一种S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法

通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被SAHN酶水解生成腺嘌呤和S-核苷高半胱氨酸,后者进一步被SRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman’s试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析.

肿瘤甲硫氨酸依赖性分子机制的研究进展

甲硫氨酸(M et)依赖性是肿瘤代谢缺陷的重要特征之一。近年来,从分子水平对肿瘤细胞的M et依赖性进行一系列研究,发现了M et代谢的关键酶功能异常(如M et合成酶单核苷酸多态性,甲基硫腺苷磷酸酶基因缺失,胸苷合成酶蛋白表达下降,甲叉四氢叶酸还原酶基因表达上调)。细胞内信号转导障碍是M et限制导致肿瘤细胞凋亡的另一分子机制。

肿瘤细胞对甲硫氨酸依赖性的研究进展

甲硫氨酸（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ，Ｍｅｔ）又称蛋氨酸，是体内必需氨基酸之一，也是体内物质代谢主要的甲基供体，参与多种活性物质的甲基化反应，如ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、ｍＲＮＡ、多胺、肌酸、肾上腺素、乙酰胆碱等。因此，Ｍｅｔ具有重要的生理意义。⒇多年研究发现，正...

肿瘤细胞的甲硫氨酸依赖性对提高肿瘤化疗疗效的作用

目的探讨肿瘤细胞的甲硫氨酸依赖性在提高肿瘤化疗疗效方面的作用及意义。方法将甲硫氨酸（Ｍｅｔ）依赖性肿瘤细胞ＳＧＣ７９０１、ＭＣＦ７和非Ｍｅｔ依赖性肿瘤细胞Ａ５４９、Ａ３７５培养于Ｍｅｔ－Ｈｃｙ＋和Ｍｅｔ＋Ｈｃｙ－培养基中，加入不同浓度的周期特异性化疗药５Ｆｕ或非周期特异性化疗药ＭＭＣ；在细胞与药物接触不同时间段，用ＭＴＴ比色法检测化疗药物的抑瘤率。结果Ｍｅｔ－Ｈｃｙ＋中的５Ｆｕ对Ｍｅｔ依赖性肿瘤细胞的抑瘤率较Ｍｅｔ＋Ｈｃｙ－中的５Ｆｕ的抑瘤率有显著性提高；而５Ｆｕ对非Ｍｅｔ依赖性肿瘤细胞的抑瘤率，在两种培养基间差异无显著性。ＭＭＣ对Ｍｅｔ依赖性、非Ｍｅｔ依赖性肿瘤细胞的抑瘤率未因培养基的不同而差异有显著性。结论利用肿瘤细胞的Ｍｅｔ依赖性，Ｍｅｔ－Ｈｃｙ＋培养基可显著提高周期特异性化疗药（５Ｆｕ）对Ｍｅｔ依赖性肿瘤细胞的抑瘤率，但不能提高周期非特异性化疗药（ＭＭＣ）的抑瘤率。

去甲硫氨酸环境加化疗药物对人胃癌原代细胞生长的阻抑

目的 :探索人胃癌原代细胞在体外去除甲硫氨酸 (Met)但含同型半胱氨酸 (Hcy)的培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长和去Met状态是否增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :将 40例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Met+Hcy-(含Met不含Hcy)的培养基中培养 48h ,利用MTT等方法检测各组细胞增殖情况以及在不同培养基中分别加入ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX化疗药物后对各组细胞增殖的抑制程度。 结果 :①人胃癌原代细胞在Met-Hcy+培养基中表现为细胞总数减少 ;②Met-Hcy+培养基分别与ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX联合时 ,可显著提高各化疗药物对胃癌原代细胞的杀伤作用。 结论 :①人胃癌原代细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ;②Met-Hcy+培养环境联合应用各化疗药物 ,可提高对人胃癌原代细胞的杀伤作用 ;③MTT法是检测“Met饥饿法”联合个体化化疗药物敏感性的有效手段。

甲硫氨酸缺乏及联合化疗对人原代胃癌细胞的影响

目的 :探索人原代胃癌细胞和胃黏膜上皮原代细胞在体外缺乏甲硫氨酸 (Met)的培养基中能否正常生长 ;并评价去Met状态能否增强化学药物对胃癌细胞的杀伤作用。方法 :将新鲜人胃癌及胃黏膜组织制成单细胞悬液 ,分别置于不含Met、但含同型半胱氨酸 (Met-Hcy+ )和含Met、不含Hcy(Met+ Hcy-)的培养基中培养 ,或联合应用不同化学药物 ,利用细胞计数、流式细胞仪 (FCM)和MTT法检测各组细胞增殖状态。结果 :①人原代胃癌细胞在Met-Hcy+ 培养基中生长受抑制 ,表现为细胞总数减少 ,G0 、G1期细胞比例下降 ,S期细胞比例升高 ;而胃黏膜细胞生长正常。②Met-Hcy+ 培养基与不同化学药物联合应用时 ,胃癌原代细胞明显减少。结论 :①人原代胃癌细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ,而胃黏膜细胞则未见类似现象。②Met-Hcy+ 培养环境联合化学药物 ,可提高对人原代胃癌细胞的杀伤作用。

植物中SAM Mtases基因研究进展

SAM Mtases是从多种植物中分离到的一类S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性氧位甲基转移酶基因,该基因对植物体内木质素、类苯基丙烷、类黄酮类、生物碱和脂肪族化合物等许多次生代谢产物合成有直接的影响,并且在植物抗病、抗紫外线、杀虫、抗菌、植物激素生长和信号调节、植物共生、花粉管伸长和花粉生长等生理过程中起重要作用.该文总结了国内外已经克隆到的SAM Mtases同源基因的分离、分类及其功能,为进一步研究SAM Mtases基因在植物生理代谢调控中的地位及在植物抗性及药用成分育种上的应用提供参考.

微生物卤化酶及其应用研究进展

由于卤素原子具有强大的电负性,它的存在可以改变化合物的物理化学性质和生物活性。尽管我们可以通过化学反应合成卤化物,但能量消耗大,易对环境造成污染。许多天然化合物含有卤素原子,自然界演化出多种卤化酶来负责这些化合物的卤化。本文综述了目前发现的各种卤化酶及其特征以及催化机理,简介了如何通过人工改造拓宽卤化酶的催化底物和提高其热稳定性两方面的研究进展,为进一步促进卤化酶在工业催化方面的应用提供理论依据。