利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸

目的构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)的原核表达体系,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法将PCR扩增得到的大肠杆菌MAP基因克隆到表达载体质粒pACYCDuet-1中,并在宿主菌E.coli BL21中通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达,酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。

利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸

目的获取大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)基因,构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶的原核高表达载体pACYCDuet-1-MAP,利用大肠杆菌BL21作为宿主菌进行原核表达,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法提取大肠杆菌BL21基因组作为模板,用PCR方法扩增得到大肠杆菌MAP基因,并克隆到载体质粒pGEM-7zf(-)中,将重组质粒pGEM-7zf(-)-MAP转化感受态大肠杆菌DH5α,蓝-白斑筛选及测序验证正确后,将reMAP基因克隆至表达载体质粒pACYCDuet-1,Nco I/BamH I双酶切及PCR验证正确后,将重组表达质粒pACYC-Duet-1-MAP转化至感受态大肠杆菌BL21中,筛选得到阳性克隆通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建re-MAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 Nco I/BamH I双酶切、PCR验证及测序结果表明重组表达质粒pACYCDuet-1-MAP构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明re-MAP和rhIFN-α2b均得到正确表达;酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,切除MET的活性>30 pmol/(μg.min);两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。

(2S,3R)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁酸的合成方法进展

(2S,3R)-2羟基-3-氨基-4-苯基丁酸(AHPBA)是制备Bestatin、Phebestin和Probestin等氨肽酶N(Aminopeptide N)抑制剂的关键中间体。本文从氨基酸法(D-苯丙氨酸、L-天门冬氨酸、苹果酸二酯)、有机金属催化法(双功能铝配合物)、酶催化法(脂肪酶和全细胞酶)以及其它方法对此中间体的合成方法及路线进行综述和分析。经比较,有机催化法、酶法以及苯乙酮法因其具有经济有利、条件温和或路线简单特点,具有潜在的工业化应用前景。同时,未来人们对AHPBA的合成开发将集中在对已有工艺路线的改进与优化。

血清丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰转肽酶、铁蛋白、丙型肝炎病毒核糖核酸定量对聚乙二醇干扰素抗病毒疗效的影响

目的探讨血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(GGT)、血清铁蛋白(SF)、丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量对聚乙二醇干扰素抗病毒疗效的影响。方法选取四川省自贡市第一人民医院2014年1—6月收治的慢性丙型病毒性肝炎患者51例,以ALT值达100 IU/L、GGT值达50 IU/L、SF值达400 ng/ml、HCV-RNA定量达106copies/ml为界将患者分为低ALT、GGT、SF、HCV-RNA组与高ALT、GGT、SF、HCV-RNA组,均给予聚乙二醇干扰素a-2a联合利巴韦林治疗48周,随访24周。在0周时检测血清ALT、GGT、SF、HCV-RNA,在4、12、48及72周检测HCV-RNA以判断疗效。结果聚乙二醇干扰素抗病毒治疗前低GGT、SF、HCV-RNA组较高GGT、SF、HCV-RNA组能获得更好的持续病毒应签(SVR)(P<0.05),而ALT水平与疗效无相关性(P>0.05)。结论慢性丙型病毒性肝炎患者治疗前GGT、SF、HCV-RNA水平与聚乙二醇干扰素的疗效密切相关,提示GGT、SF、HCV-RNA的水平可较准确地预测慢性丙型病毒性肝炎患者聚乙二醇干扰素抗病毒治疗的疗效。

肝动脉介入栓塞术治疗肝血管瘤患者疗效及血清GPDA、GP73和β2-MG水平变化

目的探讨肝动脉介入栓塞术治疗肝血管瘤患者的疗效及血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)、高尔基体蛋白73(GP73)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平的变化。方法2017年1月~2019年1月我院肝病科收治的60例肝血管瘤患者被随机分为介入手术组30例和开腹肝切除术组30例,分别接受经肝动脉介入栓塞术或开腹肝切除术。术后,随访半年。采用ELISA法检测血清GPDA、GP73、β2-MG水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)和甲胎蛋白(AFP)水平。结果介入手术组手术时间和术后住院时间分别为(84.7±21.9)min和(6.7±1.3)d,均显著短于开腹肝切除术组[分别为(126.8±60.5)min和(9.6±5.8)d,P<0.05],术中出血量为(110.7±13.5)mL,显著少于开腹肝切除术组[(315.5±17.8)mL,P<0.05];在术后1 w,介入手术组血清GPDA、GP73、β2-MG、TNF-α、TSGF和AFP水平分别为(62.6±9.8)U/L、(64.3±6.7)μg/L、(1.4±0.5)mg/L、(1.3±0.5)mg/L、(35.5±4.3)U/mL和(2.5±0.6)mg/L,均显著低于开腹肝切除术组[分别为(86.4±11.5)U/L、(112.2±9.3)μg/L,(2.3±0.9)mg/L,(2.1±1.2)mg/L,(61.3±9.8)U/mL和(4.7±0.8)mg/L,P<0.05];介入手术组并发症发生率为13.3%,显著低于开腹肝切除术组(30.0%,P<0.05);在术后随访6 m,介入手术组总有效率为93.3%,显著高于开腹肝切除术组(80.0%,P<0.05)。结论采用肝动脉介入栓塞术治疗肝血管瘤患者疗效较好,且可降低血清GPDA、GP73、β2-MG、TNF-α和TSGF水平,明显改善围术期手术相关指标,减少并发症的发生,具有较高的临床安全性。

孕晚期母体血清IL-2、sIL-2R、P-LAP联合检测对早产的预测价值

目的探讨孕晚期母体血清白细胞介素-2(IL-2)、可溶性白细胞介素2受体(s IL-2R)、胎盘亮氨酸氨基肽酶(P-LAP)联合检测对早产的预测价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月于我院分娩的356例产妇的临床资料,根据是否早产将其分为早产组(48例,分娩时孕周<37周)与非早产组(308例,分娩时孕周≥37周),产妇均于孕晚期检测血清IL-2、s IL-2R、P-LAP水平,并随访至分娩。比较两组产妇的血清IL-2、s IL-2R、P-LAP水平,并分析血清IL-2、s IL-2R、P-LAP联合检测对早产的预测效能。结果早产组血清IL-2、s IL-2R水平显著高于非早产组,血清P-LAP水平显著低于非早产组,差异具有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)显示,血清IL-2、s IL-2R、P-LAP联合检测预测早产的特异度和AUC均高于血清IL-2、s IL-2R、P-LAP单独预测。结论早产产妇孕晚期母体血清IL-2、s IL-2R、P-LAP水平存在异常情况,三者联合检测可作为早产的有效预测方式。

自身免疫性脑炎患儿的临床分析

目的探讨儿童自身免疫性脑炎(AE)的临床特点、治疗及预后。方法回顾性分析2014年12月至2022年9月贵阳市妇幼保健院收治的39例AE患儿的临床资料。结果39例AE患儿中,13例为抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎、1例为抗γ-氨基丁酸B型受体(GABA BR)脑炎、1例为抗二肽基肽酶样蛋白(DPPX)脑炎、1例为抗接触蛋白相关蛋白2(CASPR2)脑炎、1例为抗CV2脑炎,余22例中17例AE患儿的抗体为阴性,5例未进行抗体检测。AE患儿的主要症状为癫痫发作、认知及行为障碍、意识障碍、运动障碍、睡眠障碍及自主神经功能障碍等,所有患儿均未合并肿瘤。39例中有36例患儿行一线免疫治疗,其中24例好转,12例无效;一线免疫治疗无效的4例患儿行二线免疫治疗,其中2例有效,2例无效。结论AE患儿的临床特点总体与成人患者相似,但儿童不同类型抗体AE有其自身特点,肿瘤发生率低,预后相对成人较好。抗体阴性的AE和可能的AE标准具有重要的临床实践价值。

体外循环心脏手术围术期纤溶系统变化的探讨

目的了解体外循环心脏手术围术期机体纤维蛋白溶解系统的变化规律,为临床抗纤维蛋白溶解和体外循环心脏手术围术期用药的监测提供实验依据。方法对79例心脏瓣膜置换术患者根据抗纤溶药物的使用被随机分为2组,即6-氨基己酸组(39例)和抑肽酶组(40例)。为观察患者围术期机体纤溶系统的变化,测定两组患者手术前、手术中主动脉开放后、手术后72h三个时间点外周血中D-二聚体、α2-抗纤溶酶水平。结果(1)横向比较:术前6-氨基己酸组与抑肽酶组血浆中D-二聚体与α2-抗纤溶酶水平(组间)比较均无统计学差异,P>0.05;术中主动脉开放后两组D-二聚体与α2-抗纤溶酶水平比较均有统计学差异,P<0.05;术后72h两组D-二聚体与α2-抗纤溶酶水平比较均无统计学差异,P>0.05。(2)纵向比较:6-氨基己酸组和抑肽酶组(组内)术前与术后D-二聚体与α2-抗纤溶酶水平比较均无统计学差异,P>0.05;而术前与术中、术中与术后72hD-二聚体与α2-抗纤溶酶水平比较均有统计学差异,P<0.05。结论(1)将两组患者术前与术中、术中与术后72hD-二聚体和α2-抗纤溶酶水平分别进行比较,可见其存在较大幅度的波动,这一变化提示围手术期机体纤溶系统存在明显改变,因此应在术中及术后密切监测其变化。(2)横向比较6-氨基己酸组与抑肽酶组纤溶指标,术中主动脉开放后D-二聚体与α2-抗纤溶酶水平都存在显著差异,但术后72h无明显差异,说明两种抗纤溶治疗方式对手术过程中机体纤溶系统的影响是有差别的,而对术后的影响无明显差异。

谷胱甘肽及其酶系与黄磷毒作用关系研究

黄磷急性染毒可使肝脏GSH含量降低,染毒60小时后肝GSR明显抑制,肝GST在染毒早期有诱导倾向,24小时后转为抑制。OTC预处理可明显增加肝GSH含量,缓解黄磷所致的肝GSH降低和血清γ-GT的升高。BSO预处理能明显减少肝GSH含量,加剧黄磷所致的肝GSH降低及血清γ-GT的升高。黄磷亚急性染毒对肝GSH及其代谢酶系影响甚微。

RT肾灵治疗频复发肾病的机理研究

目的 观察RT肾灵对α-GT、NAG、β2-MG的干预作用,探讨RT肾灵保护肾小管-间质损害的机理。方法频复发肾病(FRNS)复发期患者60例随机分为治疗组30例及对照组30例;选取正常人30例作为正常对照组。对照组和治疗组分别在治疗前后清晨8时抽取静脉血,γ-GT、NAG、β2-MG采用ELISA法。结果FRNS患者发作期血浆γ-GT、NAG、β2-MG分别显著高于正常对照组,组内治疗前后有非常显著差异,治疗组和对照组治疗后组间比较有非常显著差异,1年内复发次数比较,治疗组复发次数明显少于对照组,有非常显著差异。结论RT肾灵在治疗及预防FRNS患者肾小管间质损害方面有显著的优势,能显著降低γ-GT、NAG、β2-MG的含量,并且能减少FRNS的复发次数。

地震挤压伤员尿液β2-MG、NAG及AAP联合检测的意义

目的：探讨尿液β2-微球蛋白（β2-MG）、N-乙酰-β- D-氨基葡萄糖苷酶（NAG ）、丙氨酸氨肽酶（AAP）联合检测对诊断地震挤压伤患者肾脏早期损害的临床价值.方法：对我院这次收治5.12 汶川地震伤员标本进行检测,采用免疫比浊法检测尿液β2-MG的含量,连续监测法检测尿液NAG和AAP的活性.结果：地震挤压伤患者尿中β2-MG、NAG、AAP水平均显著高于对照组（P 〈 0.01） 单纯检测上述指标中的一项或两项阳性率较低,联合检测三项阳性率较高.结论：检测尿液β2-MG、NAG、AAP早期肾损害的敏感指标,联合检测对地震挤压伤患者肾脏损伤的早期诊断和疗效观察有重要的意义.

重组羧肽酶G2对甲氨蝶呤在Wistar大鼠体内代谢特征的影响

目的:建立灵敏稳定的高效液相色谱-二级质谱联用法(HPLC-MS/MS),用于同时测定Wistar大鼠血清中甲氨蝶呤(MTX)及其代谢产物2,4-二氨基-N10-甲基蝶酸(DAMPA)含量,并研究重组羧肽酶G2(CPG2)在健康大鼠体内对MTX的代谢特征的影响。方法:采用乙腈沉淀蛋白方法进行样品处理。采用HPLC-MS/MS进行分析。使用Thermo Hypersil GOLDC18(100 mm×2.1 mm,5#m)色谱柱,流动相A为水(含5 mmol.L-1乙酸铵,pH 3.5),流动相B为甲醇(含0.1%的甲酸),梯度洗脱(0～1.5 min,10%B;1.5～2 min,10%B→90%B;2～5 min,90%B;5～7 min,10%B),流速0.2 mL.min-1,柱温20℃;采用ESI+源,MRM离子检测模式,毛细管温度350℃,喷雾电压4.5 kV,鞘气压力172.4 kPa,辅气压力68.95 kPa,CollisionGAS(CAD)68.95 kPa,Curtain GAS(CUR)68.95 kPa,检测离子反应为MTX(m/z 455.2→308.1),DAMPA(m/z 326.1→175.1)。实验动物分为2组,尾静脉给药,单独给药组(MTX 350 mg.kg-1)和联合给药组(MTX 350 mg.kg-1给药5 min后给予CPG2 0.858 mg.kg-1),测定大鼠血清中MTX和DAMPA的浓度,并计算药代动力学参数。结果:血清中MTX和DAM-PA的线性范围均为5～1000 ng.mL-1(r>0.99),定量下限均为5 ng.mL-1。MTX的批内与批间精密度(RSD)为2.23%～14.29%,准确度(RE)为-2.83%～6.61%;DAMPA的批内与批间精密度(RSD)为1.78%～13.88%,准确度(RE)为-1.15%～7.00%。MTX和DAMPA的提取回收率范围分别为87.82%～95.09%和89.70%～96.21%,生物基质不干扰样品的测定,样品稀释后检测无稀释效应。本实验涉及条件下样品稳定。结论:建立的HPLC-MS/MS方法可用于测定大鼠血清样品中MTX及其代谢产物DAMPA的浓度,证实了CPG2在大鼠体内对MTX的酶解作用。

牛磺酸对酒精性肝病防治作用的研究进展

牛磺酸（Taurine）的化学名称为2－氨基乙磺酸，最初从牛的胆汁中分离得到，是一种条件必需氨基酸，它小参与合成蛋白质，而是以游离形式或简单的小肽形式存在丁骨骼肌、心肌、人脑、视网膜等组织中。牛磺酸由甲硫氨酸和半胱氨酸代谢而来，

尿肾功联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的临床意义

n—乙酰-D一氨基葡萄苷酶（NAG）；尿微量白蛋白（MALB）；尿β2微球蛋白（β2-MG）；尿γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）；糖尿病肾病；诊断价值。

尿肾功联合检测对肾脏早期损害的诊断价值

尿肾功组合是我科根据临床需求自2007年始开展的检测项目,它包括:N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿微量白蛋白(mALb)、尿β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)和尿γ-谷氨酰转肽酶(尿γ-GT)四项检测.随着肾脏疾病发病率的不断增加,病人在出现明显临床症状前,存在较长的无症状阶段,而急性肾损伤有较高的发病率和死亡率,普通人群中约为0.5%-1.0%,在住院病人中约为2.0%-7.0%^([1]).

低毒烟曲霉素类药物在医药领域的研究进展

烟曲霉素是从烟曲霉菌的液体发酵培养液中分离纯化得到的一种天然不溶于水的抗生素。烟曲霉素及其衍生物具有抗肿瘤、抗肥胖和治疗微孢子虫病等多种生物活性,被广泛应用于医药领域。本文主要综述了烟曲霉素及其基于C6位结构修饰的几种常见衍生物Fumagillin B,TNP-470,CKD-732及PPI-2458的分子结构性质、生物活性、应用及作用机制等,并对其分离纯化工艺、活性研究和应用前景进行了展望,以期为低毒性烟曲霉素类药物在医药治疗和临床研究领域的进一步应用提供参考。

大强度运动引起大鼠运动性尿蛋白升高机制的研究

测定大鼠力竭运动后即刻及恢复期100min时尿中总蛋白(TP)、尿白蛋白(Alb)、尿β2微球蛋白(β2-MG)、尿γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)排泄率,肾脏组织及肾线粒体膜自由基代谢变化及相关性分析。研究表明,力竭运动诱发肾脏组织自由基作用的加强和自由基清除能力的相对不足,导致肾小球滤过膜、肾小管超微结构的改变和功能下降以及肾线粒体膜结构和功能受损、能量代谢障碍,使蛋白质滤过率增加,而肾小管重吸收减少,从而使大鼠力竭运动后尿蛋白排泄率增加。