈部CT提示右侧甲状腺占位,边缘不光整。

白藜芦醇对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长及CDC25B蛋白表达的影响

目的通过观察白藜芦醇对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长及CDC25B蛋白(cell division cycle 25B)表达的影响,探讨白藜芦醇的抗癌作用机制。方法取对数生长期SW579细胞培养12h后,按浓度梯度25、50、100、200、400μmol.L-1加入白藜芦醇(实验组),对照组加入等体积含对应浓度DMSO的培养基,应用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化,同时应用Western Blot方法检测CDC25B蛋白表达情况。结果不同浓度(25、50、100、200、400μmol.L-1)白藜芦醇对SW579细胞生长均有抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05),并且改变细胞周期分布,实验组(100μmol.L-1白藜芦醇)S期[(28.55±0.58)%]比例明显高于对照组[(19.49±1.27)%](P<0.05),G2/M期[(8.79±0.74)%]比例显著低于对照组[(15.88±0.81)%](P<0.01),细胞分裂被阻滞。白藜芦醇作用24h后,与对照组(0.421±0.004)相比,实验组(100μmol.L-1白藜芦醇)(0.062±0.012)CDC25B蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论白藜芦醇能够显著抑制SW579细胞株的增殖,使其处于S期阻滞,其抑制作用可能与CDC25B蛋白表达下降有关。

全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579凋亡的影响

目的观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学变化和细胞凋亡。方法分别以终浓度为10-7、10-6、10-5、2×10-5、4×10-5、6×10-5、8×10-5、10-4mol/L的维甲酸作用SW 579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用吖啶橙染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果ATRA作用后,可见细胞形态改变;经荧光染色后可见凋亡的细胞,染色质浓集,呈致密的斑块状或新月状,并可见凋亡小体及核碎片;流式细胞仪分析,凋亡率随ATRA浓度的升高而升高(P<0.01)。结论不同浓度的ATRA可诱导SW 579细胞形态学变化及细胞凋亡。

原发性甲状腺鳞癌4例临床病理分析

目的 研究甲状腺鳞癌的临床特征、形态学和生物学特性，以区别于一般甲状腺癌。方法 回顾性分析我院1980—2004年收治的4例原发性甲状腺鳞癌患者临床及病理资料。结果 单纯性鳞癌2例，合并甲状腺其它疾病2例。主要临床表现为颈部包块和声嘶。单纯性鳞癌2例免疫组化甲状腺球蛋白染色均为阳性。4例患者均于行姑息性切除术后7个月内死亡。结论原发性甲状腺鳞癌呈高度恶性，可与甲状腺其它良、恶性疾病并存；要重视对该病的诊断和鉴别诊断，免疫组化甲状腺球蛋白染色可提高确诊率；根治性手术切除加放射治疗可能是提高其生存率的关键。

激活蛋白激酶A信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用及机制。方法利用PKA特异性激活剂双丁酰环化腺苷酸(dbcAMP)0.5、1.0和2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24、48和72 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测SW579细胞的生长活性;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h后PKA、成熟促进因子(message processing fac-tor,MPF)的活性;免疫印迹法(Western blotting法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h CDC25B-pS323(celldivision cycle 25B-pS323)磷酸化水平。结果 MTT法结果显示,在dbcAMP作用下,SW579细胞活力呈逐渐下降趋势,随dbcAMP剂量的增加和作用时间的延长,其作用越明显。ELISA法显示,dbcAMP使PKA活性升高而使MPF活性下降。未加dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(32.5±2.49)nmol/L和(115.5±7.53)ng/L;dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(436.33±12.85)nmol/L和(22.87±2.57)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting显示,dbcAMP能够使CDC25B-pS323磷酸化水平上调。未加dbcAMP组和dbcAMP组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用dbcAMP激活PKA信号通路,可以抑制甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖,其抑制作用可能与PKA/CDC25B/MPF信号通路的调控有关。

SBHL对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响及机制

目的为澳洲茄胺盐酸盐(SBHL)治疗甲状腺鳞癌提供理论依据。方法将1×10-5、5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3mol/L的SBHL作用于甲状腺鳞癌SW579细胞,分别于作用24、48、72、96 h后用MTT比色法观察增殖情况;用流式细胞仪分析细胞周期;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5～1×10-3mol/LSBHL作用后SW579细胞增殖明显受抑,呈浓度依赖性;细胞周期阻滞于G1期,随着SBHL浓度的增加,S期细胞逐渐降低,G1期细胞逐渐增加;端粒酶活性明显降低。结论 SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长具有明显抑制作用,其机制可能与下调端粒酶活性有关。

PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用

目的探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用。方法体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性。结果与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异(P>0.05);Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降(P<0.01),PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调(P<0.01),而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调(P<0.01),MPF活性明显下降(P<0.01)。结论甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响。

TSA对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响

目的探讨曲古押菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长增殖的影响。方法分别以终浓度为25、50、100、200、400 nmoL/L的TSA作用于SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的体外增殖、吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞形态及细胞凋亡、流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果TSA作用后对细胞的增殖有抑制作用;吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体生成;流式细胞仪分析凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P<0.05)。结论不同浓度的TSA可抑制SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

ATRA对甲状腺鳞癌SW579细胞株NIS表达的影响

目的观察全反式维甲酸体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学和NIS表达的变化。方法分别以终浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、6×10-5mol/L、8×10-5mol/L的维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用RT-PCR的方法观察钠碘转运体表达的变化。结果ATRA作用48小时后,可见细胞形态改变;但NIS mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05)。结论不同浓度的ATRA可诱导SW579细胞形态学变化,但不能提高NIS的表达。