lncRNA-CASC2对甲状腺癌细胞增殖及侵袭转移的作用

目的探讨癌易感性候选基因2(CASC2)对甲状腺癌细胞(TPC-1)增殖及侵袭转移的影响。方法收集2020年1月-2022年12月于我院行手术治疗的83例甲状腺癌患者,取甲状腺癌组织及癌旁组织进行石蜡标本制作,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)对其癌组织和癌旁组织中CASC2mRNA和miR-155-5p RNA的表达水平进行检测。将TPC-1细胞随机分为质粒组、空载组及空白组,质粒组使用脂质体转染试剂转染CASC2a;而空载组转染空载质粒,空白组不做处理。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果癌组织中lncRNA-CASC2的表达(1.23±0.08)明显低于癌旁组织(2.16±0.11);但miR-155-5p的表达(2.18±0.16)却明显高于癌旁组织(1.46±0.10)(P<0.05),3组细胞48 h的A450(分别为0.32±0.03、0.40±0.04、0.42±0.06)、72 h(分别为0.65±0.08、0.73±0.10、0.77±0.11)及96 h(分别为0.97±0.12、1.24±0.14、1.35±0.15)间的差异均有统计学意义(P<0.05),且随着时间的增加,3组细胞的A450值均有所增大。比较3组细胞迁移和侵袭能力发现,质粒组细胞的迁移数(54.63±8.95)和侵袭数(33.58±6.63)均明显低于空载组(分别为89.37±10.04、72.37±9.72)和空白组细胞(分别为93.21±10.22、75.82±9.62)(P<0.05);而空载组和空白组细胞的迁移数和侵袭数差异无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA-CASC2在甲状腺癌组织中呈现低表达,而miR-150-5p在癌组织中呈高表达,两种因子均为参与甲状腺癌的发生发展的关键;且lncRNA-CASC2在细胞水平上可抑制TPC-1细胞的增殖及迁移能力,但其抑癌作用的关键点及调控机制等需进一步探索。

TSH和高碘对FRTL细胞甲状腺激素合成相关基因表达的影响

目的观察不同浓度TSH和高碘对FRTL细胞钠/碘转运体(NIS)mRNA、甲状腺过氧化物酶(TPO)和甲状腺球蛋白(Tg)基因表达的影响。方法采用FRTL细胞系,用不含有TSH的培养基培养7d后,用不同水平TSH(0.1、0.5、1、10、50、100U/L)刺激。培养24h后,检测3种基因NIS、TPO、Tg的mRNA水平。高碘组按照10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mol/L的碘离子浓度加入培养基,在第24和48小时,收集细胞,检测3种基因NIS、TPO、Tg的mRNA水平。结果TSH刺激24h后,FRTL细胞内NIS、TPO、Tg基因表达都伴随TSH水平的升高而上升。TSH从0.1U/L开始就对NIS基因表达增加有显著性影响(P<0.05),TSH对TPO基因表达的刺激从1U/L开始有显著性影响。TSH对Tg基因表达的作用从0.1U/L开始就有刺激作用(P<0.05)。高碘组对细胞这3种基因的表达没有刺激作用。结论TSH对FRTL细胞系产生甲状腺激素具有明显的刺激上调的作用。但高碘对该细胞3种基因的表达没有上调的作用。

氟化物对FRTL细胞甲状腺激素代谢相关基因表达的影响

为探讨氟对FRTL细胞甲状腺球蛋白(TG),甲状腺过氧化物酶(TPO)和钠碘转运体(NIS)基因表达的影响,传代培养FRTL细胞,在对数生长期用氟化钠处理,使培养液中的氟浓度分别为20、10、5、2.5、1.25 mg/L,同时设空白对照细胞。培养72 h后收集细胞;采用半定量RT-PCR分析FRTL细胞TG、TPO、NIS mRNA和-βactin表达水平。试验结果表明,与对照细胞相比,较低浓度氟化钠处理的FRTL细胞TG基因表达量代偿性升高,随氟质量浓度增加(5.0 mg/L以上),TG表达量显著降低(P<0.05);各个浓度氟化钠处理的FRTL细胞TPO、NIS基因表达量均下降或显著下降(P<0.05)。由此可知,氟化物降低了甲状腺细胞TG、TPO、NIS基因表达水平,造成甲状腺摄取和利用碘、甲状腺激素合成、贮存、分泌功能障碍,进而导致甲状腺结构和功能异常。

氟化物对FRTL细胞甲状腺功能因子代谢的影响

为了探讨氟化物对甲状腺功能因子代谢的影响,本实验传代培养FRTL细胞,用氟化钠处理对数生长期的细胞,使培养液中氟水平分别为0、1.25、2.5、5、10、20mg/L。分别于24和72h后收集细胞上清液,测定上清液中游离甲状腺激素FT3和FT4,甲状腺球蛋白(TG)以及甲状腺过氧化物酶(TPO)的活性。实验结果表明,NaF处理FRTL后,细胞上清液中FT3、FT4水平和TPO活性也不同程度降低,且与添加的氟化物浓度呈现显著的负相关(P<0.05);上清液中TG的含量除了NaF为2.5mg/L处理组比对照组有所升高外,其他浓度作用的FRLT上清液中TG含量均降低,整体上TG含量与氟化物浓度之间也呈现显著的负相关(P<0.05)。氟化物导致FRTL分泌TG不足,TPO活性及FT3、FT4水平下降,从而导致甲状腺功能降低。本实验揭示了氟化物对甲状腺细胞功能因子代谢的影响规律,在一定程度上也为揭示氟致甲状腺肿的机理奠定了基础。

人促甲状腺激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以进口纯人促甲状腺激素（ｈ—ＴＳＨ）作免疫原，经用Ｇａｌｆｒｅ等杂交瘤制备法，分别制备成１３Ｂ４、１３Ｃ４、８Ｈ１０、３Ｅ４四株具有抗ｈ—ＴＳＨ特异性，与促黄体素、促卵泡素、绒毛膜促性腺素无明显交叉反应。具有稳定分泌功能的杂交细胞株。经亚型鉴定均为ＩｇＧ１。液相中与１２５Ｉ—ｈＴＳＨ的最大结合率依次为１３Ｂ４、３Ｅ４、８Ｈ１０和１３Ｃ４，分别为６１％、５９％、５６％和３４％。表位分析表明，４株单抗主要针对两个不同表位。在此基础上已成功地建立ｈ—ＴＳＨ固相免放和酶免吸附超敏测定法。

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达。结果:TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P<0.05)。RT-PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达水平上调。结论:不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。

Cs^(137)辐照对甲状腺FRTL细胞RET及RAS-MAPK信号通路的影响

探讨不同剂量的Cs^(137)对甲状腺FRTL细胞RET蛋白以及下游MAPK信号通路的影响.通过不同剂量(0.05,0.1,0.15,0.2,0.5,1 Gy)Cs^(137),对甲状腺FRTL细胞进行辐照,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot检测未辐照组,辐照敏感组和辐照抗性组中RET及下游RAS、RAF、MEK蛋白表达情况.结果:甲状腺FRTL细胞在0.2Gy辐照时辐照敏感度增加;而到1 Gy辐照时辐照抗性增加.在0.2 Gy辐照敏感条件下,诱导RET、RAS、RAF、MEK蛋白表达下调;而当1 Gy辐照时,RET、RAS、BRAF、MEK蛋白表达上调.不同剂量Cs^(137)辐照能够诱导RET蛋白表达,对后面MAPK信号通路存在影响,最终影响到甲状腺FRTL细胞的细胞增殖抑制率,诱导甲状腺低剂量辐射致癌成为可能.

人垂体提取液免疫建立促甲状腺素单抗杂交瘤细胞株

目的：获取分泌结合力和特异性均好的抗人促甲状腺素（ｈＴＳＨ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株．方法：用人垂体提取液为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以聚乙二醇为融合剂，亚克隆三次．结果：获得２株分泌与ｈＴＳＨ特异性结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株，所分泌的免疫球蛋白为ＩｇＧ１，液相中与ｈＴＳＨ的最大结合率分别为６０％和４５．１％．经位点分析，２株单克隆抗体分属不同位点．结论：①人垂体提取液可用于制备ｈＴＳＨ单克隆抗体；②此２株单克隆抗体的获得为建立敏感的ｈＴＳＨ测定方法奠定了基础．

人甲状腺髓样癌细胞株的研究进展

甲状腺髓样癌是常见的头颈部恶性肿瘤,也是近年来发病率增加最快的恶性肿瘤之一,近年来对其基础研究较为关注。本文复习有关文献,对已建株的人甲状腺髓样癌细胞株(TT细胞株)的特性及研究进展全面总结,以期对临床及药物的研发提供帮助。

高糖对FRTL细胞甲状腺球蛋白与甲状腺过氧化物酶mRNA表达的影响

目的 研究糖毒性对FRTL细胞甲状腺球蛋白（TG）与甲状腺过氧化物酶（TPO）mRNA表达的影响,探讨糖尿病致甲状腺组织损伤可能存在的免疫机制以外的机制. 方法 以FRTL细胞为研究对象,给予不同糖浓度刺激后使用实时荧光定量PCR测定FRTL细胞TG、TPO mRNA的表达情况. 结果 实时荧光定量PCR检测不同浓度右旋葡萄糖刺激细胞24 h、48 h、72 h后,TG、TPO mRNA的表达水平结果如下：对照组与渗透组比较二者表达水平差别无统计学意义（P＞0.05）;15 mmol/L组、20 mmol/L组、30 mmol/L组二者表达水平均低于对照组、渗透组,差别有统计学意义（P＜0.05）,且随着糖浓度的升高,二者表的水平下降更明显. 结论 在体外从细胞和分子水平证明了糖毒性对甲状腺细胞TG、TPO mRNA的表达水平有一定的影响,提示糖尿病对甲状腺组织的损伤可能存在免疫机制以外的机制.

化痰散结中药对甲状腺细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的:研究化痰散结中药甲肿消对甲状腺FRTL细胞增殖与凋亡的影响。方法:用水煮浸渍提取方法制备甲肿消提取液,甲状腺FRTL细胞株采用含6H的F12培养基培养。中药提取液作用培养细胞,以MTT法测定不同浓度甲肿消对FRTL细胞的增殖影响;采用Annexin V/PI双染法,应用流式细胞仪检测细胞凋亡;PI单染,流式DNA定量法检测细胞周期。结果:甲肿消作用24 h,细胞半数抑制浓度IC50=0.8 mg/ml(含生药浓度),最大抑制率浓度为4.0 mg/ml。甲肿消作用后G0/G1期细胞增多,S和G2/M期细胞减少,增值指数(PI)显著降低,细胞凋亡增加;同时发现甲肿消对细胞增殖与凋亡的影响与作用剂量、作用时间成正相关。结论:甲肿消通过阻滞细胞从G0/G1期向S期转换,从而抑制细胞增殖,同时可诱导FRTL细胞的凋亡,并与作用剂量和作用时间正相关。

消瘿方对甲状腺FRTL细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨消瘿方对甲状腺FRTL细胞增殖与凋亡影响及其机制。方法取4周龄SD大鼠15只,随机分为低浓度、中浓度、高浓度消瘿方组和阳性药组、空白组,每组3只。消瘿方低、中、高浓度组分别给予7.47、14.94、29.88 g/kg消瘿方中药复方药液,阳性药组给予左甲状腺素钠片(0.18 mg/kg),空白组给予蒸馏水,连续灌胃5 d,腹主动脉取血,分离血清。体外培养大鼠甲状腺FRTL细胞,分别应用各组血清进行干预。MTT法检测含药血清对FRTL细胞增殖率的影响,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态,Western blotting和RT-PCR法检测凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白和基因表达。结果高浓度消瘿方含药血清干预后,FRTL细胞增殖率显著下降(F=6.71、5.85,P<0.05);细胞密度下降,细胞排列散乱、细胞核碎裂、细胞透亮,呈现典型凋亡形态学特征;促凋亡因子Bax蛋白和基因表达上调,而抗凋亡因子Bcl-2蛋白和基因表达下调,促/抗凋亡因子bax/bcl-2间的平衡被打破,凋亡执行因子Caspase-3蛋白和基因表达显著上调,差异有显著性(F=9.97~63.20,P<0.01)。结论消瘿方能够抑制甲状腺FRTL细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与促/抗凋亡因子bax/bcl-2间平衡破坏、caspase-3表达上调有关。

四溴苯三唑对甲状腺鳞癌SW579细胞凋亡的影响

目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组细胞均在培养24 h后加药,加入不同浓度的TBB,使其终浓度分别为12.5、25、50、75、100μmol/L。培养到一定时间后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达。结果低浓度TBB组(12.5、25、50μmol/L)肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势;高浓度组(75、100μmol/L)细胞生长密度较对照组明显降低,与低浓度组相比,向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示,实验组细胞均出现显著的生长抑制作用,且呈剂量依赖性。实验组随着TBB药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加,细胞滞留在G1期。RT-PCR方法检测发现实验组细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平上调。结论 TBB可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其机制可能与上调Caspase-3基因表达,激活Caspase途径有关。

晚期非酶糖基化终末产物对大鼠甲状腺细胞甲状腺球蛋白及甲状腺过氧化物酶mRNA表达的影响

目的 研究晚期非酶糖基化终末产物（AGEs）对大鼠甲状腺细胞甲状腺球蛋白（TG）、甲状腺过氧化物酶（TPO）mRNA表达的影响,探讨糖尿病对甲状腺组织的损伤可能存在免疫机制以外的机制.方法 以FRTL细胞为研究对象,给予不同浓度AGEs刺激24、48、72 h后使用实时荧光定量PCR测定FRTL细胞TG mRNA和TPO mRNA的表达情况.结果 24 h：2.5 mg/L组（TG 2.27±0.25,TPO 2.5±0.17）、5.0 mg/L组（TG2.07±0.074,TPO 1.08±0.15）、10.0 mg/L组（TG 2.13±0.16,TPO 1.08±0.12）、AGEs抗体组（TG 2.48±0.12,TPO 2.43±0.89）表达水平均低于对照组（TG 5.64±0.16,TPO 5.19±0.25）,差异有统计学意义（P＜0.01）;48 h：2.5 mg/L组（TG 1.29±0.89,TPO 3.44±0.40）、5.0 mg/L组（TG 1.22±0.16,TPO 3.17±0.21）、10.0 mg/L组（TG0.67±0.07,TPO1.4±0.13）、AGEs抗体组（TG 3.93±0.14,TPO 4.91±0.24）表达水平均低于对照组（TG 6.17±0.31,TPO 5.08±0.23）,差异有统计学意义（P＜0.01）;72 h：2.5 mg/L组（TG 1.25±0.57,TPO 1.53±0.11）、5.0 mg/L组（TG 1.17±0.18,TPO 1.61±0.03）、10 mg/L组（TG 1.09±0.07,TPO 0.71±0.06）、AGEs抗体组（TG3.44±0.30,TPO 3.06±0.19）表达水平均低于对照组（TG 8.10±0.22,TPO 8.35±0.25）,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 在体外从细胞和分子水平证明了AGEs对甲状腺细胞TG mRNA和TPO mRNA的表达水平有一定的影响,提示糖尿病对甲状腺组织的损伤可能存在免疫机制以外的机制.

银杏叶提取物对甲状腺癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响及意义

目的探讨银杏叶提取物对甲状腺癌TPC-1细胞株磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达的影响及意义。方法培养甲状腺癌TPC-1细胞株,用96孔和6孔培养板将其分为空白组、银杏叶低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L),实验分为3个时间点:培养24 h、48 h和72 h。通过噻唑蓝(MTT)实验、免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖活性、PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、磷酸化(p)-Akt和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的蛋白含量及mRNA水平。结果银杏叶提取物能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,且随时间延长和剂量的增加效果更为显著,各时间点间、各剂量组间均差异显著(P<0.05);与空白组比较,银杏叶低、中、高剂量组PI3K和p-Akt的蛋白含量及mRNA水平均显著降低且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组caspase-3的蛋白含量及mRNA水平均显著升高且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组Akt蛋白含量及mRNA水平未见显著差异(P>0.05)。结论银杏叶提取物抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,可能与调控PI3K/Akt信号通路和促进细胞凋亡密切相关,且可见浓度依赖趋势。

甲肿消对甲状腺细胞凋亡及过氧化物酶活性的影响

目的研究甲肿消对甲状腺细胞凋亡及甲状腺过氧化物酶(TPO)活性的影响。方法用甲状腺FRTL细胞,按甲肿消剂量不同分为:0(对照组)、0.2、0.4、0.8、1.6 mg.mL-1组。甲状腺细胞培养24 h后,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡指数;改良愈创木酚法检测TPO活性。结果给药24 h后,荧光显微镜下可见凋亡小体及细胞核碎片。0、0.2、0.4、0.8、1.6 mg.mL-1组细胞凋亡率(%)分别为:5.367±0.816、7.517±0.646、14.183±0.752、17.033±1.461、23.767±0.734,与药物呈剂量依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组TPO活性(单位:GU.mg-1蛋白×103)分别为:9.395±1.79、7.289±1.205、6.175±1.818、4.347±0.948、2.93±1.977,随着给药剂量的升高而降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲肿消可能通过诱导甲状腺细胞凋亡及抑制TPO酶活性来影响甲状腺功能。

沉默TRIP13位点对慢性淋巴细胞白血病患者细胞株生物学影响及通路机制

目的探讨甲状腺激素受体相互作用蛋白13(TRIP13)位点对慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者细胞株生物学影响及通路机制。方法选择2013年至2018年我院收治的80例门诊为CLL的患者设为研究组,同时选取同期80例体检健康者作为对照组。比较两组患者静脉血中CD19^+B淋巴细胞TRIP13信使核糖核酸(mRNA)相对表达量、干扰靶点TRIP13蛋白敲减效率及TRIP13干扰后JVM-2细胞凋亡率,观察JVM-2细胞慢病毒感染情况、TRIP13干扰后JVM-2细胞增殖能力及对凋亡相关蛋白的影响。结果研究组TRIP13mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.05);TRIP13干扰5d内干扰组JVM-2细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05);TRIP13干扰后干扰组JVM-2细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);TRIP13干扰后干扰组较对照组JVM-2细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、髓细胞增生原癌基因(Myc)蛋白表达下调,活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Caspase-3)表达上调(P<0.05)。结论 CLL患者体内TRIP13水平升高,TRIP13基因通过调控Bcl-2、Myc及Caspase-3信号通路诱导体内Bcl-2、Myc蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达上调,有望成为治疗CLL新的靶点。

提高FRTL-5细胞释放cAMP的实验研究

用Ｈａｎｋ′ｓ（＋）液、低渗无钠Ｈａｎｋ′ｓ（－）液及等渗无钠Ｈａｎｋ′ｓ（－）蔗糖液，加入不同浓度的牛促甲状腺激素（ｂＴＳＨ）或甲状腺刺激抗体（ＴＳＡｂ），刺激克隆化鼠甲状腺细胞株（ＦＲＴＬ５细胞）产生ｃＡＭＰ，测定释入培养基中的ｃＡＭＰ量。结果：低渗无钠Ｈａｎｋ′ｓ（－）液可显著提高甲状腺细胞释入培养液中的ｃＡＭＰ量（与另外２组相比Ｐ＜０．０００１）。提示：应用低渗缓冲液提高ＦＲＴＬ５细胞释放ｃＡＭＰ的方法。

miR-101-3p调控HMGB1影响甲状腺乳头状癌的体外转移活性

目的探讨miR-101-3p在甲状腺乳头状癌细胞发展中的作用机制,以期为甲状腺乳头状癌的预防和治疗提供一个新思路。方法采用q-PCR方法检测癌组织和癌旁组织中miR-101-3p和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。用miR-101-3p mimic、miR NC、pcDNA3.1 HMGB1和pcDNA3.1 NC转染KAT-5细胞后,Western blotting检测HMGB1途径蛋白的表达。使用划痕实验检测细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,通过集落形成实验分析细胞的生长能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p和HMGB1的相互作用情况。结果miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达显著低于癌旁组织(分别为1.08±0.02、0.52±0.01,P<0.05);HMGB1在人PTC中表达显著高于癌旁组织(分别为0.88±0.03、1.29±0.02,P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-101-3p能够靶向抑制HMGB1表达(分别为0.98±0.02、0.03±0.0l,P<0.05)。miR-101-3p过表达能够明显抑制KAT-5细胞的增殖与侵袭和迁移。然而,过表达HMGB1能够逆转miR-101-3p对KAT-5细胞的抑制作用。结论miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达降低,HMGB1在甲状腺乳头状癌组织中的表达升高。miR-101-3p可靶向调控HMGB1进而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡。

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素(hTSH)单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法:人工合成人促甲状腺激素(hTSH)上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白(BSA)构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果:建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于κ型,McAb腹水ELISA效价达1:1.6×105,与促黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论:本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。