改良亚甲基蓝碱性品红染色法显示新型冠状病毒肺炎肺组织中病毒包涵体

严重急性呼吸综合征冠状病毒-2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球范围内持续蔓延。根据血清型和基因组特点,冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属,SARS-CoV-2是一种属于β属的新型冠状病毒[1]。在某些病毒感染的细胞内,用普通光镜可看到大小和数量都不同的圆形或不规则小体,称为病毒包涵体,可用特殊的病毒包涵体染色法明确有无病毒感染。笔者通过查阅资料使用改良亚甲基蓝碱性品红染色法显示COVID-19肺组织中病毒包涵体,并经多次实验发现染色过程中对分化程度的掌握至关重要,现介绍如下。

血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进

1 方法用酸性α-醋酸萘酯酶法(简称ANAE法)检测血液中的T淋巴细胞及其亚群,以观察机体的细胞免疫功能,已广泛用于组织学中的细胞化学及相关的动物实验中.由于α-醋酸萘酯酶易受时间、温度及pH值等多种因素的影响,故作者在常规染色的基础上,对几个主要步骤进行了改进,效果较好.其方法是:(1)取末梢血制成涂片,室温干燥;(2)于4℃甲醛-丙酮固定液(pH6.0)固定45s;

不脱钙骨及种植体骨磨片不同染色方法的选择与应用

目的:探讨制作不脱钙骨及带种植体骨磨片时甲苯胺蓝染色法、亚甲基蓝-酸性品红法及Goldner’s三色法的特点与选择。方法:取本实验室自2010年-2015年以来制作的100余张骨缺损修复或带种植体骨组织磨片,通过骨修复材料矿化成骨的数量、面积,以及新骨形成的方式,软组织清晰度,种植体骨结合等几方面,对比分析经三种染色方法染色的骨磨片和带种植体骨磨片,确定针对不同研究目的和修复方法的最适合染色法。结果:对照3种染色方法的染色结果,发现:1、亚甲基蓝-酸性品红法比较适合于:(1)测量种植体与骨结合面积,(2)复合成骨材料修复骨大面积缺损后成骨的研究,(3)牙龈、骨膜、肌肉等软组织的研究。2、甲苯胺蓝染色法适合于骨缺损修复后新、旧骨的对比观察,以及新骨的数量。3、Goldner’s三色法比较适合于骨缺损修复后新骨形成的过程观察。结论:通过对比甲苯胺蓝染色法,亚甲基蓝-酸性品红法及Goldner’s三色法等三种染色方法在骨缺损修复,以及种植体与骨结合方面的应用。我们认为,要针对实验观察的对象、目的与结果来选择合适的染色方法。

三种不同染色技术在体内组织工程中的组织学研究

目的分析对比三种染色方法在显示新生骨成骨情况的差异性,为体内组织工程研究提供更好的组织学鉴别方法。方法将大节段多孔生物陶瓷/聚乳酸复合支架植入犬4个不同的非骨部位,6个月后取材脱钙,石蜡包埋及切片分别做苏木精-伊红染色、Masson染色和亚甲基蓝-碱性品红染色,在光镜下观察其组织学形态并做比较。结果苏木精-伊红染色下可以清楚的观察到成骨细胞、类骨质等成分;Masson染色胶原纤维及成骨现象着色鲜艳,易于观察;亚甲基蓝-碱性品红染色成骨细胞更加清晰,与周围组织对比明显。结论苏木精-伊红染色更符合常规病理学观察习惯,Masson染色和亚甲基蓝-碱性品红染色在胶原纤维、成骨细胞等成分的观察上更具优势,因此三者结合更有利于镜下组织形态学观察。

人腰椎小关节软骨不同染色方法的差异比较

背景:随着现代病理技术的不断创新及发展,在疾病诊断方面显著减少其误诊率,但特殊染色法依然是病理诊断的最主要手段。目的:比较不同的特殊染色方法显示人腰椎小关节结构的优缺点。方法:收集腰椎手术患者的L4/5小关节软骨标本,行苏木精-伊红染色、番红O染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色、番红-固绿染色,观察软骨结构。结果与结论:苏木精-伊红染色、番红-固绿染色和甲苯胺蓝染色均可清晰观察到关节软骨各层结构。其中苏木精-伊红染色能较清楚显示软骨层、潮线及软骨下骨,软骨细胞核呈蓝紫色。番红-固绿染色清晰显示软骨4层结构:浅层(软骨表面),中间层(细胞圆形,着色较淡,排列规律),柱状细胞层(细胞较大,多核,排列整齐),显示软骨基质呈均匀浅红,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色。而番红O染色软骨层及软骨下骨层分界比较清晰,软骨层呈均匀深红色,细胞染色较淡,与软骨基质分界不明显。Masson染色对胶原纤维较为清晰,但只能大致显示软骨与软骨下骨结构。结果说明番红-固绿染色显示软骨各层和软骨下骨结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚,Masson染色最次。

CARTILAGE- LIKE PHENOMENON IN THE ANTERIOR CRUCIATE LIGAMENT

Objective. To detect histological characteristic of anterior cruciate ligament (ACL) and medial collateral ligament (MCL). Methods. In each of 20 skeletally mature male mongrels and 4 men, the ACL and MCL were examined by standard hematoxylin- eosin procedure and toluidine blue staining for histologic observation. Results. The fibroblasts in medial collateral are elongated to spindle shape and aligned in a row between the bundles of collagenous fibers. Toluidine blue staining is negative. The anterior cruciate ligament demonstrated more heterogenous cell types and arrangement. It had three major cell forms:spindle, round and ovoid type, which were shorter but greater than the cells in medial collateral ligament. Toluidine blue staining was positive in anterior cruciate ligament. Most cells in anterior cruciate ligament were enclosed within lacunae. Conclusion. This study suggests that the ACL has different histological characteristics from MCL, and is more cartilage- like in nature.

肥大细胞染色方法的探讨

肥大细胞颗粒内含有肝素、组织胺、过敏反应慢反应物质和嗜酸粒细胞趋化因子等成分,这些可导致机体的过敏反应。在组织切片中检测肥大细胞,有助于一些疾病如皮肤的色素性荨麻疹和肥大细胞增生症的病理诊断。显示肥大细胞的特殊染色有多种,各有优缺点。本研究比较常用的肥大细胞染色方法甲苯胺蓝染色法和醛品红-橙黄G染色法的优缺点,探讨哪一种方法更适合于临床病理诊断,介绍如下。

快速脱钙骨组织病理切片台盼蓝-伊红染色方法研究

目的研究建立台盼蓝-伊红(trypan blue and eosin,TE)染色法,并用于强酸脱钙后的骨组织病理切片染色,以提高制片质量。方法对10只大鼠胫骨进行5%硝酸脱钙、石蜡包埋、连续切片后,对每份胫骨标本分别进行苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和甲苯胺蓝(toluidine blue,TB)染色及TE染色,比较不同染色方法的骨组织病理切片显微结构染色的差异。结果 10只大鼠胫骨组织标本每只分别进行3种染色,其中HE染色的骨小梁与骨髓分色不明显,骨细胞核无明显着色;TB染色的骨小梁与骨髓分色不明显,骨细胞边界模糊;TE染色的骨小梁显绛红色,骨髓细胞显紫红色,骨细胞陷窝、细胞核、骨小梁及附着的成骨细胞和破骨细胞、骨髓细胞中的巨噬细胞等结构特征清晰可辨。结论本研究所用的TE染色法适用于强酸脱钙处理的骨组织病理制片。

糖尿病大鼠颌下腺肥大细胞数量及转化生长因子β1的表达

背景:研究表明,持续高血糖可导致大鼠颌下腺的细胞出现退行性改变,表现为细胞因子表达增加,糖原代谢改变,分泌功能减弱。关于肥大细胞及转化生长因子β1与糖尿病颌下腺组织病变的关系研究较少。目的:观察糖尿病状态下颌下腺组织中肥大细胞数量与形态变化和转化生长因子β1的表达。方法:雄性SD大鼠32只,随机分为实验组和对照组,实验组注射四氧嘧啶成模后的4,8,12周测量体质量和血糖,并与对照组大鼠一同取下颌下腺组织做苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色观察并计数肥大细胞,SP免疫组织化学染色方法检测转化生长因子β1棕黄色阳性细胞数量。结果与结论:①肥大细胞在正常鼠及糖尿病鼠颌下腺组织中均有表达,实验组与对照组比较肥大细胞数随病程延长而增多,实验组不同时期明显多于对照组(P<0.01)。②转化生长因子β1阳性细胞数在正常大鼠及糖尿病大鼠颌下腺的腺泡细胞、颗粒曲管及纹状管细胞中均有表达,阳性颗粒位于胞浆内,糖尿病时,随病程延长而增多,实验组不同时期明显多于对照组(P<0.01)。结果可见糖尿病大鼠颌下腺中肥大细胞与转化生长因子β1表达增强与糖尿病病程呈正相关。

胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化获取关节软骨细胞

背景:近年来,众多研究欲采用体外分离培养的关节软骨细胞作为修复缺损的关节软骨的种子细胞,然而,获得纯化的具有生物活性的关节软骨细胞较为困难。目的:拟运用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶联合消化获取关节软骨细胞。方法:从SD大鼠的正常股骨及胫骨关节表面获取关节软骨,先后运用0.25%的胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶消化,显微镜下见大量细胞游离后,弃去大块的未消化的关节软骨碎片,离心,去上清,PBS洗涤2次后,加入软骨细胞原代培养液进行培养、增殖。应用甲苯胺蓝及苏木精-伊红染色方法检验所得细胞是否为关节软骨细胞。结果与结论:在严格掌握酶的浓度及消化时间的前提下,通过0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶联合酶解关节软骨的方法,成功从大鼠股骨及胫骨关节软骨内分离培养出细胞,并经过甲苯胺蓝染色及苏木精-伊红染色证实,所得的细胞为具有生物活性的关节软骨细胞。

软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质体外相容性的研究

目的探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨。方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量。异体绵羊关节软骨细胞分离、体外扩增,并与软骨微粒脱细胞基质混合体外培养0～35d,倒置显微镜及扫描、透射电镜观察,同时测定羟脯氨酸,氨基葡聚糖,DNA含量及细胞黏附率。结果软骨微粒脱细胞基质只含有基质成分,直径0.100～0.154mm,胶原,氨基葡聚糖及DNA含量分别为204.4±3.1μg/mg,18.3±2.0μg/mg和0.042±0.013μg/mg。异体软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,二者形成的复合物中胶原、氨基葡聚糖及DNA含量于第7d与0d相比具有统计学意义(P<0.05),分别与14d(胶原、DNA)和21d(氨基葡聚糖)达高峰,随后维持在高水平。细胞黏附率为92%。结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,为组织工程方法再造软骨提供又一支架材料。