甲硝基亚硝胍诱发大鼠胃癌的实验研究

作者自行合成N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),并以100μg/mlMNNG稀释液喂以100只Wistar大鼠,以诱发胃癌。结果发现喂药6个月内,死亡20只,均无消化道癌肿发生;第7～8个月内,死亡18只,发生胃癌3只(16.7%);第9个月时,处死全部剩余大鼠共62只,其中50只发生胃癌(80.7%)。癌肿均位于腺胃小弯侧,多呈隆起结节型或溃疡型;组织学类型包括乳头状腺癌、分化或未分化管状腺痛;癌肿可侵犯胃壁各层,与人类胃癌病理特征颇为相似。作者还发现,纯系雄性Wistar大鼠是诱发实验性胃癌的理想对象。且以100μg/mlMNNG液,喂药9个月为适宜。

甲硝基亚硝胍和（或）雷尼替丁诱发大鼠腺胃粘膜肠上皮化生

分别采用含０．０３％雷尼替丁（Ｒ）的标准粉末状饲料、５０μｇ／ｍｌ甲硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）溶液及两者联合（ＭＮＮＧ＋Ｒ）喂饲大鼠共２０周，于实验第４３周末处死动物进行观察。ＭＮＮＧ＋Ｒ组腺胃粘膜肠上皮化生诱发率及平均肠化腺体数（１００．０％，６９６．２±１７３．６）显著地高于ＭＮＮＧ组（８６．５％，３３０．６±１４５．６）或Ｒ组（２２．５％、７５．２±３０．９）（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；各组大鼠幽门腺区和胃底腺区粘膜表面ｐＨ值与肠化腺体数目之间呈显著的正相关（ｒ＝０．９６，ｒ＝０．９９）。结果表明ＭＮＮＧ＋Ｒ是建立大鼠腺胃粘膜肠化模型的一种理想方法；胃内高ｐＨ值可能是诱发胃粘膜肠上皮化生的主要因素之一；慢性胃病抗酸治疗的安全性还需进一步观察。

甲基硝基亚硝胍处理的vero细胞中磷酸化蛋白的差异显示

目的：初步了解哺乳类细胞非定标性突变形成是否与以蛋白质磷酸化级联反应为主要形式的细胞信号传导通路有关；方法：采用［３２Ｐ］体内预标记及凝胶双向电泳方法差异显示甲基硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）处理组和对照组磷酸化蛋白，蛋白质免疫印迹杂交试验初步鉴定差异显示蛋白斑点性质；结果：在处理组发现两个与对照组不同的蛋白斑点，分子量分别在６８×１０３和４３×１０３附近，与抗酪氨酸磷酸化蛋白抗体未发生阳性反应；结论：根据差异显示蛋白斑点的分子量和印迹杂交试验结果，初步认为所见蛋白斑点可能为丝／苏氨酸磷酸化蛋白。

甲基硝基亚硝基胍诱导的一种全核γH2AX染色的特性研究

目的:明确甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导的全核γH2AX所代表的DNA损伤的性质。方法:利用免疫荧光方法观察人羊膜FL细胞中MNNG诱导的γH2AX焦点的形成,中性彗星实验检测DNA双链断裂的形成,碱性彗星实验检测DNA单链、双链及其他类型损伤。结果:MNNG在10 m g/L时能诱导一种特殊的全核染色,1 m g/L时能在一部分细胞中诱导这种全核染色,但作用比较微弱。在这类细胞中中性彗星实验不能检测到明显的DNA双链断裂的形成,而碱性彗星实验能显示有DNA损伤的存在。结论:尽管γH2AX焦点被认为是DNA双链断裂的特异性标志,这种全核染色可能代表着另外类型的DNA损伤。

甲基硝基亚硝基胍对人正常胃黏膜GES-1细胞恶变的影响及其机制研究

目的观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对人正常胃黏膜GES-1细胞恶变的影响,并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度梯度MNNG作用于人正常胃黏膜GES-1细胞,培养24h后采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力;48h后采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western blotting检测细胞NF-κB p65 m RNA及蛋白表达情况。结果选择诱导胃黏膜GES-1细胞恶变的MNNG浓度为2×10–4mol/L。MNNG能明显促进GES-1细胞的增殖和侵袭转移,并抑制其凋亡(P<0.01);MNNG诱导胃黏膜GES-1细胞后,细胞内NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05)。结论 MNNG可促进人正常胃黏膜GES-1细胞的增殖及侵袭转移,抑制细胞凋亡,诱导细胞恶变,其机制可能与激活NF-κB有关。

哺乳动物细胞POLK、POLH、POLI基因对甲基硝基亚硝基胍的应答反应及其启动子区转录因子结合部位的生物信息学分析

目的:观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对培养细胞DNA聚合酶κ、η、ι编码基因表达的影响并用生物信息学方法预测它们的启动子区和启动子区中的转录因子结合部位。方法:利用半定量RT-PCR观察POLK、POLH、POLI基因表达改变。利用在线生物信息学软件,确定它们的启动子区,然后,用转录因子预测软件并结合进化足迹法检出包括启动子区在内的3000bp碱基上游序列中的转录因子结合部位。结果:0.2μmol·L-1MNNG导致细胞POLH和POLI表达水平在处理后6-24h间逐渐上升,升高约1倍;而POLK则呈下降;通过转录因子预测软件分析,在POLK、H和I启动子区分别检出了384个、413个和689个推断的转录因子结合部位;通过进化足迹法分析有效地降低了假阳性率,推断的转录因子结合部位分别下降到158个、80个和40个。结论:低浓度MNNG导致POLH、POLI表达水平升高,而POLK表达水平降低;通过在线软件,我们成功地在POLK,POLH,POLI启动子区分别检出。158、80和40个推断的转录因子结合部位;进化足迹法分析能够有效降低预测软件的假阳性率。

亚硒酸钠对胃癌形成的作用及对bcl-2和Bax表达的影响

目的 :探讨在胃癌形成过程中亚硒酸钠的作用机制及其对bcl 2和Bax蛋白表达的影响。方法 :用N甲基 -N -硝基 -N亚硝胍 (MNNG)2 0mg/kg给大鼠灌胃 ,以诱导大鼠胃腺癌形成。实验第 43周 ,用HE染色、病理诊断和AB PAS反应方法比较各组MNNG诱导Wistar大鼠腺胃癌形成过程中的变化 ;用免疫组织化学SP法观察在此过程中胃黏膜bcl 2和Bax蛋白表达 ,并对其结果进行定性、定位及图象分析。结果 :饮水中加入2和 4mg/L的亚硒酸钠加重胃黏膜的糜烂、出血和肠化生 ,P <0 0 5 ,在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤 ,亚硒酸钠可增加平滑肌瘤的发生率。免疫组织化学结果显示 ,加硒组bcl 2阳性标本的平均光密度比正常对照组明显升高 ,P <0 0 1;加硒组的Bax平均光密度明显高于对照组 ,P <0 0 1。结论 :亚硒酸钠可增强大鼠胃黏膜bcl 2和Bax蛋白的表达 ,并使之糜烂、出血、肠化生 ;同时 ,可促进浆膜下平滑肌瘤的形成。

MNNG加吐温20和维生素D_3对大鼠前胃的影响

目的 研究胃癌发生、发展过程中，间质组织中血管反应与肿瘤的关系．方法 经水摄入Ｎ－ 甲基－ Ｎ１ － 基－ Ｎ － 亚硝基胍（ ＭＮＮＧ）和表面活性剂（ 吐温２０） 诱发大鼠肿瘤，饲料中添加维生素Ｄ３（ＶｉｔＤ３） 对肿瘤进行预防． 每８ ｗｋ 处死大鼠７ 只，３２ ｗｋ 实验结束．结果 ｗ ｋ １６ 实验组大鼠前胃鳞状上皮形态主要以血管密度增加、血管内皮细胞增生，３２ ｗｋ（ ＭＮＮＧ） ＋ 表面活性剂和ＶｉｔＤ３ 组肿瘤发生率高于ＭＮＮＧ 组（１０ ％ ） ，肿瘤发生率为６５ ％ ．结论 该组动物诱癌实验表明，肿瘤形成前主要以血管新生、血管ＥＣ 增生为主的病理性变化．

温郁金对饮用MNNG大鼠胃黏膜血管内皮生长因子和环氧合酶-2表达的影响

背景:目前国内外还很少有确切疗效的胃癌化学预防药物。我们的前期研究发现温郁金可抑制胃癌细胞SGC-7901及其裸鼠移植瘤的生长。目的:通过检测温郁金水蒸气蒸馏提取液对饮用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)大鼠胃黏膜血管内皮生长因子(VEGF)和环氧合酶(COX)-2表达的影响,探讨其预防肿瘤的作用机制。方法:80只雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组16只,分别为空白组、MNNG造模组、塞来昔布组、1g/ml温郁金组和2g/ml温郁金组。除空白组外,其余4组实验前6周予10%NaCl溶液1ml每周灌胃一次。然后开始40周的实验,实验期间死亡、经病理检查证实有或无胃肿瘤的大鼠均留取胃黏膜标本,计入诱癌情况统计。完成实验的大鼠于第41周处死,取胃黏膜(已致瘤者选取致瘤部位)检测VEGF和COX-2的表达。结果:VEGF和COX-2阳性表达产物主要见于细胞质内,C、D、E组大鼠VEGF和COX-2阳性表达等级积分均显著低于B组(P<0.05),D、E组与C组比较,VEGF和COX-2阳性表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:温郁金水蒸气蒸馏提取液可下调饮用MNNG大鼠胃黏膜VEGF和COX-2的表达,降低胃癌发生率,具有较好的胃癌化学预防潜力。

蛙皮素在人胃黏膜上皮永生细胞系化学癌变过程中的作用

背景:蛙皮素具有刺激多种正常和肿瘤细胞增殖的作用。目的:探讨蛙皮素在化学致癌剂N鄄甲基鄄N'鄄硝基鄄N鄄亚硝基胍(MNNG)诱发人胃黏膜上皮永生细胞系GES鄄1癌变过程中的作用。方法:经蛙皮素和(或)MNNG处理后,观察各组GES鄄1细胞的光镜和电镜下形态学改变,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖速度,软琼脂集落形成实验检测转化细胞的特性,流式细胞仪检测细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达。结果:GES鄄1细胞经蛙皮素与MNNG共同处理后传至20代以上时,细胞增殖速度较MNNG单独处理的细胞加快,cyclinD1表达增高,而软琼脂集落形成率与MNNG单独处理的细胞相比无显著差异;蛙皮素与MNNG共同处理的GES鄄1细胞形态学表现为细胞排列紧密,细胞核增大,核仁增多,细胞质减少,较MNNG单独处理的细胞改变明显。结论:蛙皮素可与化学致癌剂协同促进正常上皮细胞癌变,其机制可能与cyclinD1的过表达有关。

胃黏膜上皮紧密连接与实验性胃癌前病变的关系

目的 :探讨胃黏膜上皮紧密连接与实验性胃癌前病变的关系。方法 :大鼠分别饮用浓度为 4 0μg mL及 6 0 μg mL的甲基硝基亚硝基胍 (MNNG) ,以造成不同程度的胃癌前病变。在造模第 9周及 31周时观察胃黏膜病变情况及胃黏膜上皮紧密连接的改变。结果 :随造模时间及浓度的增加 ,模型鼠胃黏膜深度损伤指数、萎缩、肠化及异增等均加重 ,胃黏膜上皮紧密连接减少、细胞间隙增宽 (P <0 0 5 )。紧密连接受损程度与胃癌前病变程度呈正相关 (P <0 0 5 )。结论 :胃黏膜上皮紧密连接的损伤是胃黏膜萎缩发生、进展至癌变的重要环节 ;缩小上皮细胞间隙 ,保护胃黏膜屏障对于逆转胃癌前病变 。

大鼠受MNNG攻击的早期反应及营养干预作用探讨

采用ＳＤ系大鼠，按随机区组法分为４组：对照组、单ＭＮＮＧ组、ＭＮＮＧ＋营养素（含维生素Ａ、Ｅ及Ｓｅ、Ｃａ）干预组、ＭＮＮＧ＋硒茶干预组。实验期２个月，观察血液过氧化作用、免疫细胞计数及胃粘膜过氧化脂质和病理变化。结果表明，大鼠受ＭＮＮＧ攻击的早期反应主要是过氧反应增强。联用营养素和硒茶干预能明显降低血清ＬＰＯ和提高全血ＧＳＨ水平。各组的ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ活性、外周血的ＷＢＣ和淋巴细胞计数、胃粘膜病理检验等均未见明显差别。

阻抑治疗胃癌前病变的研究

采用自制甲硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）液（１００μｇ／ｍｌ）喂以１６０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠，以诱发腺胃癌前病变；并在此基础上，随机抽样分组，分别予口服全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）、β－胡萝卜素（ＢＣ）、倍半氧化羟乙基锗（Ｇｅ－１３２）和硒酵母（Ｙｓｅ），以观察这些药物对腺胃癌前病变演变至胃癌过程的影响。结果显示Ａ－ＴＲＡ、Ｇｅ－１３２及Ｙｓｅ对由ＭＮＮＧ溶液所诱发大鼠腺胃癌的发生率、癌肿的浸润程度等均有不同效应的阻抑作用；ＢＣ的作用不明显可能与观察时间过短有关。同时对建立大鼠腺胃癌前病变模型的方法亦进行了初步探讨。