核因子κB活化与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的关系

目的:探讨核因子κB活化对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)基因表达的影响。方法:体外培养THP-1细胞并构建泡沫细胞模型,使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和NF-κB活化抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮(N--αtosyl-L-phenylalan ine chlorom ethy ketone,TPCK)孵育细胞,以RT-PCR法和W estern b lot法测定THP-1源性泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达情况,借助Sandw ich ELISA法观察核因子κB活化/核易位情况。结果:TNF-α可即刻激活NF-κB,并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调;若预先用TPCK孵育,则TPCK可抑制TNF-α对NF-κB的激活,且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小;TPCK延迟孵育则对TNF-α的效应抑制不显著。结论:炎症因子TNF-α可即刻激活NF-κB信号途径,早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达,影响泡沫细胞内胆固醇的流出。

NF-κB在AngⅡ介导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及AB-CA1表达调控过程中的作用研究

目的:探讨核因子NF-κB活化对AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1基因表达、胆固醇含量的影响。方法:体外培养THP-1细胞以构建泡沫细胞模型,以AngⅡ和NF-κB活化抑制剂TPCK孵育细胞;以RT-PCR法、Western blot法测定THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达状态;采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁技术仪检测胆固醇流出的变化;借助Sandwich ELISA法测定核因子NF-κB活化/核易位情况。结果:AngⅡ可即刻激活NF-κB表达活性,并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调;若预先用TPCK孵育,则TPCK可抑制AngⅡ对NF-κB的激活,且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小。结论:AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著增高(P<0·05)、ABCA1表达显著减少(P<0·05)。机制可能与AngⅡ即刻激活NF-κB信号途径,早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达,继而影响泡沫细胞内胆固醇的流出有关。

NF—κB在成人原发性肾病综合征发病中的作用及机制探讨

目的探讨核因子-κB（NF-κB）在成人原发性肾病综合征（PNS）发病机制中的意义，研究PNS患者外周血单个核细胞（PBMC）中NF-κB活性对白细胞介素-8（Interleukin-8，IL-8）水平的调控作用。方法以28例确诊PNS的成人患者（PNS组）和25例健康成人（对照组）为研究对象，抽血、提取PBMC并培养，用酶联免疫吸附法分别检测2组的NF—κB活性吸光度（OD）值及酶联免疫吸附双抗体夹心法检测IL-8的浓度。再分别用NF—κB的特异性激动剂IL-1β和特异性抑制剂TPCK（N—tosy1 Phenylalanine Chlormethy1 Ketone）进行干预后，分别检测两组的NF—κB活性吸光度和IL-8的浓度。结果与正常对照组相比，PNS组NF-κB活性及IL-8浓度均显著增高，差异有统计学意义（P〈0．05），且随着NF—κB活性的增强和抑制，IL-8的浓度也相应升高和降低，两者有直线相关关系（P〈0．05），而正常对照组无此相关关系。结论NF—κB在成人原发性肾病综合征发病中有重要意义，可能是通过调节IL-8的浓度而发挥其致病作用。

肿瘤坏死因子-α对泡沫细胞胆固醇流出及ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对泡沫细胞胆固醇流出途径的影响及可能作用机制。方法采用人组织瘤细胞-1(THP-1)细胞诱导分化形成的泡沫细胞,测定 TNF-α与细胞胆固醇流出的时间、浓度关系。然后给予饱和浓度的 TNF-α刺激,随机将泡沫细胞分成对照组、TNF-α组、对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮(N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone,TPCK)组及TPCK+TNF-α组,以 RT-PCR 法、Western blot 法测定细胞 ATP 结合盒转运子 A1(ABCA1)的表达。结果 TNF-α抑制细胞胆固醇流出呈时间、浓度效应,在10.0ng/ml 时,TNF-α抑制胆固醇流出达到饱和效应。10.0 ng/ml TNF-α刺激后以时间依赖方式下调 ABCA1表达。TPCK 预孵育后可部分逆转 TNF-α对 ABCA1表达的下调。结论炎症因子 TNF-α可通过抑制 ABCA1的表达而减少细胞胆固醇的流出,核因子_KB(NF-_KB)激活抑制剂 TPCK 可逆转 TNF-α的上述影响,提示 TNF-α抑制 ABCA1表达与 NF-_KB 激活有关。TNF-α/NF-_KB 信号途径可抑制泡沫细胞的胆固醇流出,从而加重细胞内胆固醇的蓄积。