甲硫脑啡肽通过阿片受体促进脂多糖作用下奶牛子宫内膜基质细胞的增殖

为明确甲硫脑啡肽(Met-enkephalin,MENK)调控原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cell,BESC)增殖的作用机制,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、MENK和阿片受体拮抗剂共处理细胞进行了本试验。本研究使用的阿片受体拮抗剂包括非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮(naloxone,Nx)、δ阿片受体拮抗剂ICI 154129和μ阿片受体拮抗剂CTAP,分组情况:空白对照组,LPS处理组,LPS与MENK(10-10mol·L^(-1))共处理组(LM组),LPS、MENK和阿片受体拮抗剂(Nx、CTAP和ICI 154129,均为10-10mol·L^(-1))共处理组以及LPS与阿片受体拮抗剂共处理组。检测细胞活性、细胞周期、细胞增殖相关因子基因表达以及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路变化。结果表明:阿片受体拮抗剂单独或与LPS共处理细胞24 h,对细胞活力无影响(P>0.05)。与LM组相比,LPS、MENK和Nx共处理组(LMN组)以及LPS、MENK和ICI 154129共处理组(LMI组)的G1期相对细胞数升高(P<0.05),LMN组以及LPS、MENK和CTAP共处理组(LMC组)S期相对细胞数降低(P<0.05)。与LM组相比,LMN组和LMI组细胞CCN2、TGFB1和TGFB3基因表达下调(P<0.01),LMC组细胞CCN2基因表达下调(P<0.01)。与LM组相比,LMN组cyclinD1和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.05),LMI组细胞β-catenin和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.01),LMC组细胞cyclinD1蛋白表达上调(P<0.05);与LM组相比,LMN组、LMI组和LMC组AKT磷酸化水平升高(P<0.05)。以上结果说明,μ阿片受体和δ阿片受体均参与MENK对BESC的促增殖作用。

紧张性头痛患者血浆甲硫脑啡肽的研究

我们用放射免疫法测定 31例紧张性头痛 ( TH)患者与 2 0例正常对照者的血浆 MEK水平。结果发现 MEK水平在 TH组较正常对照组明显升高 ;TH患者血浆 MEK水平与年龄呈负相关 ( r=- 0 .389,P<0 .0 5)。提示血浆 MEK含量升高可能与

舒天宁冲剂对紧张性头痛患者血浆甲硫脑啡肽的影响

分别用舒天宁冲剂(观察组)和复方羊胶囊(对照组)治疗紧张性头痛,结果观察组总有效率高于对照组;治疗后两组血浆甲硫脑啡肽(MEK)均降低,以观察组为著(P<0.01、0.05)。提示舒天宁冲剂可能通过降低MEK而对紧张性头痛发挥治疗作用。

甲硫脑啡肽放射免疫分析法的研究

本研究建立了测定鼠脑组织中甲硫脑啡肽（ＭｅｔＥＮＫ）的放射免疫分析法，１２５Ｉ标记的ＭｅｔＥＮＫ采用碳化二亚胺法与牛血清蛋白（ＢＳＡ）形成联结物，联结物免疫家兔得到抗血清。抗血清同β内啡肽（βＥＰ）之间的交叉反应小于１％，本方法灵敏度高，可检测的最低限度达到２５ｐｇ，平均回收率为６８％。测定了黄鼠不同脑区的ＭｅｔＥＮＫ含量，垂体中的浓度最高，丘脑中含量次之，海马中最低。

甲硫脑啡肽对人单核细胞抗原提呈功能的影响

将提纯的人单核细胞(Mon)与纯化蛋白衍生物(PPD)和甲硫脑啡肽(M—ENK)共同温育24小时后.观察Mon向同体T淋巴细胞(T)提呈PPD的能力。结果表明,接近生理血浓的M—ENK(10 ^(10)(?)10^(-14)M)能促进T的增殖反应(P<0.01),这种作用可被10^(-6)M的纳络酮所对消。远高于生理血浓的M—ENK(10(-4)～10^(-6)M)则能抑制T的增殖反应(P<0.01)。

慢性紧张性头痛患者脑脊液中甲硫脑啡肽免疫活性（Met－ENK－ir）的测定

慢性紧张性头痛患者脑脊液中甲硫脑啡肽免疫活性（Ｍｅｔ－ＥＮＫ－ｉｒ）的测定慢性紧张性头痛的发病机制至今不明，有资料提示可能存在镇痛系统功能不全和外周组织的异常。２０多年以前就有人设想内源性阿片肽功能的紊乱在慢性痛的发病中起一定作用，但一直缺乏证据。由...

甲硫脑啡肽对脂多糖作用下奶牛子宫内膜基质细胞增殖的影响

为研究甲硫脑啡肽(met-enkephalin,MENK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cell,BESC)增殖的影响,采用CCK-8检测细胞增殖活性,细胞划痕试验观察细胞迁移率,流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测细胞增殖相关因子(VEGF、CTGF、TGF-β1、TGF-β3)m RNA的变化,Western-blot检测Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果显示,LPS将细胞的周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞增殖,显著抑制细胞迁移率和增殖相关因子表达(P<0.05),激活Wnt/β-catenin通路(P<0.05),抑制PI3K/AKT通路(P<0.05);而加入MENK后,细胞活性和迁移率无显著变化,Wnt/β-catenin和PI3K/AKT通路蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:MENK可以促进LPS作用下BESC的增殖,可能是通过调控细胞周期、增殖相关因子及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路发挥作用。

甲硫脑啡肽对脂多糖作用下奶牛子宫内膜上皮细胞增殖的影响

为探究甲硫脑啡肽(methionine enkephalin,MENK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)增殖的影响,利用CCK-8检测细胞增殖活性变化,荧光定量PCR检测细胞增殖相关基因(EGFR、VEGF、TGF-β3、FGF-2)表达,蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路关键因子、c-Myc和Cyclin D1表达。结果显示,LPS单独作用时,细胞活性增强(P<0.05),细胞增殖相关基因表达升高(P<0.05),β-catenin、c-Myc、Cyclin D1表达升高(P<0.05)。MENK能显著抑制LPS诱导的细胞活性(P<0.05)、细胞增殖相关因子及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达(P<0.05);非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮可阻断MENK对细胞活性、细胞增殖相关因子和通路的抑制效应。MENK可抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的增殖作用,该机制很可能由阿片受体介导。

脑室内注射甲硫-脑啡肽对脾交感神经活动的影响

目的：观察第三脑室注射甲硫脑啡肽（ＭｅｔＥｎｋ）对脾交感神经放电活动的影响．方法：３０只雄性ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ大鼠分为５组，每组６只，分别于第三脑室内微量注射生理盐水，ＭｅｔＥｎｋ（１０μｇ，１００μｇ），用电生理学的方法观察脾交感神经冲动放电活动的变化．结果：第三脑室注射ＭｅｔＥｎｋ后，可剂量依赖性地增强脾交感神经冲动放电活动．事先ｉｖ阿片受体阻断剂纳络酮（Ｎａｌ）可以阻断这种效应，但单独使用Ｎａｌ对脾交感神经兴奋性没有影响．在实验中同时观察了ＭｅｔＥｎｋ对血压和体温的影响，发现随脾交感神经冲动数的增多开始后，血压亦有升高，但体温无明显变化．结论：第三脑室内注射ＭｅｔＥｎｋ能显著地增强脾交感神经冲动放电活动。

甲硫-脑啡肽对大鼠DRG分离神经元ATP-激活内向电流的抑制

本研究探讨了甲硫－脑啡肽（ｍｅｔ－Ｅｎｋ）对ＡＴＰ－激活电流（ＩＡＴＰ）的调制作用。实验在大鼠新鲜分离背根神经节（ＤＲＧ）神经元上进行。应用全细胞膜片钳技术所记录的ＩＡＴＰ为内向电流。在被检测的ＤＲＧ神经元中，９０．０％（４５／５０）的细胞对ＡＴＰ有反应。在４５个对ＡＴＰ感的细胞中：对大部分细胞（２９／４５）施加ｍｅｔ－Ｅｎｋ（１０－９～１０－５ ｍｏｌ／Ｌ）也引起一内向电流；少部分细胞（９／４５）为外向电流；其余的细胞（７／４５）未引起可检测的腹反应。预加ｍｅｔ－Ｅｎｋ后ＩＡＴＰ明显地被抑制，此种抑制作用为剂量依赖性的。在预加１０－９、１０－８、１０－７、１０－６、１０－５ ｍｏｌ／Ｌ ｍｅｔ－Ｅｎｋ后，ＩＡＴＰ的抑制分别为：１３．２±５．４％（ｎ＝５）、３９．２±８．６％（ｎ＝８）、５４．１±８．６％（ｎ＝ ８）、４３．３±７．９％（ｎ＝７）；４３．１±７．９％（ｎ＝７）（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）。阿片肽拮抗剂纳洛酮能翻转此种抑制效应。ＩＡＴＰ的量－效关系表明，预加ｍｅｔ－Ｅｎｋ后曲线明显压低，在浓度为１０－３ｍｏｌ／Ｌ时ＩＡＴＰ下降约２５％，而Ｋｄ值几乎不变。

牙髓组织中甲硫氨酸脑啡肽与缓激肽相关性的体外研究

目的:在体外探讨甲硫氨酸脑啡肽(MEK)与缓激肽(BK)的相关性。方法:将大鼠牙髓在Hanks液中与不同浓度的BK共同孵化后测定牙髓组织及培养液中MEK的量。同时,采用生化法于体外将热处理的大白鼠血浆和胰蛋白酶及不同浓度的MEK共同孵化后测定BK值。结果:①与对照组相比,牙髓组织中MEK的量在加入1μmol/L的BK后显著增加,而加入10μmol/L和100μmol/L的BK后无明显变化。从牙髓中释放入培养液的MEK的量随BK浓度的增加而增加。②对大鼠血浆激肽原在胰蛋白酶作用下生成BK,MEK具有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性。结论:在体外BK对MEK的产生和释放起到调节作用,而MEK以负反馈机制抑制BK的生成从而达到镇痛作用。

甲硫-脑啡肽对脾交感神经活动的双向调节作用

目的：观察第三脑室微量注射甲硫－脑啡肽（ｍｅｔ－ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ，Ｍｅｔ－Ｅｎｋ）对脾交感神经放电活动的影响。方法：用ｕｒｅｔｈａｎｅ和α－ｃｈｌｏｒａｌｏｓｅ麻醉的雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠，于第三脑室分别微量注射Ｍｅｔ－Ｅｎｋ１μｇ和１００μｇ。结果：脾交感神经放电活动的双向调节作用，即微量注射１μｇＭｅｔ－Ｅｎｋ时脾交感神经冲动数会减少，而注射１００μｇＭｅｔ－Ｅｎｋ时脾交感神经冲动数会增多。事先静脉注射阿片受体阻断剂纳络酮（ｎａｌｏｘｏｎｅ，Ｎａｌ）均可以阻断这两种效应，但单独使用Ｎａｌ对脾交感神经兴奋性没有影响。随脾交感神经冲动数的增多和减少，血压亦有一定程度的升高和降低，但体温无明显变化。结论：Ｍｅｔ－Ｅｎｋ可以在中枢神经系统内通过阿片受体介导的通路调节脾交感神经的兴奋性。

新生期注射纳洛酮和脑啡肽对幼年大鼠分辨学习的影响

本文用ＳｐｒａｑｕｅＤａｗｌｅｙ人鼠为实验动物，从生后一日龄起每日皮下分别注射１次纳洛酮（１０，５０，１００，２００μｇ／１００ｇｂ．ｗ）、甲硫氨酸脑啡肽（ＭＥＫ）（２０μｇ／１００ｇｂ．ｗ），对照组注射等量的生理盐水。连续注射１４ｄ，观察１６日龄幼鼠的吸乳迷津分辨学习（ＡＤＬ）、３０日龄幼鼠的Ｙ迷津明暗分辨学习（ＢＤＬ）行为与４５日龄幼鼠前脑蛋白含量的变化。结果表明，５０μｇ／１００ｇｂ．Ｗ纳洛酮能显著抑制幼鼠的ＡＤＬ和ＢＤＬ学习能力，使前脑的蛋白质含量降低。２００μｇ／１００ｇｂ．ｗ纳洛酮则可明显促进ＢＤＬ学习能力，前脑蛋白含量增加。ＭＥＫ抑制ＢＤＬ行为，但对ＡＤＬ无明显的影响。实验结果提示在生后脑发育过程中，阿片肽能影响幼鼠的ＡＤＬ和ＢＤＬ行为，其原因可能和脑内蛋肉质含量的变化有关。

针刺对创伤性休克大鼠不同脑区脑啡肽含量的影响

本实验采用结扎大鼠双后肢致创伤休克为模型，用放射免疫方法测定休克前后海马、纹状体、下丘脑、间脑和脑干脑啡肽变化。实验结果如下：（1）创伤性休克时，五个脑区甲硫脑啡肽含量无明显变化，针刺后甲硫脑啡肽含量亦无明显变化。（2）休克动物各脑区亮脑啡肽含量有升高趋势，电针后下丘脑亮脑啡肽含量显著降低。提示在本实验系统内，创伤性大鼠休克的发生可能与中枢亮脑啡肽系统的功能活动有关。而针刺抗休克作用可能是通过中枢LEK水平降低导致微循环功能的改善，使血压回升来实现的。

脑啡肽对大鼠海马神经细胞IL-6基因表达的影响

本文研究了大鼠海马内微量注射甲硫－脑啡肽（Ｍ－ＥＮＫ）对海马细胞的白细胞介素－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）基因表达的影响。大鼠双侧海马内微量注射细菌内毒素脂多糖各１μｌ（ＬＰＳ，浓度：５０ｎｇ／ｍｌ），于９０ｍｉｎ后用原位杂交技术检测到海马结构ＩＬ－６的基因表达，以齿状回颗粒细胞层显著。当海马内预先注射Ｍ－ＥＮＫ（每侧１μｌ，浓度：１０μｇ／μｌ），３０ｍｉｎ后再给予脂多糖则未见ＩＬ－６基因表达。结果表明Ｍ－ＥＮＫ及ＬＰＳ可影响脑内ＩＬ－６的基因表达，在中枢调节机体免疫功能中，ＩＬ－６可能具有重要作用。

头痛宁胶囊治疗紧张型头痛的疗效及生化指标的临床观察

目的观察头痛宁胶囊治疗紧张型头痛的疗效,探讨作用机制。方法将90例紧张型头痛患者随机分为三组,分别给予头痛宁胶囊、氟桂利嗪胶囊和头痛宁胶囊联合氟桂利嗪胶囊,治疗28d,观察治疗前后患者血清中电解质及血浆中甲硫脑啡肽(MEK)浓度的变化。结果头痛宁胶囊对头痛程度、血钾、MEK的降低及镁离子浓度升高优于氟桂利嗪(P<0.01),而头痛宁组与联合组相比上述生化指标浓度的改变无统计学意义(P>0.05)。结论头痛宁胶囊可以改善紧张型头痛患者的头痛程度,其机制可能与降低血清中钾离子,升高镁离子及降低血浆MEK浓度有关。

四种神经肽的反相高效液相色谱法分离

以反相高效液相色谱法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）分离甲硫脑啡肽（ＭＥＫ）、亮脑啡肽（Ｌｅｕ－ＥＮＫ）、强啡肽Ａ１－１７（ＤｙｎＡ１－１７）、胆囊收缩素（ＣＣＫ－８ｓ）。色谱柱为ＺＯＲＢＡＸＣ１８（２．１ｍｍＩＤ×１５０ｍｍ）；流动相：乙腈／水／三氟乙酸（ＴＦＡ），梯度洗脱，紫外检测器检测：ＵＶ２１５ｎｍ。上述条件下，四种神经肽在微克水平得到较好分离。

电针对退变腰椎间盘兔模型M-ENK、β-内啡肽、Netrin-1表达的影响及相关性研究

目的:观察电针对退变腰椎间盘模型兔脊髓背角中甲硫脑啡肽(M-ENK)、β-内啡肽及背根神经节中Netrin-1含量及相关性的影响,探讨电针改善盘源性腰痛的可能作用机制。方法:随机选取4只新西兰大白兔作为正常组,并随机选取12只实验兔予以轴向椎体加压诱导退变腰椎间盘模型,造模成功后随机分为模型组、电针组和假电针组,每组各4只,另随机选取4只不予轴向椎体加压处理作为假模型组。电针组取L_(4)、L_(5)双侧夹脊穴,连接电针仪治疗,疏密波,频率2/15 Hz,强度1~2 mA,20 min/次,1次/d,一疗程6次,共治疗4个疗程;假电针组针刺L_(4)、L_(5)夹脊穴夹持电针但不通电,其余操作同电针组。治疗结束后,Western blot法检测各组实验兔L_(2)脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽以及背根神经节中Netrin-1蛋白表达,直线相关分析法分析M-ENK、β-内啡肽的表达与Netrin-1之间的相关性。结果:与正常组比较,模型组退变腰椎间盘相应背根神经节中Netrin-1蛋白表达明显下降;脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白表达明显增加(P<0.05);与电针组比较,假电针组Netrin-1、M-ENK及β-内啡肽蛋白明显减少(P<0.05)。直线相关分析法Netrin-1蛋白含量与M-ENK、β-内啡肽之间均存在正相关性(R^(2)=0.66、R^(2)=0.51)。结论:电针可上调背根神经节中Netrin-1的表达,改善盘源性疼痛,其作用可能与上调脊髓背角中M-ENK、β-内啡肽的表达有关。

不同浓度乙醇对大鼠脑内内源性阿片肽系统的影响

目的观察用不同浓度的乙醇一次性灌胃1h后大鼠下丘脑、纹状体以及海马内内源性阿片肽即:β-内啡肽(β-endorphine,β-EP),甲硫脑啡肽(met-enkephalin,MENK)、亮脑啡肽(leu-enkephalin,LENK)和强啡肽A(dynorphin A,DynA)含量的变化,并记录大鼠血中乙醇浓度及其痛阈的改变,以探讨乙醇的中枢作用机制与内源性阿片肽的关系。方法成年Wistar大鼠随机分为对照组、低浓度组和高浓度组,低浓度组和高浓度组分别用25.6%(v/v)和51.3%(v/v)的乙醇溶液按10ml/kg一次性灌胃,对照组给予等量生理盐水。结果急性摄入乙醇后,低浓度组和高浓度组大鼠痛阈值均升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,低浓度组大鼠β-EP和MENK的含量在下丘脑内明显增高(P<0.01或P<0.05);高浓度组大鼠β-EP,MENK,LENK在下丘脑、纹状体和海马内含量均显著增高(P<0.01),DynA含量无明显变化(P>0.05)。结论急性摄入乙醇可引起脑内源性阿片肽含量的增加,这可能是导致乙醇急性灌胃后大鼠病阈值升高的原因之一。

慢性乙醇中毒大鼠脑内内源性阿片肽系统含量的改变

目的观察慢性乙醇中毒大鼠下丘脑、纹状体以及海马内源性阿片肽,即β-内啡肽(β-endor-phine,β-EP)、甲硫脑啡肽(met-enkephalin,MENK)、亮脑啡肽(leu-enkephalin,LENK)和强啡肽A(dynorphin A,Dyn A)含量的变化,并记录其血中乙醇浓度的变化,以探讨乙醇对中神经系统的损害与内源性阿片肽系统的关系。方法用成年Wistar大鼠建立慢性乙醇中毒大鼠动物模型。结果慢性乙醇中毒后大鼠下丘脑、纹状体以及海马内β-EP,LENK以及Dvn A含量均有不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),MENK在下丘脑和海马含量变化不大(P>0.05),只有纹状体内MENK的含量降低(P<0.05)。结论慢性乙醇中毒时下丘脑、纹状体以及海马内源性阿片肽含量有不同程度的下降,这可能与乙醇奖赏效应的发生以及学习记忆障碍有关。