邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对雄性幼鼠生精细胞凋亡的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对雄性幼鼠生精细胞凋亡有否影响。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠98只,随机分为14组,7只/组。随机选择1组行生理盐水(0.9%NS 0.2 ml.kg-.1d-1)灌胃喂养3周,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺(CTX 100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)、中剂量(200 mg·kg-1·d-1)、高剂量(300 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周;以及分别按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1、2、3周分组,建立动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精细胞的形态学变化,并应用TUNEL法检查睾丸生精细胞凋亡情况,放射免疫法检测血清性激素(卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T)水平。结果(1)睾丸生精细胞的变化:用药组生精细胞萎缩、发育落后、数量少,线粒体肿胀、空泡化等;在喂养1周的不同剂量组内,随剂量增加生精细胞损害加重,在低剂量不同喂养时间组内,随喂养时间的延长生精细胞损害亦加重;(2)睾丸组织中生精细胞凋亡:与NC组比较,用药组生精细胞凋亡显著增多(P<0.01);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内生精细胞凋亡间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(3)血清性激素水平:与NC组比较,用药组FSH、LH水平升高,T水平下降(P<0.05);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内性激素水平间比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精细胞凋亡有明显影响,且呈时间-量效依赖效应。

邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯对MCF-7细胞DNA的氧化损伤

目的:研究邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono-2-ethylexyl phthalate,MEHP)对人乳腺癌MCF-7细胞DNA氧化损伤的作用。方法:分别用不同浓度的MEHP(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)和二甲基亚砜(溶剂对照,<0.1%)处理MCF-7细胞12和24 h后用MTT比色法检测细胞的存活率。再分别于染毒后1.5、3、6、12和24 h,测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)水平。结果:与对照组比较,MEHP染毒12 h,6.25和12.5μmol/L组细胞的存活率显著增加(P<0.05)。MEHP染毒24 h,在较高浓度处理组(≥25μmol/L)的细胞存活率显著降低(P<0.05);各处理组细胞的SOD活性有所增加,细胞MDA水平、GSH-Px活性以及8-OHdG生成量无显著变化(P>0.05)。当MEHP染毒MCF-7细胞较短时间(1.5、3和6 h)时,各处理组MDA水平和8-OHdG生成量均显著升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性则显著性降低(P<0.05)。结论:一定浓度MEHP作用在短时间内(1.5、3和6 h)可引起MCF-7细胞的氧化应激反应,并触发细胞DNA的氧化性损伤,具体调控机制有待深入研究。

邻苯二甲酸单己酯和邻苯二甲酸单丁酯联合染毒对小鼠睾丸间质细胞氧化应激的影响

目的探讨邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono 2-ethylhexyl phthalate,MEHP)和邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)联合染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM3)的氧化应激损伤。方法用浓度为0(对照组)、1、10、100、500、1000μmol·L^(-1)不同浓度梯度的MEHP和MBP作用于小鼠睾丸间质细胞48h后,以MTT法测定细胞活力,比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果 MEHP和MBP联合染毒对TM3细胞抑制率升高,增殖抑制存在交互作用,表现为协同作用;对细胞内的SOD水平和MDA水平的影响存在交互作用,使细胞内的SOD活性降低,呈现协同作用,使细胞内的MDA水平升高,呈现协同作用。荧光倒置电镜结果显示,高剂量染毒可见大部分细胞死亡,剩余细胞肿胀堆积、变暗,间隙更大。结论 MEHP和MBP联合染毒对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,并诱导小鼠睾丸间质细胞发生氧化应激反应,表现为脂质过氧化水平的增高,同时伴有抗氧化水平的降低。

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对幼鼠生精上皮的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯（Di-2-ethyhhexyl phthalate，DEHP）及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯（single-ethylhexylphthalate，MEHP）对幼鼠生精上皮有否损害。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只，随机分8组，每组12只。随机选择1组行生理盐水（0．2ml·kg-1·d-1，喂养3周）灌胃，作为正常对照组（NC组）；再选1组行环磷酰胺（CTX100mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃，作为阳性对照组（PC组）；余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量（100mg·kg-1·d-1，喂养3周）、中剂量（200mg·kg-1·d-1，喂养2周）、高剂量（300mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精上皮的变化，并应用TUNEL法检查生精上皮凋亡，免疫组织化学法检测睾丸组织中c-kit、P13K的表达，放射免疫法检测血清性激素（卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T）水平。结果睾丸生精上皮的变化：用药组生精上皮萎缩、发育落后，数量少、线粒体肿胀、空泡化等，但在用药的高剂量组短时间内损害与低剂量组长时间的损害一致；①睾丸组织中生精上皮凋亡：与NC组（凋亡指数AI：0．015±0．002）比较，用药组生精上皮凋亡（DEHP和MEHP组的A1分别为：0．051±0．004、0．073±0．005）显著增多（P〈O．01），但在高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；②睾丸组织中c-kit、P13K的表达：与NC组（c—kit：0．389±0．014、P13K：0．457±0．011）比较，用药组睾丸组织中c-kit（DEHP和MEHP组分别为：0．185±0．018、0．165±0．014）及其下游信号分子P13K（DEHP和MEHP组分别为：0．205±0．019、0．189±0．017）的表达显著减少（P〈0．01），但高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异也无统计学意义（P〉0．05）。血清性激素水平：与NC组比较，用药组FSH、LH水平升高，T水平下降（P〈0．05）；但用药的高剂量组与低剂量组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精上皮有明显损害，推测可能对小儿的生精功能也有损害，小儿应避免过多的长期接触含DEHP及代谢产物MEHP的物质。

DEHP及MEHP对小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2_乙基)己酯(DEHP)及其活性中间产物邻苯二甲酸单(2_乙基)己酯(MEHP)对卵巢颗粒细胞及其激素合成、分泌功能的影响。方法:体外培养健康初断乳ICR小鼠的卵巢颗粒细胞,分别加入DEHP(10、50、250nmol/L),MEHP(10、50、250nmol/L)和溶剂对照(DMSO),作用细胞24h。用RT-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和P450侧链裂解酶(P450scc)mRNA水平;用Realtime-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中芳香化酶(CYP19)和过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARβ、PPARγ)mRNA水平;用酶联免疫法(EIA)检测卵巢颗粒细胞上清液中雌二醇和孕酮的水平。结果:与对照组比较,250nmol/LMEHP抑制StAR基因及P450scc基因表达(P均<0.05);250nmol/LDEHP对CYP19基因表达有促进作用(P<0.05);而10、50nmol/LDEHP及50、250nmol/LMEHP对CYP19基因表达均有抑制作用(P<0.05)。除10nmol/LDEHP外,DEHP及MEHP其它浓度组均能抑制PPARα、PPARβ基因的表达(P<0.05);10nmol/LDEHP及MEHP对PPARγ基因表达有促进作用(P<0.05),而250nmol/LMEHP对PPARγ基因表达有抑制作用(P<0.05)。各剂量DEHP及MEHP均能使颗粒细胞分泌雌二醇增加(P<0.05),10nmol/LDEHP、50及250nmol/LMEHP抑制颗粒细胞分泌孕酮(P<0.05)。结论:DEHP及MEHP影响颗粒细胞类固醇激素合成酶、PPARs的基因表达及分泌功能。

四种蔬菜对DBP和DEHP及其代谢物的吸收累积研究

以不同浓度DBP和DEHP处理的土壤对青菜、菠菜、莴苣和萝卜进行盆栽实验,采用加速溶剂萃取,Qu ECh ERS方法和硅烷衍生化对土壤和蔬菜样品进行前处理,结合气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测技术,分析了4种蔬菜中DBP、DEHP及其单酯代谢物MBP、MEHP从土壤中吸收的残留量分布规律和富集系数。结果表明,生长在高、低两个不同浓度DBP和DEHP土壤中的4种蔬菜都有DBP、DEHP及其代谢物MBP和MEHP的检出。萝卜中DBP和DEHP残留总量(Σ2PAEs)及其代谢物残留总量均明显高于其他3种蔬菜。4种蔬菜对土壤中的DEHP的生物富集因子BCF值都大于1,有明显的富集效应;而对于土壤中DBP有富集效应的则只有萝卜,其他3种蔬菜对DBP的BCF值都远小于1。相关研究结果表明,土壤中的DBP、DEHP能被蔬菜产品吸收富集,并且在体内代谢出毒性比母体更高的单酯产物。